冠突散囊菌研究进展

冠突散囊菌（Eurotium cristatum）是茯砖茶“发花”过程中的优势菌,在特定的温、湿度条件下,其可在茯砖茶中形成黄色闭囊壳,俗称“金花”,是表征茯砖茶品质的重要指标之一。文章从冠突散囊菌的鉴定命名、生理特性、功能及其对茯砖茶品质的影响与应用方面进行了综述,并对目前存在的问题及未来的发展方向进行了讨论与展望。     

冠突散囊菌有性孢子发育基因veA cDNA片段的克隆

为从冠突散囊菌中克隆到与有性发育相关的veA基因片段,根据genbank中不同种真菌的veA相关蛋白质序列同源性,设计简并引物,运用touchdown PCR技术,研究了从冠突散囊菌总RNA中克隆有性孢子发育基因veA cDNA片段.结果表明:克隆得到长度为558 pb的cDNA片段.该cDNA片段与棒曲霉veA基因相似性最高,为77%;与构巢曲霉veA相似性67%.确定为冠突散囊菌veA基因片段.     

泾阳茯茶生产环境中冠突散囊菌多样性检测

为阐明陕西省泾阳县茯茶生产环境中冠突散囊菌是否为同一克隆系,分别从泾阳县2个代表不同生产方式的茯茶厂的不同生产工段采集原料茶叶、茯茶半成品及成品、生产环境涂抹拭子、空气沉降样和土壤等样品,采用平板划线和涂布法分离得到26株疑似冠突散囊菌,并对其进行分类鉴定。结果表明:基于菌落形态特征鉴定后,初步确定26株菌为"冠突散囊菌"。对26株"冠突散囊菌"26SrDNA D1/D2区及其内转录间隔区(Internal Transcribed Spacer;ITS)序列进行PCR扩增、序列测定并提交基因库比对,使用Mega 6.0软件构建进化树分析鉴定后,确认得到的菌株均为冠突散囊菌,且菌株的26SrDNA D1/D2区及ITS序列均具有高度的同源性。研究初步阐明存在于陕西省泾阳县茯茶生产环境的冠突散囊菌相似度极高,为同一克隆系。     

黑茶曲霉属和散囊菌属真菌产胞外水解酶能力的比较分析

【目的】曲霉属和散囊菌属真菌是黑茶渥堆中的优势微生物,对形成黑茶风味、品质和生理功能 起关键作用。但在茶叶发酵过程中这些真菌水解酶的差异尚不清楚。【方法】采用鉴别培养基平板检测和酶活 性检测相结合,分析曲霉属和散囊菌属不同菌株在合成培养基上和茶叶发酵条件下胞外水解酶活性的差异。【结 果】鉴别培养基平板检测结果显示：供试的 9 个菌株均不同程度呈现纤维素酶、木聚糖酶和单宁酶活性,7 个 菌株显示淀粉酶活性,2 个菌株显示果胶酶活性,1 个菌株显示蛋白酶活性。同一菌株可以同时分泌多种胞外 水解酶,多个菌株也可以表现同一水解酶的活性,不同菌株产生胞外水解酶能力存在显著差异。在茶叶发酵过 程中,黑曲霉菌株 PE-3 水解大分子碳水化合物酶活性显著高于冠突散囊菌菌株 PE-1。其中,淀粉酶活力达到 33.81 U/mL。而菌株 PE-1 的单宁酶和蛋白酶活性则显著高于菌株 PE-3。其中,单宁酶活力达到 132.09 U/mL。【结 论】在茶叶发酵过程中,曲霉属和散囊菌属的菌株可能具有对不同茶叶成分的选择性,水解酶的协同作用影响 菌株对茶叶成分的利用效率。     

冠突散囊菌降低黑茶氟含量的研究进展

从冠突散囊菌特性、冠突散囊菌降氟方法2个方面综述了有关黑茶降氟的研究进展,如利用紫外线辐射诱导、含氟化学药品、抗生素、农药和病毒诱导降氟等诱导冠突散囊菌噬氟的方法。并指出了目前研究中存在的问题和今后的研究方向。     

一株冠突散囊菌的分离鉴定及其液体发酵研究

实验研究了从泾阳茶厂分离到的一株"金花菌",对其进行生理生化及分子生物学鉴定,鉴定结果为冠突散囊菌。利用这株菌进行茶汤的纯种发酵,以自然发酵作对比,分析发酵前后茶汤的变化。实验结果表明:茶多酚,多糖,氨基酸,生物碱在发酵液的不同时期含量有不同的变化。     

