鸡卵泡颗粒层组蛋白H3K4me3和H3K27me3的表达研究

卵母细胞成熟过程受组蛋白H3K4me3(trimethylation of lysine 4 on histone 3)和H3K27me3(trimethylation of lysine 27 on histone 3)及其相关的甲基化和去甲基化酶的调控,因此考虑对鸡的卵泡发育也存在一定的影响。选取“苏禽3号”配套系第一母本为研究对象,采用Western blot法探究组蛋白H3K4me3和H3K27me3在鸡卵泡不同发育阶段颗粒层中蛋白的表达模式。结果表明：在苏禽3号卵泡颗粒层中,组蛋白H3K4me3在卵泡发育不同阶段表达模式呈降低→升高→降低→升高的波浪形趋势,波浪变化较为平缓,在F5、F2和F1 3个表达高点的表达量与SWF(small white follicle)、LWF(large white follicle)、SYF(small yellow follicle)和F3 4个表达低点的表达差异显著（P<0.05）。组蛋白H3K27me3在不同发育阶段表达模式亦呈波浪形表达趋势,波浪变化起伏较明显,在SWF、SYF和F33个表达高点的表达量与F5、F4、F1和F2 4个表达低点的表达差异显著（P<0.05）。相关性分析显示,组蛋白H3K4me3与H3K27me3在不同发育阶段卵泡颗粒细胞中的表达呈较强的负线性相关(R=-0.808,P=0.000)。结果提示：组蛋白H3K4me3和H3K27me3在不同发育阶段卵泡颗粒层中的表达具有组织差异性,呈负相关的动态修饰性,可能共同协调卵泡生长过程中各基因的表达与功能,研究结果为鸡繁殖性状调控机理提供了理论依据。     

SETD2在猪卵母细胞体外成熟中的作用

SETD2是H3K36me3特异性甲基转移酶,参与组蛋白甲基化修饰,并通过调节多种基因的表达影响细胞功能。为探究SETD2在猪卵母细胞体外成熟（in vitro maturation,IVM）过程中的表达规律及作用,通过免疫荧光染色检测SETD2及H3K36me3在猪卵母细胞IVM过程中各个时期（GV、MⅠ、MⅡ期）的表达定位情况;在GV期显微注射SETD2干扰RNA(SETD2-siRNA)构建干扰模型,检测干扰后对SETD2、H3K36me3、DNA双链断裂标志物（γH2AX）以及第一极体（PBI）排出率的影响;通过qPCR技术检测干扰后对DNA甲基化转移酶DNMT3B、凋亡和抗凋亡相关基因BAX、BCL2表达的影响。结果表明：SETD2信号GV期聚集在DNA周围,MⅠ和MⅡ期均在细胞质中表达,而H3K36me3在整个减数分裂过程中均与核共定位;进一步研究发现,SETD2-siRNA干扰后显著降低了SETD2和H3K36me3表达水平,增加了γH2AX表达（P<0.05）,同时显著降低PBI排出率（P<0.05）;qPCR结果显示,SETD2-siRNA干扰后DNMT3...     

H3K9me3对猪卵母细胞体外成熟和早期胚胎发育的影响

H3K9的异常甲基化被认为是影响胚胎发育障碍的主要表观遗传修饰之一. 毛壳素是 H3K9me3的特异性抑制剂,能抑制其甲基转移酶SUV39H1/2和G9A的活性,下调 H3K9me3水平.本实验通过在猪卵母细胞体外成熟过程中添加毛壳素, 探究调控 H3K9me3对猪卵母细胞体外成熟和早期胚胎发育的影响. 在0～22h用...     

