MALDI-TOF MS对河南地区鸡源沙门菌快速鉴定的研究

采集河南地区规模化种鸡场疑似沙门菌致死鸡胚和肝脏,共分离出41株沙门菌菌株;应用血清学、VITEK 2和基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)方法对分离的41株沙门菌进行鉴定比较;3种方法均能鉴定出沙门菌,MALDI-TOF-MS方法能快速鉴定41株沙门菌,而且匹配度分值均大于2.300,表明鉴定结果的可信度很高。血清学鉴定的41株沙门菌血清型与MALDI-TOF-MS鉴定的沙门菌结果不一致,表明血清学分型结果和MALDI-TOF-MS分型结果没有相关性。MALDI-TOF-MS对鸡沙门菌的鉴定,操作快速简便、准确率高,为兽医微生物快速鉴定提供一种方法。     

鸡粪便来源大肠杆菌的质谱法快速鉴定及聚类分析

为了比较PCR和基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)方法鉴定大肠杆菌的一致性,研究分别利用这两种方法对从浙江省12个不同地区养鸡场初步分离得到的大肠杆菌进行鉴定。结果显示:利用MALDI-TOF MS鉴定大肠杆菌的准确率为99.1%,PCR鉴定准确率为100%,但MALDI-TOF MS较PCR能够进行更快速的鉴定。利用MALDI-TOF MS对大肠杆菌分离株进行的聚类分析可以将分离株分为两种类型。研究表明,MALDI-TOF MS法能够快速、高效地完成对大肠杆菌的鉴定,并且能够进行聚类分析。     

MALDI-TOF MS对猪源肠球菌的快速检测

应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪(MALDI-TOF MS)和MALDI-Biotype 3软件对河南分离株肠球菌进行快速鉴定及同源性分析。使用甲酸提取法按照MALDI-TOF-MS要求进行样品制备,点靶并获取样品质谱图;运用Biotyper分析软件对所获取的质谱图进行鉴定和同源性分析。同时用Vitek-2全自动微生物鉴定系统进行辅助分析鉴定。结果显示,应用MALDI-TOF-MS方法鉴定的33株肠球菌中粪肠球菌13株,屎肠球菌20株,且可信度分值大于2.300,能完全鉴定到种的水平。PCA聚类分析显示,与屎肠球菌相比,粪肠球菌的亲缘关系更近一些。而Vitek-2对屎肠球菌的鉴定结果差异较大。结果表明,MALDI-TOF MS对肠球菌的快速鉴定和同源性分析,操作快速简便,准确率高,有利于兽医临床快速诊断,将成为兽医微生物常用诊断工具。     

基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术在病原微生物鉴定中的应用

<正>基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(Matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry, MALDI-TOF MS)技术最早由田中耕一于1987年提出[1-2],之后逐渐发展并应用于病原微生物的鉴定[3]。MALDI-TOF MS技术凭借其简单快速、高效准确等优点[4],已广泛应用于食品[5]、水产[6]、     

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱在动物源细菌耐药性监测中的研究应用

细菌鉴定是细菌耐药性监测过程中的重要工作环节之一,基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(Matrix-assisted laser desorption ionization time-off flight mass spectrometry, MALDI-TOF MS)能够高效鉴定细菌。为了快速监测五家养殖场来源的大肠杆菌和肠球菌的临床耐药特征,本研究利用MALDI-TOF MS和微量肉汤稀释法,快速鉴定临床分离的大肠杆菌和肠球菌,并对其进行耐药表型检测。结果显示,MALDI-TOF MS实现了对临床分离菌株(31株大肠杆菌和34株肠球菌)的快速鉴定;鸡源大肠杆菌和肠球菌的耐药情况最为严重,其次为羊和牛。其中,鸡源的大肠杆菌均对四环素(100%)和氨苄西林(91.67%)耐药率最高,肠球菌对苯唑西林(62.07%)耐药率较高。研究结果表明,不同动物源细菌临床耐药性表型严重程度有所不同,与此同时,MALDI-TOF MS技术可以同时实现对动物源大肠杆菌和肠球菌的快速鉴定,值得在动物源细菌耐药性检测领域推广应用。     

基于比较蛋白质组学研究新城疫病毒的入胞机制

为验证新城疫病毒(NDV)入胞过程存在胞吞途径,本研究以感染了NDV的鸡胚成纤维细胞(CEF)为研究对象,采用比较蛋白质组学研究方法,双向凝胶电泳(2-DE)结合基质辅助激光解析电离飞行时间质谱鉴定技术(MALDI-TOF-MS)分析3株NDV感染CEF后24 h和48 h两个时间点细胞蛋白表达动态.试验结果显示早期内体标志蛋白早期内体抗原1 (EEA1)表达水平变化显著,这表明NDV可通过胞吞途径进入细胞；与其它两株病毒相比,胞吞作用在JS-5-05-Go进入细胞的过程中,可以发挥更长时间的效应.     

