4个品种猪血清中sLAIR-1表达量的ELISA检测

【目的】进一步证实利用广西巴马小型猪建立异种器官移植供体模型的可行性。【方法】利用夹心ELISA方法分别检测广西巴马小型猪、长白猪、大约克猪及杜洛克猪血清中可溶型白细胞相关免疫球蛋白样受体1（sLAIR-1）含量,筛选出血清中sLAIR-1表达量最低的猪品种,为异种移植提供一定参考指标。【结果】所检测的4个不同品种猪血清中sLAIR-1的表达量分别为：广西巴马小型猪（2．39＋0．20μmol／L）〈大约克猪（3．51±0．28μmol／L）〈长白猪（3．59±0．28μmol／L】〈杜洛克猪（3．62_±0．31μmol／L）,且广西巴马小型猪血清中sLAIR-1的表达量显著低于长白猪、大约克猪、杜洛克猪3个品种（P〈0．01）。【结论】广西巴马小型猪在异种移植中具有良好的先天优势,可能会成为异种移植的理想动物模型。     

ELISA 法检测干旱下花生不同品种中AhNCED1 蛋白表达变化

ABA合成关键酶Ah NCED1与花生抗旱性相关。优化ELISA法检测花生Ah NCED1蛋白体系,利用该体系检测不同产地7个花生品种幼苗干旱处理24h后叶片内Ah NCED1蛋白表达变化。结果表明,正常生长条件下,7个品种Ah NCED1蛋白表达量呈现较低水平,品种间无显著性差异;干旱24h后,所有品种的Ah NCED1蛋白表达量显著增加;Ah NCED1蛋白表达变化倍数从大到小依次是:中花16濮花28花育19福花4中花6花育33海花1,与QPCR检测Ah NCED1基因表达和Westernblot的检测结果比较一致。综合分析3种方法检测不同品种的Ah NCED1基因和蛋白结果表明,ELISA法及QPCR配合使用适用于大范围的快速筛选抗旱花生品种,为抗旱花生品种筛选提供技术支撑。     

应用ELISA检测我国猪病的研究进展

ELIsA技术具有操作简便、快速准确、易于标准化、特异性强、敏感性高、重复性好、经济实用等优点,已被广泛应用于畜牧业、临床医学、环境污染控制、食品安全监测、生物、化学等领域。文章综述了应用ELISA检测我国猪病的研究进展。     

猪细环病毒1型间接ELISA抗体检测方法的建立

【目的】建立一种检测猪细环病毒1型抗体的血清学方法。【方法】以猪细环病毒1型衣壳蛋白为包被抗原,筛选和优化抗体检测反应条件来建立一种检测猪细环病毒1型衣壳蛋白抗体的间接ELISA方法,之后进行特异性和重复性试验,并进行初步临床应用检测。【结果】确定了检测猪细环病毒1型衣壳蛋白抗体的间接ELISA方法的各项最佳反应条件;对8种猪源病毒阳性血清的检测结果显示只有猪细环病毒1型阳性血清为阳性,显示出良好的特异性;批内变异系数均小于5%,批间变异系数均小于10%,显示出良好的重复性。对来源于北京和湖南地区的400份猪血清样品的检测结果显示,猪细环病毒1型衣壳蛋白抗体阳性率为75.25%,PCR阳性率为71.00%,二者之间没有显著差异(P>0.05),表明这两个地区存在较多的的猪细环病毒1型感染。【结论】建立了一种特异性和重复性都良好的检测猪细环病毒1型衣壳蛋白抗体的间接ELISA,可用于猪细环病毒1型抗体的临床检测。     