黑茶液发酵冠突散囊菌条件的探索

从茯砖茶中分离纯化冠突散囊菌,以添加不同浓度蔗糖的黑茶汁为培养液培养菌体,测定菌丝干重筛选最佳蔗糖浓度;以四因素三水平的正交试验实验,筛选黑茶液发酵冠突散囊菌的最佳条件。结果显示,培养液蔗糖浓度为6%,黑茶含量为0.8%时,菌丝体生长最快;当发酵条件为初始pH5.5、培养温度30℃、接种量1.5 ml、摇瓶转数120 r/min,培养96 h时,测得的菌丝体干重最大,浓度为3.974 g/l。     

不同原料及生长因子对冠突散囊菌固体培养特性的影响

[目的]为茯砖茶的开发利用提供参考。[方法]对茯砖茶发花过程中的优势菌—冠突散囊菌（Eurotium cristatum）的特征、生长条件、对营养成分的利用及发花过程中茯砖茶主要成分变化的研究进行了综述。[结果]大部分冠突散囊菌菌株在CZG、PDA培养基上生长速度较快,其生长适温为25~35℃,最适生长pH值为5。有机氮对菌落生长具有较好的促进作用,无机态氮、酰胺态氮、氨态氮有利于孢子荫发;有关碳源对菌落生长的影响研究结果不一致。冠突散囊菌可提高茯砖茶的含氮量,减少其可可碱和茶碱的含量,增加脱镁叶绿酸酯a、b及叶黄素、β-胡萝卜素的含量。[结论]有关冠突散囊菌的生理特性、功能特性及其与茯砖茶品质形成的关系等方面的研究有待进一步深入。     

冠突散囊菌有性产孢相关基因的生物信息学分析

为研究 nsdD、esdC 及 flbA 等基因在冠突散囊菌（Eurotium cristatum ）中的功能,通过 Au-gustus 软件对这3个基因进行重新预测,并利用 ExPASy 网站中的生物信息分析工具及多序列比对构建系统发育树对这3个基因编码蛋白的性质、结构及其功能进行推测。结果表明：nsdD、esdC 及 flbA 分别编码含有430个、274个和764个氨基酸的蛋白。3个蛋白均不具有信号肽,推测为非分泌蛋白;且均不具有跨膜结构,亚细胞定位发现 NsdD 和 EsdC 位于细胞核内,而 FlbA 可能位于线粒体上;3个蛋白在曲霉中均比较保守。nsdD、esdC 和 flbA 3个基因均参与冠突散囊菌有性发育的调控。     

茯砖茶中冠突散囊菌的分离鉴定及富硒菌株筛选

对陕西茯砖茶中冠突散囊菌进行分离与鉴定,并筛选出具有较强富硒能力的菌株。从8种陕西茯砖茶中分离出54株纯化菌株,通过形态学观察及ITS基因序列分析鉴定得到32株冠突散囊菌。经硒胁迫培养从中筛选出8株耐硒能力强的冠突散囊菌,并确定其生长最适硒质量浓度为30μg/mL。进一步的富硒培养结果表明,菌株SXFCD.8在此硒浓度下的富硒能力最强,其生物量为(28.92±0.94)mg/100mL,富硒量为(628.38±20.96)μg/g。最后利用LC-ICP/MS对菌株SXFCD.8的硒形态进行分析,共检测到6种硒形态,其中4种与标准物质相匹配,包括SeMet、SeCys2、MeSeCys和Se(IV)。硒形态分析表明冠突散囊菌具有较强的有机硒转化和富集能力。     

冠突散囊菌液体培养条件的正交优化

[目的]研究冠突散囊菌(Eurotium cristatum)液体培养条件.[方法]采用L16(45)正交试验设计,对影响冠突散囊菌生长的主要因素,包括黑茶浓度、蔗糖浓度、pH、培养温度和接种量进行5因素4水平筛选分析.[结果]冠突散囊菌最优的液体培养条件为:黑茶浓度为0.7％,蔗糖浓度为5％,pH为5,培养温度为29℃,接种量为1％(孢子浓度为6.0×108cfu/ml).[结论]该研究可为现代发酵工程技术应用于茯砖茶生产提供科学依据.     

绿茶液冠突散囊菌发酵期间品质变化的研究

利用冠突散囊菌(Eurotium cristatum)对低档绿茶茶汤进行发酵,对发酵液的相关品质进行了研究.结果表明,第4天发酵液综合感官评分最高,与色差计对汤色检测的结果一致;发酵过程中茶多酚及儿茶素、氨基酸的含量逐渐降低,咖啡碱含量较稳定;发酵液酚氨比较原材料茶汤有一定幅度的降低,茶汤品质得到较好的改善;发酵过程中菌丝体对茶多酚存在一定量的吸收.     