江苏地区奶牛源葡萄球菌耐药性分析与红霉素诱导的克林霉素耐药检测

为指导江苏地区奶牛场奶牛乳房炎的临床用药,本研究对2015-2018年江苏地区部分奶牛场的牛奶样品进行细菌分离,使用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOFMS)方法和纸片法对分离菌株进行鉴定和药物敏感性分析,对分离得到的葡萄球菌进行了葡萄球菌D环实验,并且使用PCR技术检测了D环实验阳性菌株携带的耐药基因...     

台湾输入甲鱼中检出O1群霍乱弧菌

将甲鱼体表涂抹物在碱性蛋白胨水中进行增菌培养,分离单菌落后分别用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)、血清学方法及PCR进行鉴定,结果从台湾输入大陆的甲鱼中检出O1群稻叶型霍乱弧菌一株,不含ctx基因和toxR基因。为此,应加强水产品尤其是甲鱼的监测工作,防止霍乱弧菌在不同地区间的传播和流行。     

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱对羊源多杀性巴氏杆菌的快速鉴定

本试验通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)对临床分离的1株羊源多杀性巴氏杆菌进行了快速鉴定,取得了与VITEK2 Compact传统生化方法和16S rRNA测序方法一致的结果。MALDI-TOF MS对分离菌株的鉴定分数为2.371,达到了种水平的鉴定。从分离到纯菌落到获得有效的鉴定结果,MALDI-TOF MS仅需要约30 min,而VITEK2需要约4 h, 16S rRNA测序方法需要至少2 d。因此,MALDI-TOF MS可以实现对临床分离的多杀性巴氏杆菌菌株的快速、准确鉴定,对进一步改善动物巴氏杆菌病的临床诊治具有重要意义。     

MALDI-TOF MS技术在临床感染猪肠球菌检测中的应用研究

为评价基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术在肠球菌的鉴定及同源性分析中的应用,利用10株经16S rRNA确认的肠球菌建立了肠球菌指纹图谱数据库,建库后使用MALDI-TOF MS技术对河南省部分地区临床感染猪分离得到的33株肠球菌野生株进行鉴定并进行了同源性分析。结果表明:在33株肠球菌中,鉴定出粪肠球菌13株、屎肠球菌20株,且可信度分值大于2.300,鉴定符合率为100%。说明MALDI-TOF MS技术可对肠球菌进行快速鉴定和同源性分析,操作快速、简便,准确率高,有利于兽医临床上病原菌的快速诊断。     

雉鸡源多杀性巴氏杆菌的分离鉴定

为确定上海地区某雉鸡场雉鸡发病死亡的原因,对病鸡进行剖检和细菌分离,并应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(Matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)蛋白质谱和分子生物学方法(测定分...     

湖南省奶牛源金黄色葡萄球菌分离鉴定与耐药性分析

为了掌握湖南省内奶牛源金黄色葡萄球菌的耐药情况,指导临床合理用药,抽取牛乳样品,通过对细菌的分离培养和纯化,采用基质辅助激光电离飞行时间质谱仪和全自动生化鉴定仪进行鉴定,并对分离菌株进行18种抗菌药物耐药性检测,结合耐药表型和mecA基因检测判定MRSA菌株。结果显示,2020-2021年从湖南地区257份牛乳样品中分离出金黄色葡萄球菌39株,89.74%的临床分离菌株表现为不同程度耐药,其中对青霉素耐药最为严重,耐药率达82.05%;对红霉素、克林霉素、替米考星、庆大霉素、头孢西丁耐药率在20%～35%之间;对多西环素及万古霉素绝对敏感,耐药率为0。38.46%分离菌株表现为多重耐药,以7重耐药最多。鉴定出19株MRSA,其中包含15株OS-MRSA和4株OR-MRSA。本研究可为湖南省内奶牛企业制定合理用药措施提供依据。     

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱在乳品微生物中的应用进展

微生物污染贯穿乳品工业的各个环节,对经济发展和人类健康构成威胁。对微生物的有效控制是乳品质量与安全重点关注的问题,基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）在乳品安全监管工作中,具有快速、准确、稳定、灵敏以及成本低等特点,因而受到广泛的关注与应用。深入了解MALDI-TOF MS技术在乳品微生物中的应用途径与策略,可以有效提升乳品安全监管质量与效率。本综述旨在讨论 MALDI-TOF MS技术在乳品微生物中的实际应用,对MALDI-TOF MS技术在乳品微生物中的发展趋势和应用前景进行分析和探究,为应用MALDI-TOF MS技术深入研究乳品微生物相关问题提供了理论依据。     

MALDI-TOF质谱技术及Biotyper数据库在养殖场空气微生物鉴定中的应用

以16SrRNA测序法为标准方法,利用MALDI-TOF质谱技术及Biotyper数据库对某猪场210株空气分离株进行鉴定及准确率分析。结果显示91.0%的菌株被准确鉴定到种水平,95.7%被准确鉴定到属水平。研究表明MALDI-TOF质谱技术可以快速准确检测空气微生物,为养殖场环境质量监测提供了新的技术支持。     