拟南芥H3K27甲基转移酶CLF响应环境温度和参与温度形态建成研究

目的 探索拟南芥H3K27甲基转移酶CURLY LEAF(CLF)在温度形态建成中的作用。方法 在不同温度条件(22和16 ℃)下,对拟南芥Arabidopsis野生型Col-0和突变体clf-29进行表型分析和转录组分析,筛选差异表达基因。结果 在不同温度条件下,clf-29表现出显著的表型差异,相较于22 ℃,16 ℃时clf-29和Col-0的表型差异更小。转录组分析发现CLF的缺失会导致大量基因表达差异,并将其分为4种类型(仅在Col-0显著上调、下调,仅在clf-29突变体显著上调、下调),包含96个温度响应基因。结论 拟南芥表观遗传调控因子CLF响应环境温度,并参与温度形态建成。     

孕鼠DEHP暴露影响胎儿早期卵母细胞H3K27me3表达的研究

本文以胎鼠卵母细胞为研究对象,分析了妊娠母鼠孕期暴露邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)对胎鼠卵母细胞早期发育过程中组蛋白甲基化修饰程度的影响,结果发现:妊娠母鼠在12.5 dpc到16.5 dpc 期间暴露40 μg/kg DEHP,第一次减数分裂前期的胎鼠雌性生殖细胞的H3K27me3表达受到了显著影响,导致H3K27me3强阳性细胞比例显著减少.该研究结果说明DEHP可通过孕鼠影响胎鼠卵母细胞早期发育过程中的组蛋白甲基化修饰.     

多梳蛋白复合体PRC2调控水稻发育的研究进展

多梳蛋白复合体PRC2(polycomb repressive complex 2)通过三甲基化组蛋白H3第27位赖氨酸(H3K27me3)抑制基因的表达,在表观调控过程中发挥了重要作用。水稻中,PRC2参与水稻株高、花期、育性和粒重等性状的调控,维持水稻正常发育。本文总结并讨论了近年来PRC2调控水稻发育方面的研究进展,为进一步探索水稻PRC2功能及其作用机制提供参考。     

过表达H3K9me3 去甲基化酶对猪克隆胚胎体外发育效率的影响

为了探索过表达组蛋白H3K9me3去甲基化酶KDM4B/KDM4D对猪克隆胚胎体外发育效率的影响,研究构建了鼠源KDM4B/KDM4D表达载体,通过体外转录获得KDM4B/KDM4D mRNA并将其分别显微注射至猪克隆胚胎。结果显示两组注射的克隆胚胎的H3K9me3水平、卵裂率和囊胚率与对照克隆胚胎无显著差异,但两组注射的克隆胚胎的H3K9me3去甲基化酶表达水平显著高于无注射的对照克隆胚胎,且注射KDM4B mRNA的克隆胚胎的囊胚细胞数显著高于注射KDM4D mRNA的克隆胚胎及对照克隆胚胎,表明过表达组蛋白H3K9me3去甲基化酶KDM4B可以显著提高猪克隆胚胎的体外发育效率。     

动物组蛋白H3K4三甲基化转移酶MLL3的生物信息学分析

[目的]对动物组蛋白H3K4三甲基化转移酶MLL3进行生物信息学分析。[方法]利用生物信息学的方法,对小鼠MLL3的基因结构、氨基酸序列、系统进化树、染色体定位和共线性等问题进行分析。[结果]编码合成的小鼠MLL3蛋白质一级结构包括7个锌指结构域、1个HMG-box(高迁移率族蛋白)、1个FYRN(N-末端富含苯丙氨酸或酪氨酸区域)、1个FYRC(C-末端富含苯丙氨酸或酪氨酸区域)、1个SET域和1个postSET域;从序列对比和同源性上发现,该研究中的19种动物都基本上具有这些结构,说明这些结构在进化上是相对保守的,其中SET域具有高度的保守性,是维持组蛋白甲基化酶活性所必须的;从系统发生上看,19种动物在进化树上的位置与其分类地位相一致;在共线性分析中,虽然小鼠和人的MLL3基因位于不同的染色体上,但其上游和下游具有相同的基因,说明小鼠和人的MLL3基因具有共线性。[结论]不仅揭示了MLL3的核苷酸序列及其氨基酸序列的一级结构,为以后研究其高级结构和蛋白质的功能奠定了基础;同时也为后期进行小鼠MLL3基因的引物设计、启动子分析、基因的克隆、定位和表达的调控模式研究奠定了基础。     

