细胞分裂素对蝴蝶兰胚性愈伤组织诱导的影响

分别以6-Benzylaminopurine(6-BA)和2,4-Dichloro phenoxyacetic acid(2,4-D)诱导蝴蝶兰外植体.6-BA从嫩茎切块诱导出胚性愈伤组织,细胞富含淀粉粒,而2,4-D得到的愈伤组织不能分化.6-BA易于从嫩叶切片诱导胚性愈伤组织,进行体细胞胚发生过程的显微观察和代谢分析.6-BA诱导期间,DNA含量上升伴随胚性愈伤组织生长,水溶性蛋白变化稍延缓于RNA含量变化.培养第11天新出现12.13,13.08,66.30,97.25,104.31 ku蛋白质,可能与胚性细胞出现有关,第25天新出现40.87 ku蛋白质,与体细胞胚形成有关.     

从大豆幼胚诱导胚胎发生再生植株

采用MS基本培养基附加高浓度的生长素(2,4—D或NAA)成功地诱导了大豆(G.max)未成熟胚的体细胞胚胎发生。2,4—D的诱导效果明显优于NAA。细胞分裂素对体细胞胚胎发生有抑制作用。适宜的维生素B1浓度为0.4ppm。体细胞胚胎发生频率随蔗糖浓度(1.5—9％)的提高而降低。体细胞胚胎经历诱导、成熟和发芽三个阶段成功地发育成完整植株。再生植株移入土壤已经获得种子。     

玉米愈伤组织再生体系的研究

用玉米胚性愈伤组织作为转化受体时,不同基因型在相同2,4-D浓度的培养基上诱导,其诱导率有较大差别,齐319最高;胚龄对诱导率的影响也较大,10d左右最易诱导,过大或过小均不易诱导胚性愈伤;培养基中2,4-D的浓度对玉米愈伤组织的诱导率有极大影响,不同基因型的最大胚性愈伤组织诱导率所需的2,4-D浓度也不相同,一般为0.5～1.0mg/L。愈伤组织分化时不同基因型所需最适6-BA浓度不同,齐319、515的愈伤组织最适合分化成苗的6-BA浓度为1mg/L,鲁原341愈伤组织最适6-BA浓度为0.5mg/L。     

龙眼单细胞培养及其体胚发生再生植株

以龙眼松散型胚性愈伤组织(CⅢ类型)为起始材料。进行了单细胞培养及其体细胞胚胎发生再生植株的研究。结果表明：由CⅢ类型胚性愈伤组织建立起的分散性良好的悬浮细胞系，经过孔径(φ)为40μm的尼龙网过筛。可以获得单细胞悬浮系：采用液体浅层培养。部分单细胞可持续分裂，并且有规则分裂和不规则分裂2种方式。前者可能直接形成体细胞胚胎，后者则先形成多细胞团再形成体胚；在液体浅层培养中．单细胞可不经转移直接形成子叶形体细胞胚胎：这些体细胞胚胎经过成熟培养后，可萌芽生根再生完整植株。     

文心兰类原球茎的诱导与增殖技术的优化

以文心兰试管苗叶片为材料,在(25±1)℃,光照强度24～30μmol/m2.s,光照时间10 h/d下研究类原球茎的诱导和增殖技术。结果表明:①蔗糖适于作为类原球茎诱导的碳源,类原球茎诱导率52%,单位叶片类原球茎2.725个;②附加3～5 mg/L的Ad处理有利于类原球茎诱导(诱导率57%,单位叶片类原球茎数量3.725～4个);③6-BA是影响文心兰类原球茎增殖的主导因子,中等浓度的6-BA(3.0 mg/L)有利于类原球茎的增殖,增殖率(15.29)极显著高于其它水平;④培养基1/2MS+6-BA 3.0 mg/L+2,4-D 1.0 mg/L+NAA 0.4 mg/L+蔗糖20 g/L最有利于文心兰类原球茎的增殖,增殖率最高(15.95),极显著高于其它处理组合。     

激素对木薯体细胞胚胎发生与植株再生的影响

采用3种激素,通过不同浓度对华南8号木薯品种体细胞胚胎发生和植株再生的试验,获得适宜诱导胚性愈伤组织的培养基配方(MS+0.5mg/LCuSO4+4mg/L2,4-D或12mg/L Picloram)和体细胞胚成熟培养基配方(MS+0.5mg/LCuSO4+0.5mg/LBA)各一个。采用这些培养基配方应用于3个国内推广品种,一个海南当地品种以及两个模式种,诱导体细胞胚胎发生和植株再生效果显著。     