应用重组MSG1蛋白检测猪附红细胞体抗体的ELISA检测方法的建立

 【目的】针对猪附红细胞体g1基因编码的MSG1表面粘附蛋白（rMSG1）和以此蛋白制备的多克隆抗体,建立相应的ELISA方法进行猪附红细胞体的临床检测,并进行效果评估,以获得一种猪附红细胞体感染的有效检测手段。【方法】将MSG1-pET28c_E.coli BL21菌株,在适宜的条件进行诱导表达,经菌体破碎、层析等步骤获取纯化的目的蛋白。以纯化的rMSG1制备免疫原接种小鼠,获取符合要求的多克隆抗体。以rMSG1和多克隆抗体建立ELISA检测方法,分析其敏感性、特异性、符合性和重复性。【结果】接种后获得了符合效价的抗血清;基于rMSG1的间接ELISA方法临床检测猪附红细胞体感染率为46.25%,其中阳性样本对已知小鼠抗血清有明显的阻断作用,并且与其它一些抗原无交叉反应;此ELISA方法的特异性和敏感性分别可达到97.06%和95.92%,较间接血凝试验(IHA)有更高的检出率。【结论】结果显示MSG1具有良好的抗原性,建立的ELISA方法具有较高的敏感性、特异性、符合性和可重复性,在临床检测中可以取得理想的效果。     

伏马菌素B1间接竞争ELISA检测方法的建立和应用

以人工合成的抗原OVA-FB1作为包被抗原,FB1(伏马菌素B1)为竞争抗原,两者与一定量的抗FB1单抗反应,建立检测FB1的间接竞争ELISA方法,对玉米样品进行初步检测应用。结果表明,间接竞争ELISA方法最佳抗原包被浓度为196 ng/ml,包被时间为4℃过夜,单抗最佳工作浓度为1∶4 000,酶标二抗最佳工作浓度为1∶2 500,最佳的抗原抗体竞争反应时间和温度为4℃过夜作用。可测最适范围为10~1 000 ng/ml,回归方程为y=1.113-0.313x,相关系数R2为-0.990,灵敏度为90.88 ng/nl,最低检测限为7.83 ng/ml,批内和批间变异系数分别为3.24%和2.45%,平均添加回收率为94.32%。     

饲料中三聚氰胺的ELISA检测方法的探讨

试验利用BRAXIS试剂盒和自制（经气相色谱质谱法确证不含三聚氰胺）三聚氰胺添加量为2 mg/kg的配合料和浓缩料作为阳性对照样品,对100批次饲料产品的进行了三聚氰胺筛选,并将两种方法的筛选结果按照NY/T1372-2007中的气相色谱质谱法进行了确证和比较。试验结果表明：利用三聚氰胺添加量为2 mg/kg配合料和浓缩料为阳性对照样品,对样品的筛选结果,要比使用BRAXIS试剂盒的内制曲线筛选的结果,产生的假阳性少,准确率相对要高。     

双抗体夹心ELISA检测排泄物PEDV

用蔗糖密度梯度离心法纯化猪流行性腹泻病毒(PEDV)免疫BALB/c小鼠,应用杂交瘤技术获得2株分泌抗猪流行性腹泻病毒(PEDV)单克隆抗体,建立检测PEDV的双抗体夹心ELISA方法。结果表明,该双抗体夹心ELISA最佳反应条件为,兔抗PEDV抗体稀释度为1:800包被37℃1 h加4℃12 h,样品反应时间为90 min,酶标抗体工作浓度为1:2 000作用45 min,以OD490nm≥0.37作为阳性判定标准。该ELISA的重复性变异系数小于10%,最低检测限为5×103.67TCID50/m L,并与猪传染性胃肠炎病毒和猪轮状病毒无交叉反应。用该ELISA方法和RT-PCR方法检测48份临床粪便样品,结果显示,ELISA阳性检出率为39.6%,而RT-PCR方法检测卡的阳性检出率为43.8%。表明双抗体夹心ELISA方法具有特异性强、灵敏性高和重复性好等优点,可用于PEDV快速检测。     

猪尿中克伦特罗残留的ELISA检测研究

对自主开发研制和德国r-Biopharm公司的p兴奋剂酶联免疫（EUSA）试剂盒的标准曲线线性范围、斜率、B／岛抑制浓度、板内变异系数、板间变异系数、阳性检出率、回收率和交叉反应率等进行了比较试验。结果表明：自制试剂盒的线性范围为0．3～8．1ng／ml时，50％抑制率浓度IC50的平均值为0．93ng／ml；板内变异系数小于2．2％；板间变异系数小于13．8％；样品回收率为85％～96％；实际样品检测和德国r-Biopharm公司的试剂盒阴阳性符合率100％；与克伦特罗和甲基克伦特罗交叉反应率均为100％，与沙丁胺醇和特布他林的交叉反应率分别为88％和86％。     