CD-1小鼠海马H3K9三甲基化水平的年龄化改变 及其与认知功能改变的相关性研究

探讨年龄对CD-1小鼠海马组蛋白H3K9三甲基化(H3K9me3)含量的影响及其与空间学习记忆能力改变的相关性。结果发现,18月和12月龄鼠在放射状水迷宫中学习期和记忆期的潜伏期、错误数均高于6月龄鼠(P_s0.05);18月龄鼠学习期及记忆期的错误数还高于12月龄鼠(P_s0.05)。18月龄鼠海马DG和CA1区H3K9me3水平高于12月龄鼠(P_s0.05),12月龄鼠也高于6月龄鼠(P_s0.05)。DG和CA1区H3K9me3相对含量与学习期的潜伏期和错误数以及记忆期错误数呈正相关(P_s0.05),而CA3区H3K9me3相对含量与学习期和记忆期的错误数、潜伏期之间无明显相关性(P_s0.05)。以上结果提示,CD-1小鼠年龄相关空间学习记忆损害可能与海马组蛋白H3K9me3升高有关。     

BIX-01294对山羊胎儿成纤维细胞生长状态和组蛋白H3K9二甲基化的影响

为探讨BIX-01294对供核细胞的影响,使用不同浓度的BIX-01294处理山羊胎儿成纤维细胞(Goat embryonic fibroblasts,GEFs),并检测其细胞活力、细胞周期、细胞凋亡、H3K9me2水平和多能性基因的mRNA水平。细胞活力检测结果显示,BIX-01294浓度在1.0μmol/L以下不会影响细胞活力,2.0μmol/L时24h和48h处理组的细胞活力显著下降(P0.05),≥4.0μmol/L时所有处理组的细胞活力均极显著下降(P0.01)。细胞周期和凋亡检测结果显示,H3K9me2下调会引起细胞周期的停滞和正常细胞的减少,其中BIX-01294在大于2.0μmol/L时G0/G1期细胞的比例极显著升高(P0.01),4.0μmol/L时凋亡细胞极显著增加(P0.01)。处理后的细胞H3K9me2水平均极显著下降(P0.01),但大于1.0μmol/L的处理浓度能获得较好的下调效果。处理后细胞Oct4、Sox2和Nanog的mRNA水平均有不同程度的增加,其中Oct4和Nanog的mRNA水平增加极显著(P0.01)。说明:采用1.0μmol/L BIX-01294处理山羊胎儿成纤维细胞,可以下调H3K9me2水平,增加G1/G0期细胞比例,上调细胞多能性基因表达量,而且不影响细胞活力。     

动物组蛋白H3K4三甲基化转移酶MLL3的生物信息学分析(英文)

[目的]对动物组蛋白H3K4三甲基化转移酶MLL3进行生物信息学分析,从而探寻其相对保守的进化过程以揭示组蛋白H3K4三甲基化转移酶MLL3在在人类癌症的中的作用。[方法]利用生物信息学的方法,对小鼠MLL3的基因结构、氨基酸序列、系统进化树、染色体定位和共线性等问题进行分析。[结果]编码合成的小鼠MLL3蛋白质一级结构包括7个锌指结构域、1个HMG-box(高迁移率族蛋白)、1个FYRN(N-末端富含苯丙氨酸或酪氨酸区域)、1个FYRC(C-末端富含苯丙氨酸或酪氨酸区域)、1个SET域和1个postSET域;从序列对比和同源性上发现,该研究中的19种动物都基本上具有这些结构,说明这些结构在进化上是相对保守的,其中SET域具有高度的保守性,是维持组蛋白甲基化酶活性所必须的;从系统发生上看,19种动物在进化树上的位置与其分类地位相一致;在共线性分析中,虽然小鼠和人的MLL3基因位于不同的染色体上,但其上游和下游具有相同的基因,说明小鼠和人的MLL3基因具有共线性。[结论]不仅揭示了MLL3的核苷酸序列及其氨基酸序列的一级结构,为以后研究其高级结构和蛋白质的功能奠定了基础;同时也为后期进行小鼠MLL3基因的引物设计、启动子分析、基因的克隆、定位和表达的调控模式研究奠定了基础。     

