真核细胞翻译起始因子5A(eIF5A)研究进展

真核细胞翻译起始因子5A(eIF5A)是真菌、动植物体内普遍存在的蛋白质翻译起始因子。研究发现其不仅仅在部分蛋白质翻译起始中发挥作用,还在人体癌症发生、促进动植物细胞增殖、细胞衰老和死亡以及一些植物环境胁迫应答等方面都有一定的调控作用。进一步研究真核细胞翻译起始因子5A(eIF5A)的功能,对其生产实践中应用具有非常重要的意义。     

真核翻译起始因子4A研究进展与展望

真核翻译起始因子4A(eIF4A)蛋白属于DEAD-box RNA解旋酶家族,具有RNA依赖的ATP酶活性和ATP依赖的RNA解旋酶活性。脊椎动物中已经鉴定出三种eIF4A:eIF4A1、eIF4A2和e IF4A3。除参与翻译起始,eIF4A家族成员在胚胎发育等多种生命过程中也发挥着重要的作用。虽然三种eIF4A在序列上高度相似,但它们的作用不尽相同。eIF4A成员作用的独特性和多样化通常由相互作用的结合蛋白来调节。本文将eIF4A家族成员的最新研究进展,特别是e IF4A成员各自独特的作用作一综述。     

蛋白质翻译起始因子的作用与调控

 蛋白质翻译起始因子是一类在真核细胞中蛋白质翻译所必需的、保证正确的mRNA－核糖体复合物形成的蛋白质,已知的起始因子共有12种,在真核细胞翻译起始阶段有重要作用。蛋白质合成的调节主要通过翻译起始因子的磷酸化进行。真核细胞蛋白质翻译最重要的调节位点是翻译起始因子eIF 2和eIF 4。本文主要综述了近年来关于蛋白质翻译起始因子的作用及调控的最新研究进展     

凡纳滨对虾eIF5A基因的克隆及表达分析

真核细胞翻译起始因子5A(eIF5A)是真核生物细胞内的蛋白质翻译起始因子.近年来的研究发现eIF5A在动植物细胞衰老死亡、环境胁迫应答和免疫应答等过程中起着重要的调控作用.通过对凡纳滨对虾cDNA文库进行测序,首次获得了包含eIF5A完整的氨基酸序列的cDNA.该cDNA包含474 bp的开放阅读框,编码157个氨基酸,预测分子量约为17.257 ku,理论等电点为5.06.凡纳滨对虾eIF5A和其他物种对比结果显示,该基因的氨基酸序列和其他物种有较高的同源性.实时定量RT-PCR结果显示,eIF5A基因在凡纳滨对虾不同组织中的mRNA表达没有明显的差异.对WSSV、TSV和IHHNV感染的凡纳滨对虾的肝胰腺的实时定量RT-PCR结果显示,病毒感染的凡纳滨对虾的eIF5A基因的表达明显增加,分别是对照样品表达量的2.2、2.5和1.6倍,表明eIF5A可能涉及凡纳滨对虾的抗病毒免疫应答.     

番木瓜eIF4E家族蛋白的亚细胞定位

真核翻译起始因子eIF4E是多种病毒侵染植物的必须因子。笔者通过扩增番木瓜eIF4E家族基因Cp-eIF4E和Cp-e IFiso4E,分别构建他们与绿色荧光蛋白(GFP)融合的植物表达载体,转化烟草叶片的原生质体后研究了番木瓜eIF4E家族蛋白的亚细胞定位情况。结果表明,Cp-eIF4E和Cp-e IFiso4E在细胞质和细胞核中均有表达。本研究为进一步探讨番木瓜eIF4E家族蛋白与病毒的互作机制以及解析其在病毒侵染中的功能奠定了理论基础。     

兰花eIF5A基因家族鉴定与生物信息学分析

为了系统分析兰花真核翻译起始因子5A(Eukaryotic translation initiation factor 5A,eIF5A)基因家族在兰花中如何发挥作用,利用兰花基因组数据库,通过生物信息学的方法,鉴定兰花eIF5A基因家族的基因结构、编码蛋白和磷酸化位点预测,通过序列比对进行进化分析。结果表明,兰花eIF5A基因家族含有eIF5A1和eIF5A2两个基因,分别含有5个和6个外显子。MEME保守基序分析显示,兰花eIF5A1和eIF5A2蛋白均含有1个保守的DNA结合寡核苷酸结合结构域(PF01287)。磷酸化位点预测分析表明兰花eIF5A1和eIF5A2蛋白均含有大量的潜在磷酸化位点。以上结果将为今后揭示兰花eIF5A1和eIF5A2蛋白的功能提供重要的线索。     

