洛伐他汀影响人高转移卵巢癌细胞系HO-8910PM转移相关能力的研究

目的研究洛伐他汀对人高转移卵巢癌细胞系HO-8910PM转移相关能力的影响。方法分别运用MTT法、Transwell小室法、细胞粘附人工重组基底膜实验检测洛伐他汀对HO-8910PM细胞的细胞毒作用,对细胞的侵袭能力和趋化运动及对细胞粘附能力的影响。结果洛伐他汀作用HO-8910PM细胞6h后能抑制其体外侵袭、趋化运动和粘附能力,其中8μmol/L抑制率分别为(79.18±0.21)%、(59.40±0.80)%和(14.08±1.28)%。结论洛伐他汀能有效地抑制人高转移卵巢癌细胞系HO-8910PM的侵袭、趋化运动和粘附能力,是潜在的抗肿瘤转移药物。     

三羟异黄酮对高转移卵巢癌细胞株HO-8910PM的侵袭、转移及MTA1、nm23H1基因表达的影响

目的:研究三羟异黄酮(gen iste in)对人高转移卵巢癌细胞HO-8910PM转移相关能力的影响及其作用的机制。方法:以台盼蓝拒染法检测gen iste in对高转移卵巢癌细胞HO-8910PM细胞增殖的影响;用T ransw ell小室法检测gen iste in对HO-8910PM细胞的侵袭能力和趋化运动能力的影响;RT-PCR分析M TA 1及nm 23H1mRNA的表达。结果:50μm o l/L的gen iste in作用细胞6h后能抑制HO-8910PM细胞体外侵袭人工基底膜和趋化运动能力,抑制率分别为(21.08±3.12)%和(17.15±2.01)%;25~100μm o l/L gen iste in作用HO-8910PM细胞24h后,明显下调M TA 1 mRNA的表达,上调nm 23H1mRNA表达水平。结论:gen iste in能抑制高转移卵巢癌细胞HO-8910PM的侵袭和运动能力。gen iste in抗肿瘤侵袭转移的作用机制与M TA 1 mRNA的表达下调和nm 23H1mRNA表达上调有关。     

Zeylenone对急性淋巴细胞白血病细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨Zeylenone体外抗急性淋巴细胞白血病(Acute Lymphoblastic Leukemia,ALL)效应及作用的可能机制。方法应用MTT法比较Zeylenone对肿瘤细胞、正常细胞增殖的影响;AO/EB染色观察其对ALL细胞(Reh、RS4;11)凋亡形态学的改变;流式细胞仪检测药物对细胞凋亡及细胞周期的影响。结果 Zeylenone对多种细胞呈现增殖抑制作用,且对ALL细胞株呈现更高的敏感性,而对外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)抑制作用较小,抑制Reh、RS4;11细胞增殖呈时间依赖性和剂量依赖性;Zeylenone能够诱导ALL细胞凋亡,阻滞细胞周期于G0/G1期。结论 Zeylenone体外具有抗ALL细胞增殖的作用,其作用与诱导细胞凋亡、阻滞细胞周期相关。     

白藜芦醇对黑色素癌细胞A375生长的抑制作用

探讨自藜芦醇对黑色素癌细胞A375的体外生长的影响和作用机制.利用MTT法分析25、50、100、150和200μmol/L 5个浓度的白藜芦醇对A375细胞增殖的影响,并通过Hoschest染色和荧光显微镜观察A375细胞的形态学变化,流式细胞仪检测各浓度白藜芦醇对A375细胞的细胞周期影响作用.结果表明,白藜芦醇对黑色素癌细胞A375增殖的抑制作用明显,且白藜芦醇对A375细胞在G1期和S期的阻滞作用具有一定的浓度依赖和时间依赖效应,抑制其生长并诱导凋亡,在荧光染色观察到A375细胞出现典型的凋亡细胞形态特征.这表明白藜芦醇对黑色素癌细胞的生长有明显抑制作用,这将为其作为抗癌药物临床治疗黑色素癌提供参考作用.     