化橘红多糖的分离纯化及其组成的气相色谱分析

目的：从化橘红中提取分离多糖,并对其化学组成进行研究。方法：化橘红经醚提醇提后的药渣用热水提取,乙醇沉淀,Ｓｅｖａｇ试剂脱蛋白,ＣＴＡＢ（溴化十六烷基三甲胺）络合法分离纯化;用气相色谱法对其组成进行研究。结果：分离得到的水溶性多糖经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２００凝胶柱层析,硫酸－酚法证实为单一多糖,紫外光谱显示不含蛋白和核酸类物质。化橘红多糖是由Ｄ－木糖,Ｄ－葡萄糖,Ｄ－半乳糖,Ｌ－阿拉伯糖,Ｄ－甘露糖和一个未知物（待定）组成。结论：化橘红多糖为杂多糖,气相色谱法是该多糖组成分析的简便易行的方法。     

可德兰多糖的分离纯化和化学结构分析

用酸碱法从产碱杆菌突变株C125的发酵液中提取Curdlan粗多糖样品CD-1,经Sevage法脱蛋白、纤维素柱层析脱色后,用Sephadex G-100凝胶层析柱分离纯化得多糖CD-2.紫外分光法及Sephadex G-200凝胶柱层析法检测CD-2为均一多糖,Sephadex G-200柱层析测得CD-2的分子量为65300Da,完全酸水解后纸层析检测CD-2的单糖组成中仅有葡萄糖,分析CD-2的红外光谱、核磁共振谱得知CD-2多糖的化学结构是以β-(1,3)糖苷键连接而成的无分枝的葡聚糖.     

抗菌卷柏多糖的提取与分离

采用4种方法提取卷柏多糖,其中综合法提取率最高,为1.45%。可溶性多糖经DEAE-纤维素52柱层析进一步纯化,得到1种中性糖和1种酸性糖,各占86.5%和13.5%。利用纸片扩散法测定其抗菌活性,结果表明,卷柏多糖具有较强的抗动植物病原菌活性,对肠炎病病原菌、绿木霉与甘薯薯瘟病病原菌的最小抑菌浓度为6.25 mg.mL-1。     

不同嫩度茶树鲜叶对金花散茶理化品质的影响

以不同嫩度的夏秋茶树鲜叶为原料,人工接种发酵金花散茶,分析了在14 d的发酵过程中,不同嫩度鲜叶发酵的金花散茶理化成分的动态变化。结果表明,在发酵过程中,不同嫩度鲜叶发酵的金花散茶茶褐素含量呈增加趋势,其他内含成分含量总体呈下降趋势,整体以嫩度高的鲜叶发酵的金花散茶内含成分含量更高。综合考虑,以一芽三四叶鲜叶人工接种发酵10 d,更有利于金花散茶的品质形成。     

黑曲霉D226乳糖酶分离纯化研究

为从黑曲霉D2-26发酵液中得到单一的乳糖酶组分,以便研究其酶学性质。试验通过采用过滤、超滤、硫酸铵分级盐析、Sephadex G-25脱盐、DEAE-纤维素-32离子强度梯度层析、Sephadex G-100凝胶过滤、DEAE-纤维素-32 pH梯度层析等方法从发酵液中分离纯化乳糖酶,纯化酶液经PAGE电泳鉴定得到单一蛋白条带。为此建立了一套简单易行的黑曲霉D2-26乳糖酶分离纯化方法。     

竹叶多糖分离纯化及抗氧化能力的研究

对超临界CO2流体萃取技术提取的竹叶粗多糖采用分级醇沉、脱蛋白质及纤维素柱层析等技术分离纯化,研究分离纯化后的竹叶多糖产物的物化指标。研究结果表明:经超临界CO2流体萃取技术提取得到的毛竹叶粗多糖,采用体积分数为70%的乙醇沉淀,得到预纯化产物,预纯化产物得率17.75%,多糖含量9.586 mgg,总抗氧化能力2.556 mgg VC;预纯化产物再经Sevag法脱蛋白质及DEAE-52纤维素层析柱层析,获得一种中性竹叶多糖,其平均分子量为5.051×104,IC50值为0.178 mgg竹叶多糖,与VC(IC50值为0.158 mgg)相比,具有较好的DPPH清除能力。