植物精油与硫酸粘杆菌素对不同菌株抗耐药性研究

本试验旨在探讨植物精油(商品名:智然香,天然百里香酚≥1.2%;天然香芹酚≥2.3%)与硫酸粘杆菌素对不同菌株的抗耐药性。本试验采用琼脂平板法,在不同培养基中添加不同水平的植物精油与硫酸粘杆菌素并接种不同世代、不同分离源的大肠杆菌和乳酸菌,测定最低抑菌浓度。结果表明:植物精油与硫酸粘杆菌素的效价比随着世代的不同、分离源的不同而差异较大。植物精油对第1代和第3代的野生型大肠杆菌的最低抑菌浓度分别为2%和2.1%;对第1代和第3代野生型乳酸菌的最低抑菌浓度均为2.2%。硫酸粘杆菌素对第1代和第3代野生型大肠杆菌的最低抑菌浓度分别为1.8%和2.7%;对第1代和第3代野生型乳酸菌的最低抑菌浓度分别为0.8%和1.5%。植物精油对标准型大肠杆菌和野生型大肠杆菌的最低抑菌浓度分别为2.2%和2.0%,对标准型乳酸菌和野生型乳酸菌的最低抑菌浓度分别为2.20%和2.30%;硫酸粘杆菌素对标准型大肠杆菌和野生型大肠杆菌的最低抑菌浓度分别为0.1%和1.8%,标准型乳酸菌和野生型乳酸菌的最低抑菌浓度分别为0.08%和2.1%。所以,在本试验中,植物精油的抗耐受性要好于硫酸粘杆菌素。     

杜仲叶提取物对鲫鱼出血性病原菌抑菌试验的研究

试验测定了杜仲叶主要提取物绿原酸对水产养殖中常见病原菌的最小抑菌浓度及其对嗜水气单胞菌体内和体外抑菌效果。结果显示,绿原酸对水产养殖中的常见病原菌嗜水气单胞菌最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)均为250mg/l,哈维氏弧菌、苏伯利产气单胞菌的MIC与MBC均为500mg/l,肠型点状产气单胞菌的MIC与MBC分别为500、1000mg/l。药敏试验结果发现,绿原酸对嗜水气单胞菌抑菌圈的直径为(19.4±1.2)mm,氟哌酸的抑菌圈直径为(30.3±1.3)mm,土霉素为(28.5±2.5)mm。攻毒试验结果显示,在攻毒7d后,对照组死亡率为45%,饲料中添加0.5%绿原酸的试验组死亡率为10%,添加4%的试验组的死亡率为20%,添加1%和2%的试验组没有鱼死亡,表明饲料中添加1%的绿原酸能有效增强鱼体对嗜水气单胞菌的抵抗能力。试验结果说明,绿原酸对水产养殖中常见的病原菌具有良好的抑菌效果,对嗜水气单胞菌的抑菌效果与抗生素类抗菌药物相当,能够增强机体免疫力,对细菌性疾病具有较强的预防作用。     

中草药熏香燃烟体外抑菌试验

试验研究了中草药熏香燃烟及其不同的溶剂对5种猪场常见细菌的抑菌活性、最低抑菌浓度(MIC)以及抑菌率的影响。结果表明,熏香燃烟的乙醇-DMSO溶解物的抑菌效果最好,尤其是对嗜水气单胞菌和金黄色葡萄球菌的敏感程度较高,抑菌圈直径分别为(12.54±0.19)mm、(8.78±0.26)mm,熏香MIC也分别为78.1 mg/mL和39.1 mg/mL,其次为水-DMSO溶解物,最次为水溶解物。而直接用熏香燃烟熏10~30 min后都可以达到很好的熏灭效果,尤其对嗜水气单胞菌、大肠杆菌、链球菌的熏灭效果最佳,烟熏10 min后灭菌率分别为(100±0)%、(97±0)%、(94±4)%。     