斑蝥酸钠维生素B6注射液诱导人膀胱癌EJ细胞凋亡实验观察

目的观察斑蝥酸钠维生素B6注射液对体外培养的人膀胱癌EJ细胞增殖抑制作用和凋亡的影响。方法应用流式细胞仪、CCK-8法、荧光倒置显微镜分析斑蝥酸钠维生素B6注射液作用EJ细胞后的变化。结果斑蝥酸钠维生素B6注射液对EJ细胞有增殖抑制作用,实验出现凋亡带及凋亡峰。结论斑蝥酸钠维生素B6注射液对体外培养的EJ细胞生长有明显的抑制作用,可以诱导EJ细胞凋亡。     

Vc对黑色素癌细胞A375生长抑制作用的研究

[目的]探讨Vc对黑色素癌细胞A375的生长抑制作用。[方法]利用MTT法分析不同剂量组的Vc对A375增殖的影响,并通过荧光染色和荧光显微镜观察A375细胞的形态学变化,用流式细胞术检测Vc对各组A375的细胞周期变化。[结果]流式方法测定的结果显示,Vc对黑色素癌细胞A375的增殖具有抑制作用;Vc能以浓度依赖和时间依赖方式阻滞黑色素癌细胞A375细胞于G0/G1期,抑制其生长并诱导凋亡。[结论]Vc对黑色素癌细胞的生长有明显抑制作用。     

杠柳毒苷对神经胶质瘤细胞增殖及凋亡的影响

目的观察杠柳毒苷对神经胶质瘤细胞增殖和凋亡的抑制作用。方法体外实验中,将不同质量浓度的杠柳毒苷作用于神经胶质瘤细胞,MTT法检测其对神经胶质瘤细胞增殖的抑制作用;DAPI荧光染色观察细胞核形态的变化;流式细胞术分析给药后神经胶质瘤细胞凋亡及细胞周期的变化情况;Western blot法检测给药后周期蛋白依赖激酶抑制剂P27的表达量。结果杠柳毒苷可以显著抑制神经胶质瘤细胞的生长增殖,且随着药物浓度的增加和作用时间的延长抑制作用也随之加强。结论不同浓度的杠柳毒苷可显著促进神经胶质瘤细胞的凋亡,在抑制细胞增殖的过程中,细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂P27的表达量显著升高。     

槲皮素对BEL-7402细胞生长抑制作用的研究

[目的]探讨槲皮素对人肝癌细胞株BEL-7402的增殖抑制及凋亡诱导作用。[方法]体外培养BEL-7402细胞,以不同浓度槲皮素处理细胞后,采用酸性磷酸酶（APA）法检测细胞增殖抑制率;光镜观测BEL-7402细胞形态变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率。[结果]槲皮素对人肝癌BEL-7402细胞有明显的增殖抑制作用,其72h的IC50为4μg/ml。光学显微镜下可见细胞密度明显降低。经槲皮素作用6、12h后,流式细胞术检测到细胞凋亡率显著增加。[结论]槲皮素对人肝癌细胞的增殖抑制呈浓度相关性,可诱导肝癌细胞凋亡。     

促肝细胞再生磷酸酶-3蛋白在5株癌细胞中的表达

目的研究促肝细胞再生磷酸酶-3(phosphatase of regenerating liver-3,PRL-3)在5株癌细胞(HO-8910PM、CNE-2Z、A549、JAR和BEL-7402)中的表达情况,为选择合适的细胞株克隆PRL-3基因奠定基础。方法用Western blot分析PRL-3在5株癌细胞(HO-8910PM、CNE-2Z、A549、JAR和BEL-7402)中的表达。结果PRL-3蛋白在5株癌细胞中都有表达:在HO-8910PM与CNE-2Z中呈高度表达,在A549和BEL-7402中呈中等程度表达,而在JAR中呈低度表达。结论PRL-3在5株癌细胞中均有表达,可选择高表达的HO-8910PM或CNE-2Z细胞克隆PRL-3基因。     