H3N2亚型SIV血凝蛋白单克隆抗体的制备

【目的】制备H3N2亚型猪流感病毒(SIV)的单克隆抗体,为SIV的鉴别诊断奠定基础。【方法】将A/swine/Henan/1/2010(H3N2)猪流感病毒初步浓缩后,免疫6周龄的BALB/c小鼠,取小鼠脾细胞与瘤细胞NS0融合,采用间接ELISA方法筛选杂交瘤细胞,对杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体进行Western blot检验和抗原结合活性检测。【结果】经过3次有限稀释法克隆纯化,最终得到1株能稳定分泌单克隆抗体的阳性细胞株,命名为1C10,经检测其腹水抗体效价为1∶51 200。单克隆抗体亚型鉴定结果表明,1C10为IgG1亚型,轻链类型为κ链。Western blot检测结果表明,这株单克隆抗体能与H3N2特异性结合,而且能特异性识别血凝素蛋白(HA),而不与H1N1亚型猪流感病毒、伪狂犬病毒、猪圆环病毒2型、猪细小病毒发生交叉反应。【结论】制备获得1株抗猪流感H3N2病毒HA蛋白的单克隆抗体,可用于猪流感病毒鉴别诊断方法的建立。     

C 2H 5N 4- C 6H 3N 3O-7氢键相互作用的理论研究

运用密度泛函理论方法,在B3LYP/6-311++G**水平上对4-氨基-1,2,4-三唑阳离子(AT)和2,4,6-三硝基苯酚阴离子(PA)形成的氢键二聚体进行理论计算研究.计算得到4种稳定结构的氢键复合物及最稳定异构体D1的振动频率、电子吸收光谱与热力学性质.结果表明,氢键复合物中存在较强的N—H…O与C—H…O红移氢键.经过基组重叠误差和零点振动能校正后,D1的氢键相互作用能为-30.71kJ/mol.热力学计算显示,在298.15K和标准状态下,D1气态氢键复合物分子的形成过程是放热、熵减小的非自发过程,但在低温下能自发进行.D1分子的标准摩尔生成焓和标准摩尔生成自由能分别为98.7,474.4kJ/mol.     

利用反向遗传技术对H_3N_2亚型流感病毒NA基因突变的研究

为了拯救出H3N2亚型流感病毒的重组新病毒,利用反向遗传学手段,8个质粒共同转染293T细胞,包装带有双点突变（第119位氨基酸由E突变为V,第222位氨基酸由I突变成L）、单点突变和野生型的流感病毒H3N2;在MDCK细胞中传代包装成的H3N2病毒。结果表明,野生流感病毒H3N2和其突变株包装成功,第119位氨基酸单点突变型滴度与野生型的相近,而第222位氨基酸单点突变和双突变型滴度要比野生型的低。本实验成功证明了H3N2神经氨酸酶上两个位点（第119和222位氨基酸）对病毒包装及复制起到关键的作用,且NA上第222位氨基酸相对于第119位氨基酸显得要更重要。     

STAT3表达与肿瘤关系的研究进展

STAT3是STATs家族的重要成员,在多种恶性肿瘤中高表达,通过抑制细胞凋亡等机制促进肿瘤的发生和发展。本文综述了STAT3的结构、生物学特点、在人类常见恶性肿瘤中的表达及其意义的研究进展。     

KF/K2CO3/γ-Al2O3催化合成反式阿魏酸的研究

[目的]对KF/K2CO3/γ-Al2O3催化合成反式阿魏酸进行研究。[方法]以香兰素和丙二酸为原料,KF/K2CO3/γ-Al2O3为催化剂,经Knoevenagel缩合反应催化合成反式阿魏酸,考察反应时间、香兰素与丙二酸物质的量之比和催化剂用量等条件对反式阿魏酸收率的影响。[结果]催化合成的最佳工艺条件为:香兰素7.6 g(0.05 mol),n(香兰素)∶n(丙二酸)=1∶1.20,KF/K2CO3/γ-Al2O31.00 g,乙酸正丁酯25 ml,反应时间2 h;在此条件下,产品收率达到65%以上,且催化剂可以重复使用6次,收率依然超过60%。[结论]KF/K2CO3/γ-Al2O3具有良好的催化活性。     