阿米卡星对嗜水气单胞菌的体外药效学研究

为了研究阿米卡星对嗜水气单胞菌的抗菌活性,试验采用试管双倍稀释法测定了阿米卡星对嗜水气单胞菌的最小抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC),从研究不同培养条件对阿米卡星抗嗜水气单胞菌活性的影响以及不同浓度阿米卡星的杀菌动力学曲线。结果表明:阿米卡星对嗜水气单胞菌的MIC为1.6μg/mL,MBC为6.4μg/mL,MBC与MIC的比值为4;随着培养基pH值的升高,阿米卡星抗菌活性升高;随着Mg2+浓度的增加,阿米卡星的抗菌活性逐渐减弱;随着血清浓度的增高,阿米卡星的抗菌活性逐渐减弱;随着细菌接种量的增加,阿米卡星的抗菌活性降低;阿米卡星对嗜水气单胞菌的杀菌曲线表现为2倍MIC、5倍MIC和8倍MIC阿米卡星在1h内的杀菌活性基本相同,随着时间的增加,2倍MIC阿米卡星的杀菌活性开始降低,而5倍MIC和8倍MIC阿米卡星仍然保持着高效的杀菌活性。     

体外法评估不同植物精油对需氧菌的抑菌活性

本试验采用琼脂平板法,测定肉桂醛、百里香酚、香芹酚、牛至油、丁香酚和山苍子油对产肠毒大肠杆菌、宋氏志贺氏菌、乙型溶血性链球菌的最低抑菌浓度,从中选出抑菌能力较强的精油,继续测定其对产肠毒大肠杆菌、出血性大肠杆菌、宋氏志贺氏菌、痢疾志贺氏菌、猪霍乱沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌和乙型溶血性链球菌的抑菌效果,筛选出具有替抗潜力的精油并评估精油作为抑菌剂应用在饲料中的前景。本试验采用琼脂平板培养法,在固态培养基中添加不同浓度的肉桂醛、百里香酚、香芹酚、牛至油、丁香酚和山苍子油,分别接种产肠毒大肠杆菌、宋氏志贺氏菌、乙型溶血性链球菌,测定其最低抑菌浓度,初步筛选出抑菌作用较强的精油,利用同样的方法,继续测定其对产肠毒大肠杆菌、出血性大肠杆菌、宋氏志贺氏菌、痢疾志贺氏菌、猪霍乱沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌和乙型溶血性链球菌的最低抑菌浓度,最终筛选出抑菌能力较强的精油。结果表明:①通过初筛,发现肉桂醛、百里香酚、香芹酚、牛至油和丁香酚的抑菌效果较好,选择该五种精油进行复筛;②复筛结果表明,精油对供试菌株的抑菌能力由强到弱为百里香酚>肉桂醛>香芹酚>牛至油>丁香酚,其最低抑菌浓度分别为为0.02%～0.07%、0.02%～0.08%、0.03%～0.07%、0.04%～0.09%、0.07%～0.18%;③百里香酚、肉桂醛、香芹酚、牛至油作为饲料添加剂具有极好的潜力。     

喹诺酮类药物对嗜水气单胞菌体外生物被膜形成能力的影响

采用微量肉汤稀释法测定3种喹诺酮类药物对21株嗜水气单胞菌的最小抑菌浓度(MIC),体外建立其生物被膜(BF),采用结晶紫法和扫描电镜的方法研究生物被膜的形成和结构,并观察喹诺酮类药物对生物被膜形成能力的影响。结果表明:喹诺酮类药物对嗜水气单胞菌有较强的抑制作用,诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星的抑菌率分别为90.5%,95.25%和85.7%,其中环丙沙星的抑菌作用最强,对21株菌的最小抑菌浓度均在0.7813μg/mL以下。21株嗜水气单胞菌均可在24～48 h内体外形成较为稳定的BF,但不同菌株之间形成BF的能力有所不同。嗜水气单胞菌对喹诺酮类药物较为敏感,环丙沙星浓度在1倍MIC以上即可抑制嗜水气单胞菌生物被膜的早期形成,但细菌形成成熟的生物被膜后,较高浓度药物对生物被膜的影响不明显。     