巴西橡胶树的次生体细胞胚胎发生—— 一种新的长期性体细胞胚胎发生诱导方法

在橡胶树中，以未成熟种子的内珠被为外植体通过其胚性愈伤组织的继代增殖可以持续不断地诱导体细胞胚胎，该方法称为持久体细胞胚胎发生(Maintained Somatic Embryogenesis，MSE)。然而，直接利用内珠被组织诱导易碎型胚性愈伤组织系不但频率很低，而且迄今仅无性系PB260和RRIM703能够藉此途径实现体细胞胚胎的长期诱导。本研究以体细胞胚胎为外植体成功诱导和建立可增殖胚性愈伤组织系。组织学分析显示，体胚外植体切口边缘表皮及周维管细胞脱分化导致易碎型胚性愈伤组织的产生。所获愈伤组织经继代增殖和筛选最终得以建立胚性愈伤组织系。该新方法被称为间接次生体细胞胚胎发生(Indirect Secondary Somatic Embryogenesis，SSE)。我们还就体胚及内珠被2种外植体诱导胚性愈伤系的潜力进行了深入比较。结果表明，采用体胚外植体诱导胚性愈伤组织系其频率明显高于内珠被外植体。除了PB260和RRIM703之外，我们通过SSE途径还成功建立了无性系PB217的胚性愈伤组织系，而该无性系之前一直难以用MSE法获得其胚性愈伤系。此外，采用SSE法建立胚性愈伤系所需继代培养的次数也大为减少。对于不少仅实现初生体细胞胚胎发生的无性系而言，该方法无疑为其长期性体胚发生的诱导开辟了一条新的途径。     

春石斛离体培养条件优化及其试管开花研究

以春石斛类原球茎体及其试管苗为试验材料,采用L9(34)正交试验设计,比较不同激素浓度和不同浓度天然附加物对春石斛原球茎增殖和壮苗生根的影响,同时进行离体培养条件的优化,并在此基础上进行试管开花研究.结果表明:(1)最适宜春石斛原球茎增值的培养基为KC+1.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L IBA+100 mL/L椰汁;(2)最适宜春石斛试管苗壮苗生根的培养基为1/2MS+1.0 mg/L IBA+1.0 mg/L NAA+100 g/L马铃薯匀浆物;(3)在4种不同花色的春石斛中,玫瑰红花色的春石斛试管苗花芽诱导率最高,为38.67％;(4)磷含量增加至原来5倍时,春石斛试管苗花芽诱导率最高,为32.14％.     

适于体细胞胚发生的大豆基因型筛选

以41个北方春大豆品种为材料,研究了不同基因型大豆体细胞胚的诱导率。结果表明:不同基因型大豆的体细胞胚发生率有显著差异,在供试品种中,垦丰23的体细胞胚胎发生率(99.7%)最高,合丰55等9个基因型体细胞胚诱导率为70%～90%;登科4等5个基因型无体细胞胚发生。垦丰23体细胞胚呈葡萄状、颜色鲜绿、每个未成熟子叶上体细胞胚的数量较多、无畸形胚、且每个体细胞胚是独立存在的,其他诱导率较高的基因型每个未成熟子叶分化体细胞胚的数目较少,且部分基因型含有畸形胚。     

铁皮石斛的组织培养与快速繁殖

以铁皮石斛(Dendrobium candidum Wallichex Lindley)无菌苗分成的茎段、带顶芽的茎段和根蔸3类外植体在MS＋6-BA0.5mg/L＋NAA0.2mg/L上均能诱导出丛芽,只有根蔸能诱导原球茎,且诱导丛芽倍数高于其它两类;在此培养基上原球茎的增殖系数高于其它组合的培养基;温度对原球茎继代增殖有明显影响,(25±1)益最适合原球茎的生长繁殖;温度对生根的影响较为明显,较低的温度(23℃)有利于减少分生苗的数量,形成健壮高大的试管苗,适量的香蕉能促进形成粗壮的根和苗。     