食品中酪蛋白成分的ELISA检测方法的建立及评价

对建立并评价酪蛋白酶联免疫(ELISA)检测方法进行了研究,选用了ELISA Systerns酪蛋白残留试剂盒进行实验,结果显示:此试剂盒对食品中的酪蛋白成分特异,与其他几种过敏食品均无交叉反应.试剂盒体现了较高的精密度(CV<5%)和准确度.定性检测限小于1.56 mg/L,定量范围为0.24～1.926 mg/L.在热加工过程中,由于蛋白质变性导致抗原表位发生变化不能被抗体识别从而减弱了对酪蛋白成分的识别能力.使用ELISA Systems酪蛋白残留检测试剂盒通过ELISA方法检测食品中的酪蛋白成分可以得到可靠稳定的结果.     

鸡肉中氟苯尼考ELISA检测方法的建立及应用

 【目的】制备抗氟苯尼考（FFC）的高亲和力特异性抗体,建立检测氟苯尼考的间接竞争ELISA新方法。【方法】氟苯尼考分别与牛血清白蛋白（BSA）和人血清白蛋白（HSA）经混合酸酐法偶联,得到免疫抗原和包被抗原,其偶联比分别为14.4和14.7。用免疫原FFC-HS-BSA免疫新西兰大白兔获得了效价较高的特异性抗体。建立并优化了间接竞争ELISA检测方法。【结果】抗血清效价为1﹕102 400。最佳包被抗原浓度为0.5 μg?ml-1,最佳抗体工作浓度为1﹕6 400,酶标二抗的工作浓度为1﹕20 000。回归方程Y = -0.1516X + 0.788（R2 = 0.9859）,检测范围为0.18～500 ng?ml-1,检出限为0.18 ng?ml-1,批内和批间平均变异系数分别为4.86%和7.77%。交叉反应试验中,抗血清与FFC结构相似的氯霉素和甲砜霉素交叉反应率分别为0.094%和0.098%,与其它药物交叉反应率均小于0.01%,表明该方法具有很强的特异性。FFC以浓度0.18～500 ng?g-1在鸡肉中添加,回收率为84.14%～106.1%,变异系数为2.1%～5.6%。【结论】成功获得了高效价、高特异性的抗FFC抗体,建立了鸡肉中氟苯尼考残留检测的ELISA方法。结果表明,所建立的检测方法具有灵敏、准确、简便、快速的特点。     

猪细小病毒NS1蛋白的截短表达与间接ELISA诊断方法的建立

【目的】建立一种快速检测猪细小病毒（Porcine parvovirus,PPV）野毒抗体的方法。【方法】参照已发表的PPV基因组（AY502114.1）序列设计合成特异性引物,利用PCR扩增PPV-NS-1基因主要抗原区域,将目的片段定向克隆至表达载体pET30a(+),转化BL21（DE3）表达菌,用IPTG诱导表达重组蛋白。以该蛋白作为诊断抗原,经过对间接ELISA条件的优化,建立检测PPV抗体的NS1-ELISA诊断方法,对该方法的特异性、敏感性、重复性进行检测。用建立的PPV NS1-ELISA诊断方法和血凝抑制试验（HI）同时对临床送检的306份血清样品进行检测,比较二者的符合率。【结果】成功扩增了870 bp的NS1基因部分片段,构建了pET30a-NS1原核表达载体,获得了以包涵体形式表达的重组蛋白。该重组蛋白具有良好的抗原性和特异性。以纯化蛋白作为诊断抗原,建立了检测猪细小病毒抗体的NS1-ELISA诊断方法。该方法与猪圆环病毒2型（PCV-2）、猪伪狂犬病病毒（PRV）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪乙脑病毒（JEV）、猪流行性腹泻病毒（PEDV）、猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）、猪瘟病毒（CSFV）等7种常见猪病病毒的阳性血清均不发生反应;该方法检测敏感性为1∶12 800;批内重复性试验和批间重复性试验中样品的变异系数分别小于5%和10%。PPV NS1-ELISA检测方法与HI的符合率为96.2%。【结论】制备了NS1重组蛋白,该蛋白具有良好的免疫原性,以其作为包被抗原建立的PPV NS1-ELISA诊断方法具有良好的重复性、敏感性和特异性,为PPV的快速诊断和流行病学调查等提供了一种快速、简便的血清学诊断方法。     

