FGF21对NEFA介导肝脂质沉积及AMPK调控因子的影响特征

研究旨在阐明成纤维细胞生长因子21（FGF21）对AMPK磷酸化调控因子的影响机制,并明确FGF21对高NEFA介导的小鼠肝细胞脂滴代谢的影响特征。对AML12小鼠肝细胞进行添加NEFA和（或）沉默FGF21处理,应用荧光定量PCR技术检测肝细胞FGF21、肝激酶B1（LKB1）、转化生长因子β激活激酶1（TAK1）、钙调蛋白依赖性蛋白激酶（CaMKK）mRNA表达水平;用油红O染色检测肝脂沉积水平。结果显示,沉默FGF21,显著（P<0.05）降低LKB1表达,而对TAK1、CaMKK表达量没有显著（P>0.05）影响。高浓度NEFA下,沉默FGF21肝细胞脂质沉积水平显著增高。由该试验结果可以得出,高NEFA下肝细胞FGF21可能通过诱导LKB1激活AMPK信号通路,进而减少肝细胞脂质沉积。     

罗格列酮对非酯化脂肪酸体外诱导的犊牛原代肝细胞线粒体功能紊乱的影响

本试验旨在探讨非酯化脂肪酸(Nonestesterified fatty acid,NEFAs)对体外原代培养犊牛肝细胞线粒体功能以及罗格列酮对NEFAs诱导的线粒体功能紊乱的影响。体外添加NEFAs(1.8mmol/L)处理犊牛原代肝细胞不同时间,运用Western blot和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测线粒体呼吸链复合体IV(COX IV)蛋白水平及mRNA水平的影响。另外选取细胞,罗格列酮(10nmol/L)预处理细胞24h后添加NEFAs(1.8mmol/L)处理9h。运用Western blot和qRT-PCR方法检测PGC-1α、Mfn-2的蛋白表达水平及COX IV mRNA表达水平。结果显示,随着NEFAs作用时间的增加,与0h组相比,NEFAs处理5h以上时COX IV蛋白表达水平极显著降低(P0.01),处理7~12h时COX IV mRNA表达水平呈显著降低(P0.05)。添加罗格列酮后,罗格列酮可极显著增加COX IV mRNA水平,PGC-1α、Mfn-2蛋白表达水平(P0.01)。结果表明,NEFAs可诱导犊牛原代肝细胞发生线粒体功能紊乱,罗格列酮可缓解由NEFAs诱导的犊牛原代肝细胞线粒体功能紊乱。     

非酯化脂肪酸对原代培养犊牛肝细胞胰岛素信号通路的影响

旨在探讨非酯化脂肪酸(nonestesterified fatty acids,NEFAs)对体外原代培养犊牛肝细胞胰岛素信号通路的影响及SIRT1在其中的调控作用。选择培养48h的原代犊牛肝细胞,添加不同浓度的NEFAs(0、0.6、1.2、1.8mmol/L),继续培养12h,胰岛素处理组在收样前用100nmol/L胰岛素处理30min,每个浓度3个重复。另外选取已培养48h的细胞,用SIRT1抑制剂Nicotinamide(10mmol/L)处理12h,胰岛素处理组在收样前用100 mmol/L胰岛素处理30min。运用免疫印迹Western blot方法,检测NEFAs和Nicotinamide对肝细胞胰岛素信号通路关键蛋白IR和Akt的磷酸化水平及SIRT1蛋白表达水平的影响。结果显示,与对照组相比,1.2、1.8 mmol/L NEFAs组胰岛素刺激的IR磷酸化水平显著降低(P0.01),而Akt的磷酸化程度在NEFAs浓度为0.6 mmol/L时即显著降低(P0.01),同时,SIRT1的蛋白表达水平在NEFAs为1.2、1.8mmol/L显著降低(P0.01);添加SIRT1抑制剂显著降低SIRT1的蛋白表达水平(P0.01),同时胰岛素刺激的Akt磷酸化水平也显著降低(P0.01)。结果表明,高浓度的NEFAs可以损伤体外原代培养肝细胞的胰岛素信号通路,SIRT1在NEFAs损伤的胰岛素信号通路中发挥重要作用。     

