云南三七根腐病病原细菌的鉴定

[目的]明确云南三七根腐病致病细菌的种属,为三七根腐病的综合防治提供科学依据.[方法]从云南省不同三七种植区采集三七根腐病植株,采用组织分离法进行病原细菌分离,通过柯赫氏法则验证病原菌的致病性,利用形态学、生理生化与基因序列分析相结合的方法明确病原细菌的分类学地位.[结果]采用组织分离法从发生三七根腐病的块根中共分离到200多株细菌,经室内组培离体筛选得到10株细菌能引起三七块根腐烂,其中1株细菌MA9对健康三七切伤组织的致病力最强,选取该株细菌进行后续研究.健康三七块根离体接种MA9菌液9 d后出现菌脓,块根开始腐烂变黑、变软,并伴随有恶臭味.将MA9菌株摇瓶发酵制备成OD600约0.5的菌悬液灌根接种到温室和田间健康三七植株上,均表现出与田间病株一致的症状:最初在芦头与芽基结合处出现褐色水渍状病变,随着病变不断扩展最终导致三七地下块根顶芽腐烂和地上部植株死亡.在田间接种后发病的三七块根重新分离到该病原细菌.利用Biolog微生物鉴定系统和16S rDNA序列比对结果均显示MA9菌株与产吲哚金黄杆菌(Chryseobacterium indolo-qenes)为同一种属.[结论]引起云南三七根腐病的致病细菌为产吲哚金黄杆菌.这是国内首次报道该菌能引起三七根腐病.     

当归根腐病的病原初步研究

 从当归根腐病植株根部分离到丝核菌(Rhizoctonia sp.)、南方根结线虫（Meloidgyne incognita）和丁香假单胞杆菌(Pseudomonas syringae )。为明确这些分离物在当归根腐病病害系统中的作用,分别进行了单一接种、两两混合接种及先后接种的方式来鉴定其致病性。结果表明,无论是采用何种接种方式,包含有丝核菌的接种体均没有导致当归湿腐症状;南方根结线虫和丁香假单胞杆菌同时混合接种发病率为48%,先接种南方根结线虫,后接丁香假单胞杆菌致病性最强,发病率为81%;而且,包含线虫接种体的混合接种与不含线虫接种体的接种,其致病性有明显差异,说明南方根结线虫在当归根腐病病害系统中是关键因子。     

松材线虫携带的一株细菌分离及其致病性

从患松材线虫病致死的黑松和马尾松病树组织及松褐天牛虫体中分离的松材线虫虫体上均分离到同一细菌菌株 .经致病性、革兰氏染色、菌体形态、培养性状和生理生化反应等测定 ,将致病菌株鉴定为洋葱伯克霍尔德氏菌 .ATBExpression自动鉴定仪的鉴定结果与上述结果相同 .在分离过程中该菌出现频率较高 ,说明是松材线虫携带的主要细菌 .人工接种试验结果显示 ,用无菌线虫或洋葱伯克霍尔德氏菌菌株分别接种的黑松无菌苗不发病 ,而用二者混合接种则使无菌苗迅速发生褐变和萎蔫 .林间利用 6年生黑松进行的接种试验结果证明 ,用无菌松材线虫和洋葱伯克霍尔德氏菌菌株混合接种的黑松与使用野生松材线虫接种的黑松都 10 0 %的患病 .单独用无菌松材线虫接种有 4株发病 ,6株没有发病 .其中发病黑松中不仅分离到了松材线虫 ,也分离到了细菌 ,而没有患病的 6株黑松中仅分离到少量松材线虫 .这说明在野外条件下接种的松材线虫可以通过某种途径重新获得细菌 ,导致了接种的黑松患病 .而接种后无菌松材线虫没能获得细菌的那些黑松就没有患病 ,说明单独无菌松材线虫不能使黑松患病 .这些结果说明松材线虫携带的细菌与松材线虫的致病性有关 .因此 ,可以把松材线虫病看作是线虫和细菌共同侵染引起的一种植物复合侵染病害 .在这     