鲎素对嗜水气单胞菌的抑菌活性及作用机制研究

为探讨鲎素对嗜水气单胞菌的抑杀作用,采用最小抑菌浓度、AB染料、扫描电镜、流式细胞仪和琼脂糖凝胶电泳等方法研究鲎素对嗜水气单胞菌的抗菌活性、杀菌率、胞内紫外物质泄露、膜负电荷数、外部形态结构及胞内基因组DNA的影响。结果表明,鲎素对嗜水气单胞菌的抗菌活性较其他细菌弱;2倍最低杀菌浓度(MBC)鲎素能在短时间内迅速杀死嗜水气单胞菌并导致胞内生物大分子泄漏;扫描电镜发现1倍MBC鲎素能导致轻微的壁膜破损及一些胞内物质渗出和粘连;流式细胞仪结果表明,1倍MBC鲎素能破坏细胞膜的完整性;AB染料测定表明鲎素处理后能改变膜负电荷数;琼脂糖凝胶电泳表明,鲎素能够与嗜水气单胞菌的基因组DNA发生作用,并呈浓度依赖关系,浓度越高对细菌基因组DNA损伤越大。鲎素对嗜水气单胞菌的抑菌活性弱,只有高浓度时才能短时间内导致胞内紫外吸收物质泄露、膜负电荷数发生改变及基因组DNA损伤。     

鱼腥草素注射液抗菌作用的试验研究

合成鱼腥草素注射液对引起奶牛乳房炎的常见致病菌有一定的抗菌效果。它对无乳链球菌和金黄色葡萄球菌的抑菌浓度，在牛奶培养基中为0．5mg／ml，在肉汤培养基中为0．25mg／ml。同时以青霉素G为对照，在肉汤培养基中对无乳链球菌和金黄色葡萄球菌的抑菌浓度分别为0．006国际单位和0．1国际单位／ml；在牛奶培养基中，对无乳链球菌和金黄色葡萄菌球菌的抑菌浓度分别为0．025国际单位／ml和0．04国际单位／ml。试验表明：鱼腥草素对两种细菌具有同等的抑菌效果，而青霉素对无乳链球菌的抑菌效果明显优于金黄色葡萄球菌。在牛奶培养基的抑菌浓度均高于相应的在肉汤培养基的抑菌浓度。     

库拉索芦荟提取物对两种气单胞菌的抑菌作用

为探究库拉索芦荟提取物对嗜水气单胞菌和维氏气单胞菌的抑菌作用,采用醇提法提取库拉索芦荟得到芦荟提取物,使用二倍稀释法和K-B法测定库拉索芦荟提取物对两种气单胞菌的抑菌作用,再用嗜水气单胞菌回感鲫鱼,并用库拉索芦荟提取物对患病鲫鱼进行治疗。结果显示:库拉索芦荟提取物对嗜水气单胞菌的最小抑菌浓度(MIC)为95 mg/mL,最小灭菌浓度(MBC)为105 mg/mL;对维氏气单胞菌的最小抑菌浓度(MIC)为62 mg/mL,最小灭菌浓度(MBC)为65 mg/mL。库拉索芦荟提取物对维氏气单胞菌的抑菌效力与强力霉素、红霉素、奥复星相当,抑菌环直径均为16 mm。嗜水气单胞菌攻毒试验中,对照组鲫鱼死亡率高达100%,而库拉索芦荟治疗组的鲫鱼死亡率降低至20%。库拉索芦荟提取物对嗜水气单胞菌与维氏气单胞菌有良好的抑菌效果。     

一株鲈塘源植物乳杆菌的分离鉴定及其对养殖水体影响研究

利用MRS培养基和LB培养基对广东顺德大口黑鲈养殖池塘水体样品进行了乳酸菌的分离和筛选,共获得27株乳酸菌。以引起大口黑鲈"烂身病"的嗜水气单胞菌为指示菌进行拮抗作用试验,筛选获得一株具有显著抑菌活性的乳酸菌XTL3,并对该菌株进行了生理生化试验、16Sr DNA序列分析及其对大口黑鲈池塘养殖的安全性和效果进行了研究。结果表明,菌株XTL3对嗜水气单胞菌的生长具有较好抑制作用。生理生化试验、16S r DNA序列分析表明,XTL3与植物乳杆菌的相似性为100%,初步鉴定该菌株为植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)。室外养殖池塘安全性和效力检验结果表明,在使用过程中的一个月内,无异常死亡,无病害发生,池塘的溶氧变化差异不显著(P0.05),氨氮的变化差异显著(P0.05),实验塘的水环境保持更稳定。筛选的植物乳杆菌具有良好的抑菌和调水能力,且其生长特性适应大口黑鲈的池塘养殖环境,这为大口黑鲈疾病的生态防控及乳酸菌资源的开发利用奠定了基础。     