蓝刺头多糖B对胰岛素抵抗L6骨骼肌细胞耗糖量及AMPK表达的影响

为了探究蓝刺头多糖B(ETPB)对棕榈酸(PA)诱导的胰岛素抵抗L6骨骼肌细胞耗糖量及腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)表达的影响,体外培养大鼠L6成肌细胞,诱导分化为骨骼肌细胞并进行分化鉴定;采用CCK8法检测细胞存活率,筛选PA和ETPB的安全浓度;葡萄糖氧化酶法检测各组细胞耗糖量;实时荧光定量PCR法检测AMPK mRNA基因表达水平,Western blot法检测AMPK蛋白表达量。结果显示:PA诱导L6骨骼肌细胞发生胰岛素抵抗的最适造模浓度为0.4 mmol/L,ETPB的最大安全浓度为200 mg/mL;ETPB可显著提高胰岛素抵抗L6骨骼肌细胞耗糖量(P<0.05),上调AMPK mRNA表达水平,增加AMPK蛋白表达量。提示:ETPB可以通过提高AMPK基因及蛋白表达而促进胰岛素抵抗L6骨骼肌细胞耗糖,这可能是ETPB改善骨骼肌胰岛素抵抗的作用机制之一。     

NEFAs对BRL-3A氧化应激的作用

用非酯化脂肪酸(non-esterified fatty acids,NEFAs)刺激BRL-3A,添加钙释放激活的钙通道蛋白1(calcium release-activated calcium channel protein 1,CRAR,也叫Orai1)通路抑制剂2-氨基乙酯二苯基硼酸(2-APB),检测不同分组细胞内Orai1 mRNA表达量以及活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)水平的变化。结果显示,添加NEFAs的BRL-3A细胞中Orai1 mRNA表达量及ROS、MDA水平显著高于对照组,GSH水平显著低于对照组,经过2-APB预处理的NEFAs组细胞的Orai1 mRNA表达量和ROS、MDA水平显著低于NEFAs组,GSH水平显著高于NEFAs组。结果表明,NEFAs通过激活Orai1通路,使BRL-3A细胞的氧化应激水平显著上升,从而导致肝损伤,而抑制Orai1通路可下调NEFAs诱导的大鼠肝细胞氧化应激水平,进而保护肝脏。     

NFκB-Orai1参与NEFA诱导的内质网应激

为探究NFκB-Orai1是否参与游离脂肪酸(NEFA)诱导的内质网应激,首先通过体外添加一定浓度的非酯化脂肪酸(nonestesterifiedfatty acid,NEFAs)(1.2 mmol/L)处理大鼠肝细胞不同时间,运用Western blot和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法,测定NEFAs对内质网应激(ER stress)标志分子GRP78表达量以及钙通道相关蛋白Orai1表达水平的影响。结果显示NEFAs处理12 h时GRP78、Orai1表达量极显著高于对照组(P0.01),证明12 h NEFAs刺激诱导产生内质网应激效果最佳。而后又通过分别添加NFκB抑制剂wogonin与Orai1抑制剂2APB,结果显示抑制NFκB和Orai1后NEFAs刺激可明显降低GRP78、NFκB p65、Orai1的表达水平。结果表明NFκB-Orai1参与NEFA诱导的内质网应激。     

一磷酸腺苷激活的蛋白激酶对动物糖脂代谢的调节作用

一磷酸腺苷激活的蛋白激酶(AMPK)广泛存在于真核细胞中,AMPK的活性受一磷酸腺苷(AMP)/三磷酸腺苷(ATP)的调节,应激反应可通过ATP的产生减少或消耗使细胞内AM P/ATP增加,从而激活AMPK。激活的AMPK可通过磷酸化下游靶蛋白,改变脂类和碳水化合物代谢,使其朝着抑制ATP消耗过程、促进ATP生成反应的方向进行,即抑制脂肪酸和糖原合成,促进脂肪酸氧化分解和葡萄糖的吸收,从而迅速恢复细胞中的能量,因此AMPK被称为"细胞能量调节器",在动物适应环境的过程中发挥着重要的作用。本文在国内外已有文献报道基础上,对AMPK的结构、分布、活性调节及对糖脂代谢的调节作用进行综述。     

腺苷酸激活蛋白激酶信号通路及其在动物应激过程中的调节功能

腺苷酸激活蛋白激酶(AMPK)是一种在真核细胞生物中广泛存在的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,作为细胞内最重要的能量感受器,AMPK在细胞生长、繁殖、维持机体能量平衡以及细胞代谢过程中发挥重要的调节作用。AMPK活化主要受细胞内一磷酸腺苷/三磷酸腺苷(AMP/ATP)水平及肝激酶B1、钙调素依赖蛋白激酶活性等因素的影响;在动物处于营养缺乏、热应激、氧化应激等环境中,AMPK通路能做出适应性调整,以降低应激环境对动物的负面影响。本文对AMPK的结构、活性调节以及对处于应激环境中的动物能量代谢的调节进行综述,为缓解畜禽各种应激综合征提供理论参考。     