冬季牛舍中三种吸附剂对NH3、CO2和H2S的吸附

[目的]选用三种不同孔径分子筛吸附剂对冬季奶牛圈舍中CO2 、NH3和H2S吸附试验.[方法]用便携式气体检测仪检测排风扇口排出的CO2 、NH3和H2S浓度,悬挂吸附剂的为试验组,不悬挂吸附剂的为对照组.两者之差即为吸附剂XF-1、XF-2、XF-3的吸附浓度,根据实际测得的气温、气压、风速,利用理想气体状态方程推导出公式,将mg/kg换算为mg/m3.当试验组与对照组浓度无差异性时停止试验.[结果]1 kgXF-1吸附剂可吸附CO2 70.91 g、NH3 2.29 g、H2S1.57 g;1kg XF-2吸附剂可吸附CO2 75.49 g、NH3 2.65g、H2S 1.65 g;1kg XF-3吸附剂可吸附CO2 85.95 g、NH3 2.87 g、H2S 1.88 g.[结论]三种吸附剂对CO2 、NH3和H2S气体的吸附量与圈舍内相应气体浓度正相关性显著(P＜0.05),与温湿度负相关性不显著(P＞0.05).吸附剂的吸附能力与总孔体积、比表面积成正比,吸附剂XF-3对气体吸附能力最强,吸附剂XF-1最弱.三种吸附剂在1～3h吸附效果最好,此后缓慢下降,吸附剂XF-1悬挂30 h需要更换,吸附剂XF-2悬挂27h需要更换,吸附剂XF-3悬挂25h需要更换.     

一株H3N2亚型猪流感病毒的分离鉴定

为了给猪流感疫苗的研制做准备,试验将从某猪场现地采集疑似猪流感发病猪的鼻拭子样品,经过处理后接种至10～11日龄SPF鸡胚进行盲传,分离到1株具有血凝性的病毒.通过血清学、分子生物学鉴定、电镜观察、动物回归试验等方法对该病毒进行鉴定.结果发现:该病毒可与猪流感病毒H3亚型阳性血清特异性结合;通过分子生物学检测,该分离株...     

O3/H2O2处理受污染源水中有机物的试验研究

分析磁浮车地无线系统现状及车地无线网络承载业务的需求,对比WLAN技术和LTE-M技术的特点,提出基于LTE-M技术的综合承载网络方案设计,包括网络工作频段的使用、网络架构、网络的覆盖、容量、频率资源规划、基本网元的部署以及车载天线的配置。     

不同佐剂H3N2亚型猪流感灭活疫苗的免疫效果比较

选用福建分离猪流感A/Swine/Fujian/F1/03(H3N2)毒株为制苗种毒,制成2种不同佐剂灭活疫苗。挑选H3N2亚型猪流感抗体阴性的母猪和断奶仔猪用于检测比较2种灭活疫苗的免疫效果。结果表明:IMS1315佐剂灭活疫苗首免母猪和断奶仔猪7d后均可检测到HI抗体,二免28d后抗体水平最高,其中母猪的抗体均值为11.0Log2,断奶仔猪的抗体均值为10.2Log2,二免150d后仍维持在较高抗体水平,均值在6.5Log2以上;医用白油佐剂灭活疫苗首免母猪和断奶仔猪14d后均可检测到HI抗体,二免28d后抗体水平达最高,其中母猪的抗体均值为10.2Log2,断奶仔猪的抗体均值为10.0Log2,二免150d后抗体水平均值在6.0Log2以上。表明2种不同佐剂灭活疫苗不论免疫母猪还是仔猪,均具有较长的抗体消长期,但IMS1315佐剂灭活疫苗产生抗体略好于医用白油佐剂灭活疫苗。