胶体金标记兔抗-维氏气单胞菌Lam B多克隆抗体的制备与优化

文章旨在开发一种适用于组装维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)胶体金快速检测试纸条的胶体金标记抗体。试验采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,按柠檬酸三钠加入体积（75、100、150、200μL）分为1~4组,作为试验组,另设空白对照组。5支试管混合液分别水浴加热后肉眼观察胶体金颜色,计算胶体金粒径,进行抗体标记浓度筛选和pH优化。结果显示,组别3胶体金的颜色呈酒红色,最大吸收波长为524nm,胶体金粒径为22.10nm,符合胶体金最佳标准。当兔抗-Lam B抗体的加入浓度为7μg/μL,pH为8.5时具有最大吸光度为0.6439。可见,该研究胶体金标记兔抗-维氏气单胞菌Lam B多克隆抗体制备中柠檬酸三钠与氯化金四水合物的最佳比例为150μL:10mL,兔抗-Lam B多克隆抗体的最佳浓度为7μg/μL,反应体系最佳pH为8.5。     

用胶体金免疫电镜技术检测新城疫病毒

应用柠檬酸三钠还原法制备了20 nm的胶体金颗粒标记NDV抗体,并且用直接电镜、免疫电镜和胶体金免疫电镜技术比较观察了新城疫病毒.证明胶体金免疫电镜技术作为检测NDV的检测方法具有简单、快速、准确和无污染等优点.     

多棘海盘车柠檬酸脱毒工艺的优化研究

为研究多棘海盘车Asterias amurensis柠檬酸脱毒的最佳工艺条件,采用正交试验法进行了有关试验研究。结果表明:单因素试验中,增大柠檬酸浓度、提高脱毒温度、延长脱毒时间均可提高多棘海盘车的皂苷脱除率,但也会造成多棘海盘车蛋白质保留率显著降低(P<0.05),增大料液比会降低多棘海盘车蛋白质保留率,当料液比为1∶10左右时,多棘海盘车的皂苷脱除率最大;在单因素试验的基础上,利用正交试验法对多棘海盘车脱毒工艺进行了优化,多棘海盘车脱毒试验中4个因素对综合评分的影响程度依次为脱毒温度>脱毒时间>料液比>柠檬酸浓度。研究表明,当柠檬酸浓度为0.10 mol/L,脱毒温度为50℃,料液比为1∶8,脱毒时间为3 h时,多棘海盘车具有较好的脱毒效果和蛋白质保留率,其皂苷脱除率和蛋白质保留率分别为70.96%和91.29%,综合评分为1.982。     

多棘海盘车柠檬酸脱毒工艺的优化研究

为研究多棘海盘车Asterias amurensis柠檬酸脱毒的最佳工艺条件,采用正交试验法进行了有关试验研究。结果表明:单因素试验中,增大柠檬酸浓度、提高脱毒温度、延长脱毒时间均可提高多棘海盘车的皂苷脱除率,但也会造成多棘海盘车蛋白质保留率显著降低(P0.05),增大料液比会降低多棘海盘车蛋白质保留率,当料液比为1∶10左右时,多棘海盘车的皂苷脱除率最大;在单因素试验的基础上,利用正交试验法对多棘海盘车脱毒工艺进行了优化,多棘海盘车脱毒试验中4个因素对综合评分的影响程度依次为脱毒温度脱毒时间料液比柠檬酸浓度。研究表明,当柠檬酸浓度为0.10 mol/L,脱毒温度为50℃,料液比为1∶8,脱毒时间为3 h时,多棘海盘车具有较好的脱毒效果和蛋白质保留率,其皂苷脱除率和蛋白质保留率分别为70.96%和91.29%,综合评分为1.982。     

棉籽油制备生物柴油的工艺条件优化研究

以棉籽油与甲醇为原料,在催化剂(NaOH)的作用下,通过甲醇酯交换反应制备生物柴油。采用单因素和正交试验,考察醇油比、催化剂用量、反应温度、反应时间对生物柴油收率的影响。确定最佳反应条件为醇油比6:1,催化剂用量1.1%,反应温度55℃,反应时间55min。在此条件下,产率不低于95.89%。     