“二加二”法建立金线莲类原球茎培养新体系

本研究以金线莲组培苗茎段为试材,采用“二加二”法,即“两步诱导”（1. 利用暗培养诱导出白化茎段;2. 由白化茎段诱导类原球茎）加“两步增殖”（1. 新诱导的类原球茎在诱导培养基上培养3周;2. 利用L₁₆(4 ⁵)正交试验优选增殖培养方案）的方法,研究外植体来源、外植体处理方式、暗培养时间、培养基及附加成分对类原球茎诱导的影响,以及培养时间、光照强度、紫外光照射时间对类原球茎增殖的影响,并比较“二加二”法与传统单步法的培养效果。结果表明,适宜白化茎段诱导类原球茎的培养基为MS + 2.5 mg/L 6-BA +0.2 mg/L NAA +1.0 mg/L S3307。黑暗腋生白化茎段是最佳外植体,最佳处理方式为整个茎段平放,3周暗培养得到的白化茎段能够显著提高类原球茎的诱导率。增殖培养5个因素对结果的影响顺序为：NH₄ ⁺/NO₃ ^->NAA浓度>6-BA浓度>S3307浓度>蔗糖浓度。最佳配比为MS+0.5 mg/L S3307+4.0 mg/L 6-BA+0.4 mg/L NAA+ NH₄ ⁺/NO₃ ^-（15 mmol∶45 mmol）+ 蔗糖40 g/L,可获得增殖鲜重为246.90 g/L。增殖培养最佳时间6周。光照强度500 lx和253.7 nm紫外光每天照射6 h连续6周适宜类原球茎的增殖和总黄酮的积累。利用“二加二”法建立了金线莲类原球茎高效培养新体系,该体系诱导率、初始材料扩大倍数、增殖倍数均高于传统单步诱导法。92%的类原球茎能够稳定增殖,不发生分化和愈伤组织化。     

灌浆后期6-BA灌根对玉米衰老和产量形成的影响

以郑单958为材料,用浓度为10 mg/L的6-苄基腺嘌呤(6-BA)溶液在玉米灌浆期(花后40 d)浇灌根系,研究6-BA对玉米根系与叶片衰老及产量形成的影响。结果表明,花后6-BA灌根处理能延缓玉米根系的衰老,使收获期单株总根长显著高于对照,增长48%,其中,轴根长与对照相比差异不显著,侧根长显著高于对照。6-BA灌根处理同样延缓叶片衰老,使成熟期绿叶面积增加。6-BA灌根处理显著增加吐丝期-成熟期植株吸氮量和植株干物质积累量,不影响营养器官中氮素与干物质的转运。6-BA灌根处理显著提高单株子粒产量,与对照相比增产16%,其中,主要是百粒重的增加,同时保持子粒中氮浓度不变。通过细胞分裂素延缓后期根系衰老,可能是协调玉米后期氮素吸收与转运、提高玉米子粒产量的一条途径。     

花生子叶遗传转化再生体系影响因素的研究

本试验选用子叶为外植体研究了影响植株再生和遗传转化的因素。结果表明,细胞分裂素(6-BA)5.00 mg/L (2,4-D)1.50 mg/L的诱导培养基子叶外植体丛生芽诱导率最高,分别达89.67%和83.33%。遗传转化影响因素结果表明,菌液OD600为0.5-0.7、侵染时间10min、共培养时间3d、每50mL菌液添加烟草提取物1.0mL可获得较好的转化效果。抗生素对芽分化率影响的研究结果表明,当头孢唑林钠(Cef)250 mg/L 羧苄青霉素(Carb)250-500 mg/L时效果最好,不但可以完全抑制农杆菌生长,而且有较高的芽诱导率。     

荔枝"妃子笑"品种花药培养及其体胚发生

以荔枝(LitchichinesisSonn.)品种“妃子笑”为试材,研究其花药离体培养及植株再生的影响因素。结果表明,荔枝花药在MS 2,4-D2mg/L NAA0.2mg/L以及含50g/L蔗糖的培养基上诱导胚性愈伤组织效果较好,把胚性愈伤组织转移到MS BA1mg/L NAA0.5mg/L,谷氨酰胺500mg/L,蔗糖50g/L分化培养基上培养1个月后,体胚大量萌发,再将成熟体胚转移到附加500mg/L谷氨酰胺的MS无激素培养基上,培养1￣2个月后,能再生成完整植株。     

猪笼草的组织培养

以猪笼草（Nepenthes mirabilis）腋芽为试材,研究猪笼草的组培快繁。结果表明,外殖体的建立以1/2MS+6-BA 1mg/L+NAA 0.05mg/L液体培养基春季（3～6月）进行培养最佳。愈伤组织（或不定芽）增殖以 MS+6-BA 1mg/L+Ad 10mg/L+NAA 0.1mg/L+100mL/L椰子汁较佳,高浓度（200mL/L）的椰子汁不利于愈伤组织（或不定芽）增殖;继代芽的增殖以MS+6-BA 1.5mg/L+Ad 1～5mg/L+NAA 0.1mg/L+100～200mL/L椰子汁较好:生根培养用1/2MS+6-BA0.1mg/L+NAA1.0mg/L,20d后可长出2～4条根。      