白藜芦醇对肝癌SMMC-7721细胞的抑制作用

[目的]探讨白藜芦醇对人肝癌细胞SMMC-7721体外生长的影响和作用机制。[方法]利用MTT法检测不同剂量组的白藜芦醇对肝癌细胞SMMC-7721细胞增殖的影响,通过Hoechst染色和荧光显微镜观察肝癌细胞SMMC-7721细胞核的形态学变化,流式细胞仪测定各浓度组白藜芦醇对肝癌细胞SMMC-7721作用的周期变化与凋亡分析。[结果]白藜芦醇对人体肝癌细胞SMMC-7721的增殖具有抑制作用,且有浓度和时间依赖性;在荧光显微镜下观察到典型的凋亡细胞形态特征;流式方法测定的结果显示,白藜芦醇阻滞肝癌细胞SMMC-7721于S期。[结论]白藜芦醇对人体肝癌细胞SMMC-7721生长具有抑制作用,使其细胞周期阻滞于S期并诱导其凋亡。     

GRIM-19基因对前列腺癌DU145细胞的促凋亡作用

目的探讨GRIM-19基因对前列腺癌DU145细胞的促凋亡作用,并分析相关机制．方法将构建成功的pGRIM-19重组质粒转染DU145细胞株,应用MTT法检测其对细胞增殖能力的影响,通过流式细胞术检测细胞周期及凋亡率,应用半定量RT-PCR检测GRIM-19及caspase-3 mRNA转录水平．结果流式细胞术结果显示：与对照组比较,pGRIM-19重组质粒明显抑制DU145细胞增殖,并使细胞周期发生改变,多数细胞抑制在G0／G1期,细胞凋亡率增加明显;通过RT—PCR电泳结果证实：pGRIM-19重组质粒明显促进GRIM-19的表达,同时激活caspase-3．结论重组质粒pGRIM-19可明显抑制DU145细胞增殖,并促进其凋亡,其凋亡的发生机制与激活caspase-3有关．     

羟基磷灰石纳米粒子运载Stat3 shRNA对鼠胶质瘤C6细胞的促凋亡效应

目的探讨羟基磷灰石纳米粒子运载Star3 shRNA对鼠胶质瘤C6细胞的促凋亡作用,并探讨相关机制．方法羟基磷灰石纳米粒子包被的Stat3 shRNA转染到c6胶质瘤细胞内,MTT法检测细胞增殖情况,应用流式细胞术及吖啶橙染色观察细胞周期分布及凋亡情况,TUNEL染色观察细胞的凋亡及增殖情况．结果羟基磷灰石纳米粒子运载Star3 shRNA转染C6细胞后,呈时间依赖性抑制C6细胞生长和增殖．通过流式细胞术检测证实：该质粒可使细胞阻滞在细胞周期的GO／G1期,细胞凋亡率明显增加（P＜0．05）,与对照组比较差异有统计学意义;吖啶橙及TUNEL染色发现其明显促进细胞凋亡（P＜0．05）,与对照组比较差异有统计学意义;结论羟基磷灰石纳米粒子运载Stat3 shRNA体外可明显抑制胶质瘤C6细胞增殖,并促进其凋亡,是治疗胶质瘤较理想的方法．     

Effects of Ligustrazine Combined with Cisdichlorodiamine Platinum on Anti-proliferation,Cell Cycle and Apoptosis of Human Gastric Carcinoma SGC-7901 Cell Lines

[Objective] This study aimed to investigate the combination effects of ligustrazine and cis-dichlorodiamine platinum(DDP) on anti-proliferation, cell cycle and apoptosis of SGC-7901 cell lines in vitro. [Method] SGC-7901 cells were treated with ligustrazine and DDP alone or combined for 48 h for morphology assay.Anti-proliferative effects with the same treatment for 24, 48 and 72 h were assayed by MTT method, respectively. Cell cycle distribution and apoptosis assay of treated cells were performed in flow cytometry. Zhengjun Jin's protocol was used to assay the effect of drug combination. [Result] Ligustrazine significantly increased the proliferation inhibition rate of DDP on SGC-7901 cells in combination with DDP, comparing with the effects of ligustrazine or DDP alone, and exhibited synergistic antitumor effect. The combination drug treatment induced cell cycle arrest occurred in S and G2 phase of the cell cycle and increased the apoptosis rate significantly.[Conclusion] Our results indicate that ligustrazine, as a low-toxic and natural herbal component, can significantly increase the anti-proliferative effect and apoptosis rate of antitumor drug DDP on human gastric carcinoma SGC-7901 cells.     