猪流行性腹泻病毒抗体间接ELISA检测方法的建立与应用

【目的】建立2种猪流行性腹泻病毒(PEDV)抗体间接ELISA检测方法.【方法】分别以GD-1株PEDV灭活全病毒和原核表达的COE融合蛋白作为包被抗原,确定最佳ELISA条件,检验其重复性、特异性等,并进行临床应用.【结果和结论】确定了2种ELISA方法的最佳条件,重复性试验显示变异系数分别小于4.60%和5.30%,特异性试验检测口蹄疫病毒、猪瘟病毒、猪圆环病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒阳性血清均为阴性,并具有良好的稳定性和较长的保存期.临床样品检测结果显示,223份血清样品总阳性率分别为97.3%(217/223)和98.6%(220/223),2种方法检测的阳性率相近,具有良好的检出率和很高的符合率,为PEDV的抗体检测及流行病学调查提供了一种技术手段.     

竞争抑制ELISA法检测植物中豌豆胰岛素PA1b

为研究豌豆胰岛素PA1b在植物生长发育中的作用,利用竞争抑制ELISA法,检测PA1b在豌豆、芋头、姜、西红柿、苦瓜、蒜头、洋葱、丝瓜、黄瓜等植物中的分布,以及PA1b在豌豆种子发芽过程中的含量变化。结果显示PA1b在豌豆中含量最高,且随着豌豆种子发芽时间的增加含量逐渐减少,PA1b可能对植物生长发育起调控作用。     

克仑将罗在猪肝脏中残留检测的ELISA法研究

本研究旨在ＥＬＩＳＡ试剂盒建立一种简便、可靠的猪肝脏中克仑特罗残留的检测方法,添加了适量克仑特罗标准工作液的肝脏样品同５倍０．１ｍｏｌ／Ｌ,的盐酸溶液匀浆,冻藏解冻后离心。上清液用正已烷萃取脂溶性杂质。再用氢氧化钠溶液调节ＰＨ至１２。用异丁醇提取待测药物,将提取液在６０℃用方法的线性范围为０．１３～５．３ｎｇ／ｍｌ,回归方程为ｙ＝－１．８００ｘ＋２．２８５,相关系数ｒ＝０．９９７,最低检测限为０．     

检测牛IL-4双抗体夹心ELISA方法的建立

为利用牛白细胞介素-4 (BoIL-4)的特异性单克隆抗体(MAb)建立检测BoIL-4的双抗体夹心ELISA方法,以多种ELISA方法对7株抗BoIL-4的单抗进一步筛选,得到反应最佳的2株单抗8B7和4A10,以A9表达的重组BoIL-4为阻断剂的阻断ELISA试验中,表明这2株单抗也可识别所构建的细胞系A9表达的重组BoIL-4。以单抗8B7作为包被抗体,以标记了HRP的单抗4A10作为检测抗体建立的双抗体夹心ELISA方法可检测大肠埃希菌、毕赤酵母和Flp-In-293细胞系3种表达系统表达的重组BoIL-4,最低检测限分别为0.25、8和2 ng·mL^-1,且对A9细胞系上清中表达的BoIL-4检测效果和特异性良好。该研究建立的BoIL-4双抗体夹心ELISA方法为深入研究BoIL-4、开发BoIL-4 ELISA检测试剂盒奠定了基础。