最新脂肪球膜上蛋白质排列模型被提出

比利时科学家近日从牛乳中分离乳脂肪球膜，用特异性胰蛋白酶和非特异性链霉蛋白酶水解，以研究脂肪球膜上蛋白质的不对称排列结构。学者利用二维电泳和基质辅助激光解析电离飞行时间质谱法，鉴定脂肪球膜经胰蛋白酶酶解后的产物。     

含乳特殊医学用途配方食品中沙门氏菌检测即用型质控样品研制

为评估即用型沙门氏菌质控样品在基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术鉴定含乳特殊医学用途配方食品中沙门氏菌中的应用价值,通过验证即用型沙门氏菌质控样品的均匀性、稳定性,对－20 ℃贮藏0、14、28 d沙门氏菌质控样品进行质谱鉴定,最后用VITEK全自动微生物分析系统进行生化鉴定。结果表明：即用型沙门氏菌质控样品稳定性良好、均匀性符合要求,所得质谱图相近,VITEK生化鉴定结果为沙门氏菌;即用型沙门氏菌质控菌株可以作为含乳特殊医学用途配方食品中沙门氏菌检测质控样品使用。     

家蚕幼虫消化液蛋白质组学分析

为了研究家蚕幼虫消化液的蛋白质组成情况,用双向电泳(2-DE)技术对家蚕幼虫消化液中的蛋白质进行了分离,随后用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALD I-TOF MS)对其中的8个高丰度蛋白进行了鉴定,并用生物信息学方法进行了分析。结果显示:家蚕幼虫消化液中的蛋白质种类较少,分子量小,分布集中;在8个鉴定的蛋白点中,1个是30kP蛋白酶A原,5个是类胰蛋白酶,其它2个是碱性丝氨酸蛋白酶。     

规模化牧场154株奶牛乳腺炎源大肠杆菌的耐药性分析

为了解规模化牧场中奶牛乳腺炎源大肠杆菌的耐药性，试验采集安徽、福建、广东、江苏及内蒙古等省(自治区)的11个规模化牧场的临床型乳腺炎奶牛的乳样进行细菌分离纯化，采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)方法对分离株进行鉴定，采用K-B纸片扩散法检测大肠杆菌对11种常用抗生素的耐药性。对乳腺炎源大肠杆菌多重耐药性及不同地区大肠杆菌的耐药性进行分析。结果表明：共分离到154株大肠杆菌，分离率为22.95%,其中安徽60株，广东42株，福建22株，江苏16株，内蒙古10株，其他地区4株。154株大肠杆菌对青霉素、阿莫西林、链霉素、氨苄西林耐药性较强，耐药率分别为98.05%、61.69%、42.21%、40.91%;对庆大霉素、环丙沙星、氟苯尼考和阿米卡星相对敏感，敏感率分别为90.26%、73.38%、68.83%和61.04%;经多重耐药性分析，90株(占58.44%)大肠杆菌对3种及以上抗生素耐药，其中30株大肠杆菌对6种抗生素耐药；多重耐药菌株中，耐药谱为氨苄西林(AMP)-青霉素(PEN)-阿莫西林(AMX)-头孢氨苄(LEX)-四环素(STR)-链霉素(TC...     

蛋氨酸对奶牛乳腺上皮细胞亚细胞蛋白质组的影响研究

为寻找奶牛乳腺上皮细胞亚细胞结构中与泌乳相关的重要蛋白质、从蛋白质水平揭示乳蛋白合成的调控机制,应用双向凝胶电泳技术分离体外培养的蛋氨酸处理组与正常组奶牛乳腺上皮细胞蛋白质,利用Image Maser 2D软件对图谱进行对比分析,基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)和数据库检索鉴定,并采用实时荧光定量PCR技术在mRNA水平上验证2-DE结果。质谱鉴定出8个表达上调的差异蛋白质,大多数差异蛋白质的功能涉及细胞骨架构成、能量代谢等过程。这些差异点的发现为研究奶牛泌乳机理提供了有益的线索。     

基质辅助激光解析电离飞行时间质谱在动物病原菌检测中的应用

应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）技术,对厦门口岸进口的1000多份动物及其产品的样品进行致病菌的检测和鉴定,共检出20多种致病菌,并对这些菌株同时用传统生化鉴定方法进行确认。结果表明MALDI-TOF-MS对未知细菌进行鉴定,较传统方法更加快速、准确,而且可以进行高通量检测,可以广泛应用于口岸动物检疫以及微生物检验实验室的日常检验。此外,将国内分离鉴定的各种参考菌株建立的常见致病菌MALDI-TOF-MS数据库与布鲁克公司的MALDI Biotyper数据库进行病原菌鉴定的比较,结果表明,实验室自建的MALDI-TOF-MS数据库可以取得更加准确地结果。