河南烟草根际短体线虫鉴定及其致病性分析

【目的】明确从河南省南阳市烟草根际采集到的一种短体线虫的种类及其对烟草的致病性,为烟草根腐线虫病害的识别与有效防治提供理论依据。【方法】采用形态学与分子生物学相结合的方法,对分离自河南省南阳市烟草根际的一种短体线虫进行鉴定,并采用温室盆栽接种的方法测定其对烟草的致病性。【结果】形态学分析发现,待鉴定短体线虫与咖啡短体线虫（Pratylenchus coffeae）的形态特征较为一致。rDNA-ITS和rDNA 28S D2~D3序列分析发现,该线虫种群与NCBI数据库中的咖啡短体线虫序列具有高度相似性。基于rDNA-ITS和rDNA 28S D2~D3序列构建的贝叶斯进化树显示,该短体线虫与其他咖啡短体线虫位于同一高度支持的分支。因此,将从河南省南阳市烟草根际采集到的短体线虫鉴定为咖啡短体线虫。接种咖啡短体线虫75 d后的烟株生长缓慢,植株矮小,叶片黄化萎蔫,根部出现褐色病斑甚至坏死腐烂,咖啡短体线虫在烟草根际的繁殖率达到5.81。【结论】河南省南阳市烟草根腐线虫病病原为咖啡短体线虫,其对烟草具有较强的致病性。     

潜根线虫侵染对水稻早衰的影响

接种试验表明,水稻潜根线虫(Hirschmanniella oryzae)侵染的稻株,由于生长后期根系腐烂和衰败导致植株早衰.水稻品种间对线虫侵染存在抗性和耐病性差异,耐病水稻品种在较高侵染虫量条件下根生长量和稻谷产量损失较小.潜根线虫侵染能诱发稻株体内的过氧化物酶(POD)、酪氨酸解氨酶(TAL)、多酚氧化酶(PPO...     

甘薯茎线虫与镰孢菌对甘薯的复合侵染

从甘薯茎线虫病的薯块中分离到茄病镰孢(Fusarium solani)和尖孢镰孢(F.oxysporum)2种真菌.通过苗期和薯块接种证实,尖孢镰孢与腐烂茎线虫(Ditylenchus destructor)能共同侵染甘薯引起复合侵染病害.     

山西长治玉米根腐线虫病病原鉴定及致病性测定

【目的】明确从山西长治玉米根际分离到的一种根腐线虫病的病原种类及其对玉米的致病性,为玉米根腐线虫病害的识别和有效防治提供科学依据。【方法】采用贝曼漏斗法对采集的样品进行分离,采用形态学与分子生物学相结合的方法对分离的根腐线虫进行种类鉴定,并采用室内盆栽接种的方法测定其对玉米的致病性。【结果】形态学分析发现,待鉴定的短体线虫与斯克里布纳短体线虫（Pratylenchus scribneri）的形态特征较为一致;rDNA-ITS、rDNA 28S D2~D3区和mtDNA-COI区序列分析发现,该短体线虫种群与NCBI数据库中斯克里布纳短体线虫的序列具有高度相似性;基于rDNA-ITS、rDNA 28S D2~D3区和mtDNA-COI序列构建的系统进化树显示,该短体线虫种群与其他斯克里布纳短体线虫种群位于同一高度支持的分支,据此将山西长治玉米根际分离到的短体线虫鉴定为斯克里布纳短体线虫。与对照组玉米植株相比,接种供试斯克里布纳短体线虫60 d后,玉米表现出植株矮小,生长缓慢,地上部鲜质量和根鲜质量显著减轻,根部出现明显的褐色病斑甚至坏死腐烂的发病症状,斯克里布纳短体线虫在玉米根际的繁殖系数（R_f）达到19.44。【结论】山西长治玉米根腐线虫病的病原种类为斯克里布纳短体线虫,其对玉米具有较强的致病性。     

榆中县黄瓜根结线虫鉴定及根系定殖效果测定

为了明确甘肃榆中县温室大棚黄瓜根结线虫种类及根际定殖情况,采用形态和分子生物学鉴定其种类,并室内测定和显微观察其在根际定殖效果。结果表明,甘肃榆中县黄瓜根结线虫不同虫态形态、大小和雌虫会阴花纹特征等均具有典型南方根结线虫(Meloidogyne incognita)形态特征。基于线粒体COI基因序列比对和构建系统发育树,鉴定发现榆中县黄瓜根结线虫线粒体COI基因序列与已报道的南方根结线虫台湾株系(KU517167)聚为一类,其相似性为99.75%;根结线虫多序列特异位点鉴定发现其与南方根结线虫孟加拉国株系(MN196556)和南方根结线虫印度株系(MN728697)聚为一类,相似性分别为100%和96.91%。经致病性测定发现,待接种根结线虫2龄幼虫30 d后其能够侵染黄瓜根系并形成大量根结,经染色发现黄瓜幼苗根系组织内寄生大量线形蠕虫、雌虫和卵囊,且镜检观察发现其形态与田间采集后分离的线虫形态一致。综上可知,引起甘肃省榆中县黄瓜根结线虫病的病原为南方根结线虫。     

福建猕猴桃根结线虫病病原鉴定

对从福建省建宁县中华猕猴桃(Actinidia chinensis)根部采集的30个根结线虫群体进行鉴定,结果表明侵染猕猴桃的线虫群体是由爪哇根结线虫(Meloidogyne javanica)和南方根结线虫(M.incognita)组成的混合种群,爪哇根线虫为优势种。     