拟南芥翻译起始因子eIF5B-1调控种子萌发的分子机制

为明确eIF5B-1基因在拟南芥种子萌发过程中的生理作用。以拟南芥翻译起始因子的T-DNA插入突变体eif5b-1为材料。测定突变体eif5b-1种子的萌发速率,同时利用多聚核糖体谱和qRT-PCR的研究方法,对拟南芥野生型(WT)和eif5b-1突变体的萌发过程进行了研究。结果表明:1)eif5b-1突变体种子的萌发率下降;2)eif5b-1突变体种子萌发过程中多聚核糖体的形成受到影响;3)eif5b-1突变体中ABI1、ABI3、ABI4、ABI5及DOG1基因的转录受到影响;4)eif5b-1突变体选择性地影响ABI4和DOG1基因的翻译效率。     

CCX-CKR表达水平与结直肠癌患者术后生存率的相关性研究

采用免疫组织化学法检测结直肠癌患者手术标本中CCX-CKR表达水平,分析3年临床外科163例结直肠癌患者资料,探索结直肠癌肿瘤标本中CCX-CKR表达水平与患者术后生存率之间的相关性。结果表明:结直肠癌肿瘤组织中CCX-CKR的表达水平显著低于配对正常结直肠黏膜组织中的表达水平,I、Ⅱ期结直肠癌肿瘤组织较Ⅲ、Ⅳ期肿瘤组织有更高的CCX-CKR表达水平,CCX-CKR高表达患者的远期生存率较高。因此,CCX-CKR表达水平与肿瘤分期呈负相关,而与患者总生存率(OS)呈正相关;CCX-CKR可作为结直肠癌的1个新预后因子,也可为相关治疗提供有价值的参考。     

结直肠癌细胞系中Runx3及Runx2基因表达分析

目的：检测在5种结直肠癌胞系中Runx3基因启动子区域甲基化状态及Runx2基因和Runx3基因的表达情况,探讨Runx2基因和Runx3基因对结直肠癌形成的影响。方法：采用甲基化特异PCR（MSP）对5种结直肠癌细胞系中Runx3基因启动子区域甲基化状态进行分析,采用逆转录-多聚合酶链反应（RT-PCR）检测Runx3及Runx2基因的表达情况。结果：MSP结果显示,有4种结直肠癌细胞系Runx3基因启动子区域呈现甲基化异常,甲基化率为80%（4/5）;RT-PCR结果表明,仅在结直肠癌细胞系colo320中Runx3 mRNA明显表达,与MSP结果相符;5种结直肠癌细胞系中Runx2基因均有不同程度表达。结论：Runx2基因在结直肠癌细胞系中仍存在活性;Runx3基因启动子区域甲基化可能是导致Runx3基因失活的主要原因之一,与结直肠癌的发生发展密切相关,可作为结直肠癌早期诊断的分子标记物及分子治疗的靶点。     

病毒调控应激颗粒形成的策略及应激颗粒对病毒复制的影响

病毒严格在细胞内寄生,其依赖于宿主细胞的翻译系统进行复制增殖.近年多项研究发现,细胞内核糖核蛋白(RNP)聚集形成的应激颗粒(SG)具有调控病毒复制的功能.病毒感染细胞后,一方面,诱导真核起始因子2α(eIF2α)磷酸化并形成SG,SG通过内部翻译停滞的mRNA抑制病毒蛋白的翻译,或通过内部模式识别受体(PRR)激活宿...     

鸡真核生物翻译起始因子2α的原核表达与多克隆抗体的制备

为了获得鸡源真核生物翻译起始因子2α(Eukaryotic translation initiation factor alpha two,eIF2α)的多克隆抗体,首先经RT-PCR扩增了eIF2α基因的完整编码序列,并成功构建了重组表达质粒pET-32a(+)-eIF2α。将其转化BL21(DE3)经IPTG诱导后,SDS-PAGE显示成功表达出分子量约51 ku的重组融合蛋白。该融合蛋白表达时的最佳诱导时间、诱导温度和IPTG浓度分别为10 h、45℃和1.5 mmoL/L。通过对该蛋白进行Ni~(2+)柱亲和层析纯化,得到了较高纯度的重组蛋白。将纯化后的eIF2α蛋白免疫新西兰黄兔,制备的多克隆抗体ELISA效价达1∶8 000,试验结果为后续eIF2α蛋白功能的研究提供了帮助。     