腺苷酸激活蛋白激酶信号通路及其在动物应激过程中的调节功能北大核心CSCD

腺苷酸激活蛋白激酶(AMPK)是一种在真核细胞生物中广泛存在的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,作为细胞内最重要的能量感受器,AMPK在细胞生长、繁殖、维持机体能量平衡以及细胞代谢过程中发挥重要的调节作用。AMPK活化主要受细胞内一磷酸腺苷/三磷酸腺苷(AMP/ATP)水平及肝激酶B1、钙调素依赖蛋白激酶活性等因素的影响;在动物处于营养缺乏、热应激、氧化应激等环境中,AMPK通路能做出适应性调整,以降低应激环境对动物的负面影响。本文对AMPK的结构、活性调节以及对处于应激环境中的动物能量代谢的调节进行综述,为缓解畜禽各种应激综合征提供理论参考。     

腺苷酸活化蛋白激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路介导能量和必需氨基酸调控乳蛋白合成

乳蛋白合成是以必需氨基酸为底物的耗能过程。腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)是AMPK信号通路的重要分子;可通过感受细胞能量状态的方式来维持能量平衡,从而为乳蛋白合成提供充足的能量。哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)是AMPK信号通路重要的下游靶点;必需氨基酸主要以m TOR介导的信号通路调控乳蛋白合成。本文主要综述了能量和必需氨基酸通过AMPK/m TOR信号通路对乳蛋白合成调控的研究进展,旨在进一步阐明能量和必需氨基酸对乳蛋白合成调控的作用机理。     

固醇调节元件结合蛋白基因的过表达对促进牛胎儿成纤维细胞脂肪形成的影响

为了研究固醇调节元件结合蛋白(sterol regulatory element binding factor 1,SREBP1)基因的表达与细胞脂肪形成的关系,本研究构建了pEGFP-C1-SREBP1重组质粒,利用脂质体介导法将重组质粒pEGFP-C1-SREBP1及pEGFP-C1空质粒转染至牛胎儿骨骼肌成纤维细胞培养48 h,实时荧光定量PCR和Western blotting分析目标基因表达水平的变化,并采用油红O染色检测细胞内脂滴。结果发现,pEGFP-C1-SREBP1重组质粒转染细胞内SREBP1 mRNA的表达水平显著高于空白对照组和阴性对照组(P<0.05);SREBP1蛋白也出现明显上调;空白对照组和pEGFP-C1阴性对照组细胞内均未见有红染细胞,而pEGFP-C1-SREBP1重组质粒转染组中出现了清晰的红染细胞。说明SREBP1的表达可促进牛胎儿骨骼肌成纤维细胞脂肪合成,证实牛胎儿成纤维细胞中SREBP1表达和脂滴形成之间存在直接关系。     

SIRT1/FoxO1通路对奶山羊乳腺上皮细胞脂质合成的影响

为研究SIRT1/FoxO1通路在奶山羊乳腺脂质合成中的作用,本实验采用0(对照)、50、100、150μmol/L的SIRT1激动剂(RES)处理奶山羊乳腺上皮细胞,qRT-PCR检测脂质代谢相关基因的表达,检测细胞中甘油三酯含量,油红O染色法观察脂滴的积累情况。结果表明:100μmol/L RES处理组的SIRT1和FoxO1基因的相对mRNA表达量高于对照组(P<0.05),乳脂关键调控因子SREBP1和PPARγ表达量下降(P<0.05);SIRT1/FoxO1通路激活后,脂肪酸合酶FASN(P<0.01)、脂肪酸去饱和酶SCD1(P<0.01)和脂肪酸转运酶CD36(P<0.05)表达量均下降;而脂解相关基因HSL和ATGL的表达上调(P<0.05)。SIRT1/FoxO1激活后,细胞中甘油三酯含量显著降低(P<0.05),脂滴积累减少。综上可知,SIRT1/FoxO1通路负调控奶山羊乳腺上皮细胞脂质合成,为改善羊奶营养价值和风味提供基础资料。     