进出口检疫发现的茎线虫及其致病性的研究

检疫进口荷兰郁金香和我国山东牡丹出口时发现的茎线虫,经形态鉴定,分别为鳞球茎茎线虫和腐烂茎线虫。用截获的两种茎线虫对6种不同的寄主植物进行致病性测定表明,截获进口的鳞球茎茎线虫能使郁金香、水仙和风信子发病,但不能侵染洋葱、马铃薯和甘薯,初步诊断该线虫为郁金香小种;截获出口的腐烂茎线虫能使郁金香、甘薯和洋葱发病,但不侵染水仙、风信子和马铃薯。通过两种茎线虫的检疫和鉴定,提出了对茎线虫应实施的植物检疫对策。     

“紫三七”生态适应和药效优越性的评价*

 评价了“紫三七”在生态适应和药效方面比普通“绿三七”所具备的优越性,并分析其原因。“紫三七”根状茎和绒根的紫色素属于花色苷类,花色苷在三七根状茎和绒根中的积累导致“紫三七”的形成。“文山三七”根状茎和绒根的紫色应是文山州特殊自然条件诱导三七产生的、利于三七生存的进化性状。花色苷的积累并不动摇或否定皂苷是三七最重要活性成分的地位;花色苷本身具备多种药理活性、对皂苷药理活性存在增效和补充作用及花色苷的形成、积累能提高三七总皂苷含量决定了“紫三七”的药效比普通“绿三七”的优越。本文可为三七育种中的早期定向选择提供重要依据,并更新人们关于三七活性成分和药效的传统观念,也将为三七的产品开发开辟一个新领域。     

连作地土壤处理对三七根腐病的控制效果

探索三七连作地根腐病控制技术。应用现有农药按一定比例组配,对连作土壤和三七种苗进行盆栽和田间试验。复配剂Ⅱ型盆栽处理、田间试验和大田示范对三七苗期根腐病的控制效果分别达到80.68%、80.42%和62.28%。复配剂Ⅱ型处理连作土壤对三七苗期根腐病有明显的控制效果。     

三七根结线虫病病原研究

 报道三七的1种新病害:三七根结线虫病(Panax notogiseng Root-knot Nematode Disease,PRND).病害的典型症状:感染根结线虫的三七植株地上部发黄、矮化,重病株枯死;根系长了大量根结,根结上长有一些短须根.标本采自云南省晋宁县昆阳农场.用形态学,鉴别寄主试验、酯酶和苹果酸脱氢酶电泳等方法鉴定病原线虫为北方根结线虫(Meloidogyne hapla Chitwood,1949).三七根结线虫病和北方根结线虫危害三七在云南省发现属首次报道.     

三七种植土壤微生物类群动态与根腐病的关系

通过对三七免耕种植定位研究,找出了三七根腐病高发期与土壤微生物类群变化特征的差异,鉴定出了主要病原微生物类群。结果表明：三七根腐病的发生,除已报道的细菌中的假单胞细菌有关外,还与霉菌、放线菌及厌氧生长菌有密切关联,这3类菌群在不同季节存活量的高峰期与三七病害高发期相吻合,并且根腐病株土壤中的霉菌、放线菌及厌氧菌数高于健康植株土壤,分别增加3．89E4．cfu／g,0.94E4,cfu／g,85.10E6.cfu／g,说明这3种细菌也是导致三七根腐病的主要病原菌。     

三七连作障碍的研究进展

三七是云南独具特色的生物资源,它的根是著名、传统的重要中药材,云南文山是中国三七的道地产区,也是主要种植区。目前,三七种植在文山地区经济发展中占有重要地位。但三七生产上存在着严重的连作障碍问题,极大地限制了云南三七产业的发展。本文综述了三七连作障碍产生的机制和控制的方法,并从病原微生物和土传病害增加、土壤盐分累积和酸化、养分失衡和植物自毒效应等方面综合分析了三七连作障碍的成因,在此基础上探讨了三七连作障碍的防治途径。     