乳铁蛋白抑制常见口腔及肠道致病菌的体外活性研究

试验旨在研究乳铁蛋白对常见口腔/肠道致病菌的抑制和细菌生物膜清除作用。选择重组人乳铁蛋白(rhLF)、牛乳铁蛋白(bLF)和蛋清溶菌酶(阳性对照组),对金黄色葡萄球菌等7种菌进行抑菌、细菌生物膜形成和清除等试验。结果表明:(1)最低抑菌浓度试验表明,rhLF、bLF对金黄色葡萄球菌、嗜酸乳杆菌、沙门氏菌、牙龈卟啉单胞菌等具有较强的抑制作用;(2)抑菌圈试验表明,rhLF对金黄色葡萄球菌、嗜酸乳杆菌的抑制效果优于bLF,而对沙门氏菌、牙龈卟啉单胞菌的抑制效果差于bLF(P0.05);(3)生物膜形成抑制试验表明,不同浓度的rhLF对金黄色葡萄球菌的抑制作用均显著高于bLF(P0.05),浓度为5 mg/mL的rhLF抑制效果达到99%;(4)生物膜清除试验表明,不同浓度的rhLF对金黄色葡萄球菌的生物膜清除效果均显著高于bLF(P0.05),浓度为5 mg/mL的rhLF抑制效果达到56%。研究结果表明,乳铁蛋白对常见口腔/肠道致病菌,尤其对金黄色葡萄球菌、嗜酸乳杆菌、沙门氏菌、牙龈卟啉单胞菌等,具有一定的抑制作用;同时对细菌生物膜形成具有抑制和清除作用。     

蒲公英内生真菌对2种鱼类病原菌抑菌效果研究

试验旨在研究蒲公英内生菌对由嗜水气单胞菌和迟缓爱德华氏菌引起鱼类疾病的作用效果,分为2部分:体外抑菌试验和攻毒试验.试验所用的嗜水气单胞菌菌液质量浓度为890万CFU/mL,迟缓爱德华氏菌菌液质量浓度为780万CFU/mL.体外抑菌试验结果显示,蒲公英内生菌对体外培养的2种细菌均有显著抑制效果,嗜水气单胞菌的抑菌圈直径为24.50 mm,对迟缓爱德华氏菌的抑菌圈直径为30.53 mm.攻毒试验以黄河鲤鱼为试验鱼,注射量为0.2 mL/尾.攻毒试验设5个处理组,即对照组、注射嗜水气单胞菌攻毒组、嗜水气单胞菌攻毒后投喂蒲公英内生菌饲料组、迟缓爱德华氏菌攻毒组和迟缓爱德华氏菌攻毒后投喂蒲公英内生菌饲料组.攻毒试验显示,迟缓爱德华氏菌攻毒后投喂含有蒲公英内生菌饲料组累积病死率显著高于未注射致病菌的对照组,低于注射致病菌投喂普通饲料的试验组.嗜水气单胞菌攻毒组与嗜水气单胞菌攻毒后投喂蒲公英内生菌饲料组试验鱼累计病死率无显著性差异.     

止痢草精油对感染嗜水气单胞菌罗非鱼免疫功能的影响

嗜水气单胞菌是淡水鱼流行性败血症的主要致病菌。在采用添加不同剂量的止痢草精油的饲料投喂3周后,对罗非鱼腹腔注射嗜水气单胞菌,在其攻毒后不同时间取血,通过NBT阳性细胞数量、白细胞数量以及血清溶菌酶活力的变化趋势来研究止痢草精油及病原菌感染对鱼类非特异性免疫功能的相互影响。结果表明,在罗非鱼感染嗜水气单胞菌后72h内,白细胞数量、NBT阳性细胞数量以及血清溶菌酶活力依感染浓度不同,呈现先增加后降低的趋势,而添加了止痢草精油试验组的这3项指标也是先出现增加的趋势,但降低幅度和速度减小,同时到后期恢复到正常水平的速度更快。说明嗜水气单胞菌与罗非鱼非特异性免疫功能之间呈现一定的时间效应,而止痢草精油对罗非鱼的非特异性免疫机能可能有协同增强功效。     