仿生法制备酸枣仁提取物工艺条件的优化

以酸枣仁总皂苷含量和浸膏得率的综合评分为考察指标,通过L9(34)正交设计试验,研究影响仿生法制备酸枣仁提取物的各因素。结果表明,影响仿生法制备酸枣仁提取物的各因素大小依次为:固液比(酸枣仁生药与提取液的比例D)>搅拌时间(B)>搅拌次数(C)>转速(A)。仿生法制备酸枣仁提取物的最佳工艺条件为:固液比1:10,搅拌提取两次,每次搅拌时间10min,搅拌转数125r/min。     

双氢青蒿素制备工艺的优化

采用正交试验法对双氢青蒿素的制备工艺条件进行优化,考察了在甲醇介质及低温条件下,自制设备制备双氢青蒿素的主要影响因素及其对反应产物含量的影响。结果表明,得到的最佳工艺条件为甲醇体积分数99.9%,硼氢化钠含量98.0%,反应温度0℃,反应器转速为300.0 r/min,液固比10.0∶1(m∶V),在此条件下所得双氢青蒿素含量大于96.8%,纯度为99.2%。     

杉木叶绿素锌钠的制备工艺及稳定性

以杉木针叶提取叶绿素,经皂化、锌代及成盐反应制备叶绿素锌钠盐,通过正交试验确定最佳工艺条件,并对叶绿素锌钠的光稳定性、热稳定性以及耐酸碱性等方面进行研究。结果表明,最佳工艺条件为:在60℃下用无水乙醇浸提7 h,质量分数为5%的NaOH溶液皂化50 min,质量分数为20%的ZnSO4溶液锌代60 min,质量分数为5%的NaOH-C2H5OH溶液成盐。叶绿素锌钠耐热性较好,但耐光性较差。     

微波法提取叶下珠多糖工艺条件优化

采用单因素试验和L9(33)正交试验,研究微波法提取叶下珠多糖工艺中微波功率、微波处理时间、料液比对多糖提取率的影响.结果表明,影响叶下珠多糖提取率的各因素依次为微波功率(A)＞微波处理时间(B)＞料液比(C),最佳提取工艺为A2B2C3,即微波功率为中温档,微波处理时间为4min,料液比1 g∶20mL,在此工艺条件下,叶下珠多糖提取率为7.94％.     

柠檬酸催化大豆异黄酮糖苷水解苷元的工艺研究

以水解前后大豆异黄酮糖苷含量变化计算水解率为评价指标,采用单因素和正交试验法对水解的工艺条件进行优化。结果表明,柠檬酸催化大豆异黄酮糖苷水解苷元最佳工艺为:反应温度127℃,反应时间为1.8 h,柠檬酸水溶液浓度为1.6 mol/L,水解率达到90%以上。     

免疫胶体金技术及其在临床诊断上的研究进展

综述了免疫胶体金技术的原理、特点以及斑点金免疫渗滤法、胶体金免疫层析法在临床诊断上的应用研究进展,并分析了该技术存在的问题及发展趋势。     

免疫胶体金技术在马铃薯病毒检测上的应用

免疫胶体金技术是一种快速、简便、结果容易判定的新型免疫标记技术,应用免疫胶体金技术制备试纸条具有特异性强、价格低、灵敏度高的特点,适用于马铃薯病毒检测,特别广泛适用于田间和口岸现场检测等工作。文章对免疫胶体金技术的基本原理、制备方法以及其目前在马铃薯病毒检测中的应用情况进行了综述。     

应用胶体金试纸条诊断方法检测牛结核病的试验

采用牛结核MPB70/83抗体检测胶体金试验方法对贵阳周边及某县奶牛场共309头奶牛进行牛结核病检测,同时采用结核菌素(PPD)皮试进行对比试验,结果显示,该病的感染率为4.48%~6.47%,胶体金试纸条试验与PPD反应具有一定的符合率[75%(15/20)],采用生物统计分析,进行χ2检验,计算得χ2c=0.703,χc2<χ20.05,显示两种试验差异极不显著。同时试验还证明了牛结核MPB70/83抗体检测胶体金试纸条试验方法具有快速、简便、特异、敏感的特点,并且可作为PPD反应的辅助诊断方法。因此,该方法具有良好的应用前景。     