尾叶桉U6遗传转化再生体系的建立

以桉树品种尾叶桉U6叶盘为外植体,选用MS培养基为基本培养基,附加激素6-BA,IAA,IBA,NAAA,通过研究不同激素浓度组合对外植体愈伤诱导及不定芽分化的影响,建立了较好的遗传转化再生体系.结果表明,尾叶桉U6叶盘最适分化培养基为MS 6-BA 2.0 mg/L 2,4-D 1 mg/L IAA 0.2 mg/L 蔗糖30 g/L 琼脂粉5 g/L;小苗的最佳生根培养基为MS NAA 0.2 mg/L mA 0.5 m/L 蔗糖30 g/L 琼脂粉5 g,L.40mg/L卡那霉素可以抑制叶盘的分化;20 mg/L卡那霉素可以抑制再生植株的生根.2种抑菌抗生素中,头孢霉素对叶片再生影响较大;而250 mg/L的羧苄青霉素能有效地抑制农杆菌菌株EHA105的生长,却对尾叶桉叶盘的芽分化影响不大,为适宜的抑菌抗生素.3种农杆菌LBA4404,EHA105,GV3101的菌液浸染桉树叶盘,统计其愈伤组织GUS染色率,以EHA105对外植体的浸染能力最强,达83.3%.     

园艺植物体胚发生及植株再生技术研究

通过无患子科荔枝,龙眼,天南星科白鹤芋,火鹤芋,花叶芋,芭蕉科香蕉,葫芦科西瓜甜瓜甜兰科卡特兰,大花蕙兰,石竹科满天星,康乃馨等５０多个品种品系体细胞胚胎发生的诱导技术研究,探索出园艺植物获得体细胞发生的两种。途径。第一途径由外植体先诱导出愈伤组织然后产生胚状体,此途径的技术关键在于前期必需在附加高浓度２,４－Ｄ的培养基上作激发培养,如荔枝,天星,康乃馨,火鹤芋,香芋等可由引途径产生体胚。第二种途     

大根唇柱苣苔的组培快繁技术

以大根唇柱苣苔叶片为外植体,以MS为基本培养基,附加不同种类和浓度的激素进行组培快繁技术研究。结果表明:适宜叶片不定芽诱导的培养基是MS+6-BA 1.00 mg/L+NAA 0.05 mg/L,继代增殖培养的适宜培养基为MS+6-BA 1.50~3.00 mg/L+NAA 0.10 mg/L,适宜的生根培养基为1/2MS+IBA 0.20~0.30 mg/L,适宜的基质是泥炭∶珍珠岩=2∶1、泥炭∶细河沙=2∶1、泥炭∶园土=2∶1。     

浸种和外源激素处理对毛马齿苋种子发芽的影响

为提高毛马齿苋种子播种出苗率,分析不同时间浸种以及采用GA3、NAA和6-BA 3种外源激素处理对其种子发芽的影响。结果表明：浸种处理没有提高毛马齿苋种子的发芽势和发芽率的效果;GA3、NAA和6-BA三种激素浸种处理均能提高毛马齿苋种子的发芽势和发芽率;最适宜的浸种浓度分别为GA3 30 mg/L、10～20 mg/L NAA或6-BA 30 mg/L。其中GA3有效浓度范围较宽泛,建议采用,但GA3处理不能解除该种子发芽的需光性。     

苎麻茎尖的组织培养及其诱导植株的再生

对苎麻50号品系的茎尖进行组织培养并诱导植株再生。结果表明:最适茎尖转绿和分化的培养基是1/2MS 6-BA1.0mg/L CH300mg/L的液体培养基,茎尖分化率为100%。最适成苗培养基为MS 6-BA0.5mg/L IAA0.1mg/L CH300mg/L,成苗率是53.3%。扩繁培养基为MS 6-BA0.3￣1.0mg/L,繁殖系数达6.7。适宜生根培养基为1/2MS NAA0.01mg/L。最佳茎尖剥取材料是无菌试管苗,茎尖长以0.3mm带1￣2个叶原基为宜。从茎尖接种培养成苗到移栽需4个月左右。