鳄龟血液抗菌肽生物活性研究

为探讨鳄龟血液抗菌肽初提物的生物活性,采用纸片法和固体培养基连续稀释法对其进行抗菌效果检验,结果表明:分离纯化的血液抗菌肽对G-细菌和G+细菌均有不同程度的抑制或杀灭作用,但不同的微生物对其敏感性不同。其对致病性嗜水气单胞菌、葡萄球菌、枯草杆菌、蜡样芽孢杆菌和沙门氏菌的最小抑菌质量浓度分别为12.5,25,50,50,200μg/mL。鳄龟血液抗菌肽具有①耐热性:将其沸水浴5 min后仍然具有极强的抗菌活性,沸水浴10 min后其抗菌活性减弱;②耐酸性和不溶血性:pH值为6.0,5.0,4.0,2.5时,鳄龟血液抗菌肽对嗜水气单胞菌均有抑菌活性,当pH值下降至2.5时其抑菌圈最小。     

中西药联用对嗜水气单胞菌体外抑菌作用研究

为了探讨中西药联用对舌鳎源嗜水气单胞菌的体外抑菌效果,试验采用水提法提取中草药有效成分,用试管二倍稀释法分别测定黄柏、黄芩、知母、连翘、阿米卡星、环丙沙星6种药物对嗜水气单胞菌的最小抑菌浓度(MIC),用微量肉汤棋盘稀释法测定中西药联用对嗜水气单胞菌的联合抑菌指数(FIC)。结果表明:这6种药物对舌鳎源嗜水气单胞菌均有不同程度的抑制作用,单独使用时以阿米卡星抑菌效果较好。此外,在8种药物组合中:阿米卡星+黄柏及环丙沙星+黄柏为颉颃作用;阿米卡星+知母及环丙沙星+连翘为无关作用;环丙沙星+知母、阿米卡星+黄芩、阿米卡星+连翘、环丙沙星+黄芩为相加作用。说明中西药联用对由嗜水气单胞菌引起的细菌病具有一定的作用。     

嗜水气单胞菌Lamp检测方法的建立及应用

基于嗜水气单胞菌气溶素（aerolysin）基因的序列，设计了1套引物，通过条件优化，成功建立了针对致病性嗜水气单胞菌的环媒恒温基因扩增（Lamp）检测法。采用Lamp法对病原菌进行了扩增，并对病鱼血样进行了检测。结果表明，该法只检出致病性嗜水气单胞菌。对不同浓度的细菌悬液扩增结果表明，Lamp检测嗜水气单胞菌的最低菌液浓度为1．4～14／μL。     

单宁酸对嗜水气单胞菌转录组影响的研究

嗜水气单胞菌作为水产养殖业中的主要病原菌，严重危害该产业的发展。为探究单宁酸对嗜水气单胞菌的抑菌作用及其转录组的影响，本实验将单宁酸2倍倍比稀释(8μg/mL～8 192μg/mL)后，测定单宁酸对嗜水气单胞菌ATCC 7966株的最小抑菌浓度(MIC)；将嗜水气单胞菌分别与不同浓度的单宁酸共培养，根据所测细菌OD600nm值(共测24 h)，绘制细菌的生长曲线。结果显示，单宁酸对嗜水气单胞菌的MIC为2 048μg/mL；浓度低于64μg/mL (临界值)单宁酸处理后不影响嗜水气单胞菌的生长。因此本实验采用64μg/mL的单宁酸与嗜水气单胞菌ATCC 7966株共培养，每组重复4次，12 h后提取各组嗜水气单胞菌总RNA，反转录为cDNA后构建cDNA文库，再利用随机引物，经PCR扩增、定量后，采用Illumina HiSeq测序平台进行转录组测序(RNA-Seq)。通过计算每个样品中r RNA的占比(rRNA%)及碱基的错误率对测序数据质控；采用Bowtie2将获得的各组嗜水气单胞菌测序数据与GenBank中嗜水气单胞菌ATCC 7966株参考基因组比对，分析它们之间的相似性。结果...     