eIF5A基因敲除MARC-145多克隆细胞系的建立及其对PRRSV增殖的影响

旨在利用CRISPR/Cas9系统构建敲除真核翻译起始因子5A(Eukaryotic translation initiation factor 5A,eIF5A)的MARC-145多克隆细胞系，并验证该细胞系对PRRSV感染的影响。针对eIF5A基因构建并筛选成功获得重组慢病毒，用重组慢病毒感染MARC-145细胞，嘌呤霉素及有限稀释法进行筛选，获得敲除eIF5A的MARC-145多克隆细胞系。对构建细胞系进行活力检测，T7E1核酸内切酶、Real-time PCR以及Western blot验证eIF5A体外敲除效率，病毒增殖试验验证该细胞系对PRRSV复制的影响。结果表明：1)细胞活性检测结果显示敲除eIF5A基因对细胞活性无显著影响；2)通过T7E1核酸内切酶、Real-time PCR以及Western blot表明eIF5A表达显著降低，并将此细胞系命名为MARC-145-△eIF5A细胞系；3)使用PRRSV HN07-1感染MARC-145-△eIF5A,体外试验证明敲除eIF5A对PRRSV的增殖有抑制作用。综上，本研究成功构建eIF5A基因敲除的MARC-145多克...     

不同发酵度茶叶提取物对结直肠癌细胞HCT116 增殖的影响

茶多酚是否具有抗结直肠癌作用目前尚无定论,且有关不同发酵程度(未发酵、半发酵、全发酵)茶叶中茶多酚对结直肠癌细胞作用方面的研究尚未见报道。分别选取黄山毛峰、大红袍、祁门红茶3种不同发酵程度的茶叶,通过采用MTS法以及倒置显微镜下观察这3种茶叶中茶多酚提取物作用结直肠癌细胞HCT116后的细胞形态变化,检测茶多酚提取物对细胞生长的影响,结果显示,在0~35μg/mL浓度范围内,3种茶叶中茶多酚提取物分别作用细胞72 h后,MTS检测结果显示3种茶叶中的茶多酚提取物对HCT116细胞的增殖均有抑制作用(P﹤0.05),不同发酵程度茶叶中的茶多酚提取物对HCT116的半数抑制浓度IC50不同,且选取15、35μg/mL茶多酚浓度作用后的细胞进行形态观察,发现相比对照组均出现不同程度凋亡形态。可见,不同发酵度茶叶的茶多酚提取物均对结直肠癌细胞HCT116有抑制作用,且在一定浓度范围内,随着发酵程度的不同,茶多酚的抑癌效果也不同。     

胃肠道恶性肿瘤中Runx3基因甲基化研究

目的：通过检测胃肠道恶性肿瘤细胞系中Runx3基因启动子区域甲基化状态及Runx3基因表达情况,探讨Runx3基因启动子区域甲基化及表达在胃肠道恶性肿瘤中发生和发展过程中的意义。方法：采用DNA甲基化特异性PCR（MSP）技术分别对9种胃癌细胞系和11种结直肠癌细胞系中Runx3基因启动子区域甲基化进行检测,同时采用逆转录一聚合酶链反应（RT—PCR）检测Runx3mRNA的表达情况。结果：在7种胃癌细胞系和6种结直肠癌细胞系中,Runx3基因启动子区域过度甲基化;RT—PCR结果显示,在20种胃肠道恶性肿瘤细胞系中有15种细胞系Runx3基因未表达。结论：Runx3基因启动子区域甲基化是导致Runx3基因失活的主要原因之一,与胃肠道恶性肿瘤的发生发展密切相关,可作为胃肠道恶性肿瘤早期诊断的分子标记物及分子治疗的靶点。     

影响口蹄疫病毒转译起始的因素

口蹄疫病毒的转译起始由一基因组内的顺式作用元件被称为内部核糖进入位点(IRES)所介导.FM DV的IRES的二级结构、三级结构以及它们之间的相互作用,是维持其转译活性所必需的.在这个转译过程中。E IF 4G,E IF 4B,E IF 4A协同的结合到IRES的3'区域,然后小核糖体亚单位、大核糖体亚单位结合到连有起始因子的IRES复合物上,核糖体在小RNA的IRES上得到组装,转译开始。     

凋亡抑制蛋白介导泛素化在恶性黑素瘤发生发展过程中的作用

恶性黑素瘤(MM)是一种起源于黑素细胞的恶性肿瘤,对放疗、化疗不敏感,具有高度侵袭性.泛素蛋白酶体系统可调节相关蛋白对各种细胞内生理过程进行调控,泛素连接酶(E3)是泛素化过程中识别底物的特异性酶,在MM发生发展过程中起重要作用.凋亡抑制蛋白(IAPs)RING结构域表现E3活性,通过调控多种在MM发展中起重要作用的蛋...     