Survivin—siRNA真核重组质粒的构建及对前列腺癌DU145细胞增殖抑制作用

目的应用RNA干扰技术（RNAi）,构建针对凋亡抑制因子survivin的siRNA,并检测其对DU145细胞增殖抑制的影响．方法构建重组质粒shRNA-sur1和shRNA-sur2并分别转染DU145细胞株,通过MTT法和流式细胞术观察其对细胞的增殖抑制作用及凋亡的影响．结果成功构建针对survivin干扰的两种真核表达质粒,转染72h后,两个实验组细胞的生长速度分别是脂质体组的（37．2％±5．8％）（n=3）和（43．5％±7．2％）（n=3）．流式细胞术发现：实验组细胞的G1期细胞比例明显高于对照组,而G2期和S期细胞比例减少,细胞出现凋亡,与脂质体组比较,两实验组细胞的凋亡率分别为（21．70％±6．45％）,（14．835±5．65％）．结论成功构建针对survivin siRNA的真核重组质粒,两种质粒体外均可抑制DU145增殖并诱导其凋亡,为survivin介导的肿瘤基因沉默提供良好的基础．     

粒细胞集落刺激因子在羊成纤维细胞中的表达及对细胞增殖和凋亡的影响

【目的】研究粒细胞集落刺激因子（granule cell stimulating factor,GCSF）在羊成纤维细胞体外培养中对其增殖、周期和凋亡的影响,为今后基于羊GCSF为靶标诱导全能干细胞进行分子遗传育种研究提供理论依据。【方法】将羊GCSF真核表达质粒pRTL1-GCSF和对照载体质粒pRTL1分别转染到1×10⁵个细胞/mL的羊成纤维细胞中,培养48 h后,利用Trizol法分别提取总RNA并反转录为cDNA,通过实时荧光定量PCR检测羊GCSF在羊成纤维细胞中的瞬时表达水平。通过GCSF依赖型细胞系NFS-60,利用细胞活力检测试剂alamarBlue测定转染48 h后羊成纤维细胞培养上清中分泌表达的GCSF的生物学活性。通过HEK 293F悬浮培养细胞系真核表达分泌型羊GCSF蛋白后,用Ni-NTA凝胶对细胞表达至细胞培养基中的GCSF蛋白进行纯化,并SDS-PAGE检测。加入纯化的30 ng·mL^-1 GCSF蛋白后在24和48 h时,通过alamarBlue测定羊成纤维细胞的增殖状态,利用流式细胞术检测羊成纤维细胞的细胞周期和凋亡变化。【结果】羊GCSF真核表达质粒转染羊成纤维细胞48 h,检测发现在羊成纤维细胞中GCSF表达量得到显著提高。在羊成纤维细胞中,转染了pRTL1-GCSF质粒的羊GCSF表达量是转染了pRTL1空载对照组的（50 615.92±4 738.83）倍（P<0.01）;羊成纤维细胞瞬时分泌表达的含有GCSF蛋白的培养基上清加入到GCSF依赖型细胞系NFS-60后,试验组和阳性对照组中的NFS-60的荧光强度与阴性对照组和空白对照组相比显著升高（P<0.01）,试验组中的NFS-60的荧光强度与阳性对照组相比均差异不显著（P>0.05）,结果显示羊GCSF能显著刺激NFS-60细胞的增殖,表明在羊成纤维细胞中表达的羊GCSF具有生物学活性。用HEK 293F悬浮培养细胞系真核表达分泌型羊GCSF蛋白后,纯化得到羊GCSF蛋白。在羊成纤维细胞中添加30 ng·mL^-1的羊GCSF后,体外培养24和48 h,GCSF试验组与培养基稀释液对照组相比,细胞活力变化差异不显著,而细胞周期的分布出现显著改变。24 h时,与对照组相比试验组的G1期细胞比例由(55.29±1.68)%增加到(69.37±0.24)%,差异极显著（P<0.01）;S期细胞比例由(15.99±0.38)%变为(15.39±0.60)%,差异不显著（P>0.05）;G2/M期细胞显著增多（P<0.05）,比例由(22.88±1.00)%增大到(26.76±0.82)%。表明在羊成纤维细胞中加入羊GCSF的24 h后,处于分裂状态和间期的细胞显著增多。48 h时,与对照组相比试验组G1期细胞比例由(65.96±0.37)%减少为(45.69±0.26)%,差异极显著（P<0.01）;S期细胞比例由(13.45±1.33)%增加为(37.87±2.43)%,差异极显著（P<0.01）;G2/M期细胞比例由(16.42±1.29)%变为(21.80±1.86)%,差异不显著（P>0.05）。表明加入GCSF的羊成纤维细胞在48 h时,处于间期的细胞显著减少,同时DNA复制状态的细胞显著增多。试验组凋亡率和对照组相比,培养24 h时对照组（Ctr）和试验组（GCSF）的凋亡率分别是(7.51±0.38)%和(9.16±0.46)%。48 h时对照组和试验组的凋亡率分别是(5.73±0.29)%和(5.39±0.27)%。72 h时对照组（Ctr）和试验组（GCSF）的凋亡率分别是(8.88±0.45)%和(5.41±0.27)%,24 h和72 h凋亡率差异极显著（P<0.01）,48 h检测时凋亡率差异不显著（P>0.05）,表明在GCSF添加的24 h内促进了细胞凋亡,随着时间的延长,细胞的凋亡受到抑制。【结论】羊成纤维细胞中可以瞬时过量表达羊GCSF,并具有生物学活性。GCSF不影响羊成纤维细胞的增殖,但可调控其周期,影响细胞凋亡。该结果为今后通过羊成纤维细胞介导GCSF培育具有高免疫力、高抗病性的羊进行分子遗传育种奠定了基础。     