内源乳化法制备亚硒酸钠 / 海藻酸钠微胶囊及其环境响应性

【目的】为提高亚硒酸钠的生物利用率,通过内源乳化法制备环境响应性亚硒酸钠 / 海藻酸钠微 胶囊（SSSAMC）。【方法】以天然高分子海藻酸钠（SA）为壁材、亚硒酸钠（Na2SeO3）为芯材、纳米碳酸钙 （Nano-CaCO3）为交联剂制备 SSSAMC。采用热重分析和扫描电镜与能谱扫描结合分析 SSSAMC 的热稳定性与 形貌。通过测定 SSSAMC 在不同 pH、温度以及离子浓度下的溶胀率,考察 SSSAMC 的环境响应性,并分析了 SSSAMC 溶胀率随时间变化的关系。【结果】该法制备的 SSSAMC 具有良好的热稳定性,兼具 pH、温度和离 子浓度响应性,其响应溶胀过程符合 Schott 溶胀模型,拟合相关系数 R2 在 0.99 以上。【结论】SSSAMC 兼具 良好的热稳定性和环境响应特性,具备作为肠道释放的饲用硒营养剂的应用潜力。     

鸭瘟病毒单抗的制备及胶体金试纸条检测方法的建立

【目的】鸭瘟（DP）是由鸭瘟病毒（DPV）引起的一种急性、败血性传染病,以头颈肿胀、食道黏膜和泄殖腔黏膜出血、黄白色溃疡,头颈部皮下有黄白色胶冻样渗出为特征。该病一旦发生,发病急、死亡快、死亡率高,对养鸭业危害严重。快速诊断是控制鸭瘟的重要措施之一,可以及时确定病原,以便采取有效的防制手段。试验旨在建立鸭瘟病毒（DPV）胶体金快速检测方法。【方法】利用生物学软件Protean分析,选择鸭瘟病毒抗原表位较多的一段序列设计引物,PCR扩增目的基因。连接到载体pMD-18T上,测序正确后再连接到原核表达载体pET-28a上。将获得的重组质粒转化至Rosetta感受态细胞中进行诱导表达。表达的蛋白经纯化后测其浓度并经Western blotting鉴定分析。以表达的DPV-gB蛋白作为抗原,免疫7周龄BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经间接ELISA筛选及亚克隆,获得DPV-gB特异性单克隆抗体。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,以制备的 H6F6单抗作为标记抗体（标记的最适pH为8.0-8.5,最佳标记浓度为15倍原液稀释）,将纯化的A8D7单抗（浓度为2倍原液稀释）和羊抗鼠IgG（浓度为10倍稀释）包被在硝酸纤维素膜（NC）上,分别作为检测线和质控线,经条件优化建立了鸭瘟病毒胶体金试纸条检测方法。【结果】共获得4株能稳定分泌抗DPV-gB蛋白抗体的杂交瘤细胞株,命名为A8D7、E6C3、H11F8、H6F6。间接ELISA检测腹水效价分别为1:10³、1:10³、1:10⁵、1:10³。亚类鉴定结果分别为IgG2b、IgG2a、IgG2b、IgG1,轻链均为kappa链。Western blotting结果显示4株单抗均能与DPV-gB蛋白特异性结合。IFA结果显示制备的4株单抗是针对DPV产生的。建立的胶体金试纸条方法能够特异性地检测鸭瘟病毒,与鸭坦布苏病毒、H9N2亚型禽流感病毒、呼肠孤病毒、减蛋综合征病毒无反应。阳性尿囊液稀释50倍后用该试纸条检测依然为阳性;用不同批次的试纸条重复检测,结果无差异。利用制备的胶体金试纸条和PCR方法对38份临床样品进行检测比较,结果显示两者符合率为91.6 % 。【结论】本研究建立的试纸条检测方法具有良好的特异性、敏感性、重复性和稳定性,可用于DPV的快速检测。     