玉米eIF5A基因克隆及生物信息学分析

真核翻译起始因子eIF5A与植物的生长发育及抗逆生长密切相关。以玉米弯孢菌抗性自交系Mo17和感性自交系黄早四为试验材料,克隆得到eIF5A基因,并对其进行生物信息学分析。结果表明:在Mo17和黄早四中分离的eIF5A基因均包含480bp的ORF,编码160个氨基酸,分子量分别为17.50和17.48KD,等电点均为5.61。通过对氨基酸序列的分析发现,eIF5A基因编码的蛋白质为非跨膜稳定的亲水性蛋白,存在15个磷酸化位点,与高粱的相似度最高,并且该蛋白的保守结构域属PLN103107超级家族。     

菊花翻译起始因子4E基因的克隆、 表达分析及其互作蛋白的筛选

【目的】为了研究翻译起始因子4E在菊花中的表达特性及功能,克隆菊花翻译起始因子4E（CmeIF4E）基因,分析其表达特性并初步筛选得到菊花CmeIF4E的互作蛋白。【方法】根据已报道植物的eIF4E序列设计引物,采用RT-PCR和RACE技术克隆菊花eIF4E基因,荧光定量PCR及亚细胞定位分析菊花CmeIF4E的表达特性,并用酵母双杂交系统筛选其互作蛋白。【结果】克隆获得菊花eIF4E基因全长914 bp,其开放阅读框（ORF）654 bp,编码1条包含218个氨基酸残基的多肽,将该基因名为CmeIF4E,GenBank登录号为JQ904591。氨基酸序列比对和系统进化分析表明,菊花CmeIF4E与已报道的莴苣的同源基因亲缘关系最近,该结果与植物分类学相符。荧光定量PCR分析结果显示,CmeIF4E基因在切花菊‘神马’各个器官中均有表达,幼嫩的根中表达量最高,其次是叶片,而茎中表达量最低。亚细胞定位分析发现,CmeIF4E在细胞的核、质、膜上都有表达。筛选得到菊花CmeIF4E互作蛋白,其中包括蛋白翻译和翻译后修饰、光合作用、抗逆和防御等相关蛋白。【结论】CmeIF4E在菊花组织中为组成型表达,亚细胞定位显示其在细胞核、细胞质、细胞膜上都有表达。候选蛋白分析验证了CmeIF4E在翻译起始中的作用,还推测其可能与光合系统、植物的抗逆防御相关,结果为进一步研究该蛋白在菊花中的作用提供了重要依据。     

人参皂苷Rg3诱导结直肠癌细胞凋亡作用研究

本文初步探讨人参皂苷Rg3 (Rg3)体外抗结直肠癌作用研究,采用高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)测定Rg3的含量,以流式细胞术法测定Rg3的凋亡百分数,并利用蛋白质印迹法(Western Blot,WB)测定c-Jun氨基端激酶(c-Jun N-...     

右美托咪定对腹腔镜下结直肠癌根治术患者应激及炎性因子的影响

目的探讨右美托咪定应用于腹腔镜下结直肠癌根治术时对患者应激及炎性因子的影响。方法选择行腹腔镜下结直肠癌根治术的40例患者采用单盲法随机分为对照组和观察组各20例,观察组于麻醉诱导前10min内泵入右美托咪定1μg·kg-1,并以0.4μg·kg-1·h-1持续泵注至手术结束前30min,对照组给予同等剂量生理盐水。分别于入室前(T0)、建立气腹时(T1)、气腹建立后2h(T2)、拔管时(T3)4个时间点进行血流动力学指标比较,采用酶联免疫吸附(ELISA)法测定血清中白细胞介素8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及血清皮质醇(COR)水平,并进行组间比较。结果与T0时间点比较,观察组T1~T3时间点心率(heart rate,HR)均明显下降(P0.05),对照组T1~T3时间点HR均明显上升(P0.05);与T0时间点相比,观察组T1~T3时间点平均动脉压(mean arterial pressure,MAP)未发生明显变化,对照组T1~T3时间点MAP明显高于观察组(P0.05);与T0时间点相比,2组IL-8、TNF-α、COR均明显上升,且对照组上升程度明显高于观察组(P0.05)。结论麻醉诱导前10min内泵入右美托咪定1μg·kg-1,并以0.4μg·kg-1·h-1持续泵注至手术结束前30min可维持腹腔镜下结直肠癌根治术患者术中血流动力学稳定,抑制围术期炎性反应和应激反应。