干扰KISS1基因对猪卵巢颗粒细胞功能的影响

【背景】卵泡是卵巢的基本结构和功能单位,其主要功能是排卵和分泌激素。颗粒细胞能促进卵泡发育,其过度凋亡能抑制卵泡发育,诱导卵泡闭锁,进而降低雌性动物发情频率,影响雌性动物繁殖力。现已有研究发现,KISS1在卵巢组织中发挥着重要作用。【目的】研究通过干扰KISS1,以阐释KISS1对猪卵巢颗粒细胞凋亡、周期及分泌雌激素能力的影响,为完善KISS1在猪颗粒细胞中的分子调控机制提供一定的依据。【方法】设计KISS1的干扰片段KISS1-siRNA,转染体外培养的母猪卵巢颗粒细胞,通过实时定量PCR(quantitative real time PCR, qRT-PCR)检测干扰KISS1对母猪卵巢颗粒细胞中磷脂酰肌醇3-激酶(phosphoinositide3-kinase, PI3K)信号通路部分基因转录水平的影响;采用流式检测法、Annexin V-FITC及ELISA技术,分别探究干扰KISS1对颗粒细胞周期、凋亡及雌二醇(estradiol, E2)分泌量的影响,最后使用qRT-PCR技术检测KISS1对雌激素受体及雌激素信号通路关键基因转录水平的影响。【结果】在猪颗粒细胞内,干扰K...     

Study on the Separation, Extraction of Lycopene and Its Effects on Cell Cycle

The separation, extraction of lycopene and its effects on the proliferation and cells cycle of the chemical-induced cells were investigated in order to research on its extraction method and the mechanism in inhibiting neoplastic transformation. The best extraction condition of lycopene with super-critical carbon dioxide was under the pressure of 25MPa, the temperature of 50℃ and duration of 3. 0h. Lycopene could inhibit cell growth rate and cells proliferation significantly, while increase the cell numbers of G1-phase and decrease that of S-phase and G2 +-M-phase. The potency of the effects of lycopene on cells cycle might be one of the important reasons for inhibiting neoplastic transformation.