动物食欲调节的中枢信号通路

下丘脑是动物食欲调节的中枢，外周食欲信号在下丘脑中经食欲调节网络整合，产生饱感或饥饿。其中，以 ５′－磷酸腺苷激活的蛋白激酶（ＡＭＰＫ）调控位点上的 ＡＭＰＫ-ＡＣＣ-ＣＰＴ１和 ＵＣＰ２-ＦＯＸＯ１-ｐＣＲＥＢ信号通路以及雷帕霉素靶蛋白（ｍＴＯＲ）调控位点上的 ＰＩ３Ｋ-Ａｋｔ-ｍＴＯＲ和 ｍＴＯＲ-４ＥＢＰ１／ｐ７０Ｓ６Ｋ-ＮＰＹ／ＡｇＲＰ信号通路尤为重要。ＡＭＰＫ和 ｍＴＯＲ在 ＡＭＰＫ-ＴＳＣ ｍＴＯＲ通路、固醇类调节因子绑定蛋白（ＳＲＥＢＰ）基因表达和吞噬启动激酶（Ｕｌｋ１）活性通路上存在互作。外周营养和能量信号传输到下丘脑后，经过这些网络的传输和分析，作用于下丘脑中的食欲相关肽，最终调控动物的采食行为。     

脂肪酸结合蛋白4对BCG诱导巨噬细胞自噬的调控作用

旨在探讨脂肪酸结合蛋白4（fatty acid binding protein,FABP4）在牛分枝杆菌卡介苗（BCG）感染的巨噬细胞中对脂肪酸代谢与自噬的调控作用。本研究利用小干扰RNA技术敲减小鼠巨噬细胞系RAW264.7中FABP4的表达,并结合BCG感染,采用免疫印记和免疫荧光等技术,检测了FABP4蛋白表达、脂肪酸累积、脂肪酸β氧化和自噬相关蛋白表达等指标。结果表明,BCG感染极显著上调了小鼠巨噬细胞RAW264.7中FABP4的表达（P<0.001）并促进了脂肪酸的累积。FABP4小干扰RNA（siRNA-FABP4）能显著降低BCG感染后巨噬细胞中脂肪酸含量,伴随着肉毒碱棕榈酰移位酶1A（CPT1A）的表达上调（P<0.05）,与ATP产量的提升（P<0.05）。同时,siRNA-FABP4极显著下调了自噬调控关键因子AMPK及自噬相关蛋白p-ULK1、ATG5、ATG7、ATG12和LC3B的表达（P<0.01）。以上研究结果表明,在BCG感染RAW264.7细胞过程中,下调了FABP4的表达,促进了脂肪酸的氧化,减少了巨噬细胞内脂肪酸的含量,并通过AMPK信号通路抑制了细胞自噬的发生。     

Role of Fatty Acid Binding Protein 4 in Regulating Macrophage Autophagy Induced by BCG Infection

To investigate the role of FABP4 on regulating fatty acid metabolism and autophagy in macrophage infected with BCG, small interfering RNA for FABP4 were transfected into RAW264.7 cells alone or combined with BCG infection. The immunoblot and immunofluorescence were used to detect the expression of FABP4, the accumulation of lipid droplets, the expression of fatty acid β-oxidation and autophagy related factors. The results showed that the infection of BCG increased the expression of FABP4 and accompanied with the accumulation of lipid droplets in RAW264.7. Moreover, the knockdown of FABP4 decreased lipid droplets but promoted the expression of carnitine palmitoyltransferase 1A (CPT1A) (P <0.05) and the production of ATP (P <0.05). Meanwhile, the knockdown of FABP4 suppressed the expression of AMPK, p-ULK1, ATG5, ATG7, ATG12 and LC3B which are autophagy related factors (P<0.001). Our results indicated that the knockdown of FABP4 promoted fatty acid oxidation, decreased fatty acid level and suppressed autophagy via AMPK signal pathway in BCG infected RAW264.7 cells.     