疑似草鱼嗜水气单胞菌的分离鉴定及药敏试验

试验对疑似嗜水气单胞菌草鱼的肝脏、脾脏、肾脏组织进行嗜水气单胞菌的分离鉴定。通过普通营养琼脂、胰蛋白大豆琼脂及生化试剂等的分离培养与生化鉴定后,获得3株细菌;16S rRNA通用引物检测3株细菌的基因序列比对确定菌株后,对确定的草鱼嗜水气单胞菌进行回归试验确认其致病性,然后采用临床上常用的阿奇霉素、阿米卡星、链霉素等10种抗生素进行药敏试验。结果表明,经过分离培养、生化鉴定及16S rRNA通用引物鉴定后确定3种菌株分别为嗜水气单胞菌、嗜麦芽窄食单胞菌和腐败斯瓦尼菌,确定的嗜水气单胞菌回归试验证明其具有致病性;药敏试验显示阿奇霉素对腐败斯瓦尼菌和嗜麦芽窄食单胞菌敏感,其抑菌直径分别为105、95 mm,阿米卡星对嗜麦芽窄食单胞菌、嗜水气单胞菌和腐败斯瓦尼菌这3种菌都较敏感,抑菌直径分别为105、95和93 mm。结果表明,疑似为嗜水气单胞菌病的草鱼有3种细菌感染,其中鉴定的嗜水气单胞菌是致病菌,常用抗生素阿米卡星对3种菌都有抑制作用,而仅对腐败斯瓦尼菌和嗜麦芽窄食单胞菌敏感的是阿奇霉素。     

大黄素对嗜水气单胞菌的抑菌作用及其机制

为了探究大黄素对嗜水气单胞菌的体外抑菌作用及其机制,本试验采用二倍稀释法检测大黄素最低抑菌浓度(MIC)及其对试验菌生长曲线的影响;检测培养液中碱性磷酸酶(AKP)活性,以分析大黄素对试验菌细胞壁通透性的影响;检测β-D-半乳糖苷酶活性和DNA含量,以探究大黄素对试验菌细胞膜通透性的影响;采用结晶紫染色法检测大黄素对试验菌生物膜形成的影响;检测大黄素对外毒素溶血活性和内毒素分泌量的影响及其对感染鲫鱼的保护作用。结果显示,大黄素MIC为32μg/mL,可明显抑制嗜水气单胞菌生长。与二甲亚砜(DMSO)对照相比,大黄素浓度≥32μg/mL时,培养液中AKP活性、β-D-半乳糖苷酶活性和DNA含量均显著升高(P<0.05);大黄素浓度为4～16μg/mL时,生物膜形成量显著降低(P<0.05);大黄素浓度为32～128μg/mL时,培养液中外毒素的溶血百分比为(36.97±3.60)%～(75.15±7.29)%(P<0.05),内毒素的分泌量无显著变化(P>0.05)。鲫鱼注射大黄素[≥64 mg/(kg·bw)]后感染嗜水气单胞菌(2×10⁶...     

苦参生物碱提取物对奶牛乳房炎病原菌的体外抗菌活性研究

为了研究苦参生物碱提取物对奶牛乳房炎病原菌的体外抗菌活性,试验采用浓度系列稀释法,应用苦参生物碱提取物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、无乳链球菌和停乳链球菌进行体外抗菌活性研究。结果表明:苦参生物碱提取物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、无乳链球菌和停乳链球菌最低抑菌浓度(MIC)分别为12.50,3.13,1.56,0.78 mg/m L,最低杀菌浓度(MBC)分别为12.50,6.25,1.56,1.56 mg/m L。说明苦参生物碱提取物对引起奶牛乳房炎常见的4种致病菌均有良好的抑菌和杀菌效果,为防治奶牛乳房炎中药有效成分的开发提供理论依据。