同时检测牛奶中喹诺酮类和庆大霉素残留的胶体金免疫层析方法研究

【目的】喹诺酮类药物和庆大霉素均为高效、广谱抗菌药物,对大多数革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌都具有显著的抗菌效果,是中国畜牧业和水产业中常用的两类兽药。由于这两类药物在动物源性食品中的残留可能导致对人类健康的危害,因此,为了保护消费者的健康,研究和制定动物源性食品中同时检测这两类药物的残留检测方法对完善中国的食品安全监测体系具有重要意义。【方法】建立了同时检测牛奶中13种喹诺酮类和庆大霉素残留的胶体金免疫层析方法。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,并对喹诺酮类和庆大霉素单克隆抗体按比例进行混合标记。同时,采用方阵法系统研究了胶体金标记这两类抗体时的pH值和抗体用量对灵敏度的影响,并对这两类药物抗原的包被条件进行选择确定。在此基础上研发出可同时检测牛奶中13种喹诺酮类药物和庆大霉素的胶体金快速检测试纸条,试纸条采用直接竞争法原理。【结果】该方法可同时检测恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星、氟甲喹、培氟沙星、氧氟沙星、依诺沙星、噁喹酸、麻保沙星、氟罗沙星、奥比沙星、达氟沙星和洛美沙星这13种喹诺酮类药物和庆大霉素,对其他喹诺酮类药物如：沙拉沙星、二氟沙星、司帕沙星、帕珠沙星等无交叉反应,同时对其他氨基糖苷类药物如：链霉素、新霉素、卡那霉素等也无交叉反应。该试纸条对牛奶中这13种喹诺酮类药物和庆大霉素的检测限均为20 ng·mL^-1,完全满足国家对这两类药物的残留限量要求。牛奶样本直接检测,无需处理,整个检测过程5 min内完成。【结论】采用该方法和HPLC-MS/MS对60份牛奶盲样进行比对试验,阳性样品全部检出,同时筛选方法未出现假阳性和假阴性现象,二者的测定结果基本相符,表明该方法准确可靠,适用于现场大批量样本的快速检测和筛选。实际操作过程中,可以采用胶体金免疫层析对样品进行现场快速初筛;筛选的疑似阳性样品,可以采用HPLC-MS/MS方法对样品中QNS和GEN的含量进一步确认。     

绿豆乳制备工艺的优化

对绿豆浸泡、脱腥及磨浆等工艺进行了研究。利用正交试验确定最佳浸泡工艺参数为:NaHCO30.25%,料水比1∶4,20℃浸泡10h。最佳磨浆工艺参数为:料水比1∶10,温度80℃。     

胶体金免疫层析技术在兽药残留检测中的应用及发展前景

胶体金免疫层析技术作为一种新型免疫学快速诊断和检测技术,不仅具有敏感、特异、便捷、快速等特点,而且适合基层和现场使用。目前,该技术已广泛应用于兽药残留方面。文章就胶体金免疫层析法的原理、兽药残留的危害及免疫胶体金技术在畜禽产品兽药残留检测中的应用及其存在的问题和发展前景作以阐述。     

包埋法制备替米考星淀粉微球工艺的优化

[目的]研究替米考星淀粉微球的制备工艺。[方法]以可溶性淀粉为原料,以N,N’-亚甲基双丙烯酰胺为交联剂,以过硫酸钾和亚硫酸氢钠为引发剂,采用包埋法制备替米考星淀粉微球。以载药量和包封率为指标,通过正交试验,采用综合平衡法对替米考星淀粉微球的制备工艺进行优化,在扫描电子显微镜下观察替米考星交联微球的形貌及表面形态。[结果]替米考星淀粉微球的最佳制备工艺如下:替米考星0.02 g,可溶性淀粉4 g,交联剂(N,N’-亚甲基双丙烯酰胺)0.95 g,乳化剂(m_(Span80):m_(Tween80)=2∶1)0.75 g,反应时间1.5 h,在优化工艺参数下制得的替米考星淀粉微球载药量为1.63%,包封率为81.4%;微球大小分布均匀,外观圆整,表面粗糙多孔。[结论]该制备工艺可行,扩大了替米考星的应用,为替米考星的剂型改进提供了参考。     

Box-Behnken法优化不同类型人参皂苷提取工艺

以人参皂苷提取率为响应值,考察乙醇体积分数、提取温度、提取时间对人参皂苷提取率的影响。在单因素试验基础上,通过Box-Behnken试验设计,对人参皂苷的提取工艺进行优化。结果表明:原人参二醇型皂苷最佳提取工艺为76%乙醇,提取温度85℃,提取时间5 h,提取率为0.93%;原人参三醇型皂苷最佳提取工艺为77%乙醇,提取温度71℃,提取时间5 h,提取率为0.56%;齐墩果烷型皂苷最佳提取工艺为79%乙醇,提取温度72℃,提取时间5 h,提取率为0.40%;人参总皂苷最佳提供工艺为77%乙醇,提取温度80℃,提取时间5 h,提取率为1.81%。提取温度对3种类型皂苷提取率具有显著影响。原人参三醇型皂苷和齐墩果烷型皂苷比原人参二醇型皂苷对温度更为敏感,但原人参三醇型和齐墩果烷型皂苷两者之间的差异不显著。