文山三七中As分配规律及其对皂苷和黄酮含量的影响

[目的]探讨文山三七中As分配规律及其对皂苷和黄酮含量的影响.[方法]通过野外大田调查和室内分析相结合的方法研究云南文山三七主要种植区不同年份三七（二年生和三年生）不同部位（主根、须根、剪口）As分配规律,探讨As元素对三七主要药效成分黄酮和皂苷含量的影响.[结果]砷含量在三七各部位分布依次为：须根＞剪口＞主根.三七须根中As含量最高,为0.31 ～ 0.33mg/kg.3年生三七须根和主根的砷含量较2年生高.三七中黄酮含量为3.45 ～ 11.10 mg/g,2年生三七黄酮含量大于3年生三七.三七须根中黄酮含量与须根中As含量呈显著的负相关关系.总皂苷和单体皂苷含量在剪口和主根中较高,三七总皂苷含量为4.08％ ～13.51％,人参皂苷占总皂苷的90.53％～97.79％.3年生三七的总皂苷和单体皂苷含量大于2年生三七.须根中三七皂苷R1含量与须根中As含量呈显著的正相关关系;剪口中总皂苷含量、Rg1含量和Rb1含量均与剪口中As含量呈显著的负相关关系.[结论]因此,三七As含量对药效成分的影响与不同部位和不同皂苷类型有关,As能导致须根中皂苷含量的累积,须根中黄酮和剪口中皂苷含量的下降.     

三七根腐病复合侵染中病原细菌的研究

 报道三七根腐病复合侵染中病原细菌的研究结果。病菌从根部侵入,引起根腐,叶片褪绿变黄或青枯,病菌随病残体、土壤和种苗传播。病菌在金氏B培养基上菌落圆形,灰白色,略凸起,边缘整齐,半透明,湿润光滑,不产生荧光色素,菌体杆状,直或稍弯,革兰氏染色阴性,具1～6根极生鞭毛。积聚β羟基丁酸盐颗粒,氧化酶、精氨酸双水解酶呈阳性,烟草过敏反应,马铃薯软腐阴性,人工接种发病症状与田间症状相似,发病率达90%以上。经鉴定,该菌为假单孢杆菌(Pseudomonas sp.)。     

文山三七根腐病病原真菌的鉴定与药剂防治

从云南文山三七药材基地感染根腐病的三七组织获得分离物,并对其进行培养和纯化,并运用科赫法则（Koch’s Postulate）进行病原菌回接感染,得3株致病明显的菌株,后对此菌株进行生物学和18S-rDNA全序列分析鉴定及室内药效防治。结果表明,此3株菌分别是尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）,茄病镰刀菌（Fusarium solani）和链格孢菌（Alternaria alternata）。甲基硫菌灵、根康、多菌灵对茄孢镰孢菌、尖镰孢菌的抑菌效果最好,腐霉利、甲基硫菌灵对链格孢菌的抑菌效果最好。该研究可为尖孢镰刀菌、茄病镰刀菌和链格孢菌引起的三七根腐病的防治提供参考。     

三七病害研究进展

综述了国内关于三七根腐病、黑斑病、圆斑病等病害病原菌及其生物学特性、病害发生规律、影响病害发生的环境因子、化学和生物防治方法等方面的研究进展。结合当前三七生产中存在的问题,提出加强对三七抗病性及抗病机制研究,培育和推广抗病品种;从生态平衡的角度将传统农业与生物防治相结合,兼顾病害的地区差异性,因地制宜地制订三七病害的农业生产防治、化学防治、生物防治等综合防治措施,以实现经济、社会、环境综合效益的协调发展。     

一种能用于三七品种及病害防卫反应分析的单克隆抗体（英文）

 在云南、广西大面积的三七栽培过程中三七常因镰刀菌侵染造成三七根腐病。2001年在分析比较健康及感染三七根腐病三七根的蛋白质图谱的基础上,为进一步研究三七抗根腐病品种的分子标记,本实验用健康及感染三七根腐病三七根样品的全蛋白质提取液进行了蛋白免疫印迹分析。单克隆抗体（Mab7）是由一种小鼠杂交细胞系(#490; ATTC HB-12029)针对Cronartium ribicola担孢子蛋白产生的抗体。它被鉴定为一种免疫蛋白I,能疹断不同地理范围内疱锈菌样品中70道尔顿热休克蛋白抗原(Cro r Ⅱ)。它被用于针叶树病原系统蛋白组学研究。本实验用单克隆抗体（Mab7）用分析了三七健康（主根、须根）及感病组织的蛋白免疫印迹。并用PDI quantity one 软件包详细分析了其蛋白印迹。Mab7在健康组织中在分子质量13.2～52.3 u之间显示出9条不同的免疫印迹谱带,其中分子质量25.5及26.4 u位置处出现两条比较强的谱带,在须根组织中只有在14.4道尔顿位置处出现一条谱带。在而在感病组织中显示更少的谱带,而且带型截然不同。用单克隆抗体（Mab7）监测组织中带型的变化有助于育种中抗病性的研究。进一步研究带型的变化与病害严重度之间的关系正在进行中。结果表明单克隆抗体Mab7作为免疫疹断工具可用于三七品种及病害防卫反应分析。