丁酸钠通过AMPK通路调控LPS造成牛乳腺上皮细胞脂代谢紊乱的作用机制

通过向脂多糖（LPS）诱导牛乳腺上皮细胞系（MAC-T）脂代谢紊乱模型中添加不同浓度（2、8、16 μmol·L^-1）的丁酸钠,探讨其对细胞脂代谢的调控机理及炎症损伤的修复作用。分别用1 000 ng·mL^-1 LPS刺激MAC-T细胞9 h后,检测细胞脂滴面积及三酰甘油（TG）含量;用不同浓度的丁酸钠刺激MAC-T细胞12 h后,流式细胞术检测细胞凋亡率;试验共分为5组：对照组、LPS处理组、2 μmol·L^-1丁酸钠+LPS处理组、8 μmol·L^-1丁酸钠+LPS处理组和16 μmol·L^-1丁酸钠+LPS处理组,分别对细胞TG含量、AMPK信号通路蛋白、脂代谢关键基因以及相关炎症因子进行检测。结果显示：LPS会造成MAC-T细胞总脂滴面积显著下降（P<0.05）,TG含量极显著下降（P<0.01）;不同浓度的丁酸钠对MAC-T细胞凋亡率没有影响;与对照组相比,LPS处理组TG含量极显著下降（P<0.01）、P-AMPK表达水平显著上升（P<0.05）、脂合成代谢相关基因ACC、SCD-1以及FAS mRNA表达水平均显著（P<0.05）或极显著（P<0.01）下降、脂分解代谢相关基因CPT-1、CPT-2以及ACO mRNA表达水平均显著上升（P<0.05）、炎症因子TNF-α和IL-6含量显著上升（P<0.05）;与LPS处理组相比,（2、8、16 μmol·L^-1）丁酸钠+LPS处理组TG含量有一定程度上升,P-AMPK表达水平下降,脂合成代谢相关基因表达水平上升,脂分解代谢相关基因表达水平有一定程度下降,炎症因子TNF-α和IL-6含量下降。本研究表明丁酸钠会通过AMPK通路激活脂合成代谢,调控TG的合成,并且对MAC-T细胞的炎症损伤具有一定的缓解作用。     

乙酸钠对油酸诱导的BRL-3A细胞脂肪变性的影响及机制分析

通过向油酸诱导的大鼠肝成纤维细胞(BRL-3A)脂肪变性模型中添加不同浓度(2、4、8 mmol·L^-1)的乙酸钠,探讨其对脂肪变性细胞模型脂代谢的调控机理及细胞损伤的修复作用。试验方法：1)用不同浓度的油酸(0、0.03、0.06、0.12、0.24、0.48) mmol·L^-1刺激BRL-3A细胞24 h后,分别检测细胞相对活力、总脂滴面积、三酰甘油(TG)含量、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)及丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性,建立脂肪变性细胞模型;2)向BRL-3A细胞中添加不同浓度的乙酸钠,通过流式细胞术检测细胞凋亡率;3)用不同浓度的乙酸钠和0.12 mmol·L^-1油酸共同孵育BRL-3A细胞,试验分为4组,分别为油酸处理组、2 mmol·L^-1乙酸钠+油酸处理组、4 mmol·L^-1乙酸钠+油酸处理组和8 mmol·L^-1乙酸钠+油酸处理组,分别对细胞脂滴、TG含量、AST、ALT活性、AMPK信号通路蛋白以及脂代谢关键基因进行检测。结果显示:1)用0.12 mmol·L^-1油酸处理BRL-3A细胞24 h,成功建立BRL-3A细胞脂肪变性模型。2)不同浓度的乙酸钠对BRL-3A细胞凋亡率没有影响;3)4、8 mmol·L^-1乙酸钠处理脂肪变性细胞模型后,与油酸处理组相比,细胞总脂滴面积、每平方毫米脂滴数、TG含量、AST和ALT活性均显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)下降,P-AMPK表达水平显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)上升;脂合成代谢相关基因ACC、FAS以及SCD-1 mRNA表达水平均有一定程度下降;脂分解代谢相关基因CPT-1、CPT-2以及ACO mRNA表达水平均有一定程度上升。本研究表明,乙酸钠会通过AMPK通路激活脂分解代谢,减轻肝细胞脂质蓄积,并且对油酸诱导的BRL-3A细胞脂肪变性模型的损伤具有一定缓解作用。     

甘氨酸对脂多糖刺激仔猪肝脏能量代谢及相关基因表达的调控作用

本试验旨在研究甘氨酸(Gly)对脂多糖(LPS)刺激断奶仔猪肝脏能量代谢、能量代谢关键酶和相关调节因子mRNA表达的调控作用。选取24头杜×长×大仔猪,分成4个组,每组6个重复。4个组分别为:1)对照组(基础饲粮);2)LPS组(LPS+基础饲粮);3)1.0%Gly组(LPS+基础饲粮+1.0%Gly);4)2.0%Gly组(LPS+基础饲粮+2.0%Gly)。试验第28天,试验组仔猪腹膜注射100μg/kg BW的LPS,对照组注射等量的生理盐水。试验猪于注射LPS或生理盐水4 h后屠宰,取肝脏样品待测。结果表明:1)与LPS组相比,1.0%Gly显著提高了仔猪肝脏三磷酸腺苷(ATP)浓度和能荷(EC)水平(P0.05),显著降低了一磷酸腺苷(AMP)/ATP值(P0.05),并有降低AMP浓度的趋势(P0.10);2.0%Gly有降低AMP/ATP值的趋势(P0.10)。2)与LPS组相比,1.0%Gly显著降低了仔猪肝脏己糖激酶2(Hexok2)和柠檬酸合成酶(CS)的mRNA表达量(P0.05);2.0%Gly显著降低了肝脏Hexok2和丙酮酸激酶(PK)的mRNA表达量(P0.05),并有降低肝脏CS mRNA表达量的趋势(P0.10)。3)与LPS组相比,1.0%Gly显著提高了仔猪肝脏腺甘酸活化蛋白激酶α1(AMPKα1)的mRNA表达量(P0.05)。综上所述,饲粮中添加Gly能够改善LPS刺激引起的断奶仔猪肝脏能量代谢紊乱,调控糖酵解和三羧酸循环等代谢途径中相关酶的表达。     

风柜斗草提取物通过调控脂质代谢改善小鼠肝脂质沉积症

旨在探究风柜斗草提取物(Sarcopyramis napalensis Wall extract,SNE)对蛋氨酸胆碱缺乏(MCD)饮食诱导的肝脏脂质沉积的作用与机制。本研究将60只雄性C57BL/6小鼠随机分为6组,每组10只,设置MCS组(MCD饲料的对照饲料组)、MCS+风柜斗草提取物组(400 mg·(kg·bw)^-1)、MCD组、MCD+风柜斗草提取物低、中、高剂量组(100、200、400 mg·(kg·bw)^-1),造模及药物干预6周。进行肝组织切片HE染色、天狼猩红染色,检测血清碱性磷酸酶(AKP)、谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT),肝组织谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)活力水平及丙二醛(MDA)含量以评估肝脂质沉积、肝纤维化以及肝抗氧化情况。使用Western blot技术检测腺苷酸激活蛋白激酶(AMPK)蛋白的激活情况,使用qRT-PCR技术检测固醇调节元件结合蛋白-1C (SREBP-1c)、肝型脂肪酸结合蛋白(L-FABP)、脂肪酸转运蛋白-3(FATP-3)、脂肪酸转运蛋白-4(FATP-4)、细胞间黏附分子-l (ICAM-1)、血管细胞黏附分子-l (VCAM-1)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、组织金属蛋白酶抑制剂-2(TIMP-2) mRNA表达水平,同时采用LC-MS/MS技术进行肝组织非靶向脂质组学分析。结果表明,给予200、400 mg·(kg·bw)^-1剂量的风柜斗草提取物时均可显著改善MCD饲料饲喂的小鼠肝脂肪变性,减少炎症簇以及肝纤维化程度。给予风柜斗草提取物100、200、400 mg·(kg·bw)^-1时均可显著降低MCD饲料饲喂的小鼠血清中ALT和AKP的活力以及肝组织中MDA的含量,显著提高小鼠肝中GSH-Px的活力。Western blot及qRT-PCR检测结果显示,风柜斗草提取物显著激活MCD饲料饲喂的小鼠肝组织AMPK;显著抑制MCD饲料饲喂的小鼠肝组织SREBP-1c、L-FABP、FATP-3、FATP-4、ICAM-1、VCAM-1、MMP-2、TIMP-2的mRNA表达水平。肝脂质组学检测结果显示,风柜斗草提取物显著降低MCD饲料饲喂的小鼠肝中甘油三酯(TG)、磷脂酰甘油(PG)以及神经酰胺(Cer)的相对含量;显著提高鞘磷脂(SM)以及辅酶Q9相对含量。结果提示,风柜斗草提取物可通过AMPK/SREBP-1c途径抑制TG合成,以及通过抑制FATP与L-FABP表达来减少肝对脂肪酸的摄取,从而改善MCD饲料饲喂的小鼠肝脂肪变性;通过提高MCD饲料饲喂的小鼠肝组织中SM和辅酶Q9相对含量以及降低Cer相对含量,改善肝细胞氧化应激损伤情况,进而改善MCD饮食诱导的小鼠肝炎症和纤维化,最终达到改善肝脂质沉积症的作用。