水稻黄矮病毒结构蛋白的分离及其小鼠腹水抗体的制备

从人工接种感染黄矮病毒(Rice Yellow Stunt Virus,RYSV)的水稻茎杆中提取得到了部分纯化的RYSV制品,病毒制品经Tricine-SDS-PAGE得到分子量分别为84 kD,60 kD,31 kD和29.5 kD的4条主要蛋白带和分子量为170kD和43kD的两条次要蛋白带。根据弹状病毒结构蛋白命名法,按分子量大小依次命名为L,G,N,NS,M_1和M_2蛋白。从电泳凝胶上切下G和N蛋白带,制成抗原免疫BALB/C小鼠;制得G和N蛋白小鼠腹水抗体。经Dot-blot试验测得N蛋白抗体效价为1:1000,G蛋白抗体效价为1:400。     

越南水稻黄矮病毒多克隆血清抗体的制备

[目的]制备用于检测水稻黄矮病毒(RYSV)的多克隆抗体,为水稻和黑尾叶蝉上的病毒诊断提供技术支持.[方法]利用两种不同来源的RYSV抗原免疫家兔,一种是从受感染的水稻病叶组织纯化获得RYSV病毒粒子;另一种是从越南RYSV分离株克隆出完整N蛋白编码基因,然后将其连接至pET-28a载体上,在大肠杆菌Rosetta(DE3)菌株中进行诱导表达获得N蛋白抗原.其中,N蛋白抗原又以两种形式(洗脱纯化N蛋白和N蛋白条带聚丙烯酰胺切片匀浆)对家兔进行免疫.最后,采用PTA-ELISA分析评估家兔抗体血清(多克隆抗体)对水稻叶片和黑尾叶蝉RYSV的特异性和敏感性.[结果]分离自越南RYSV分离株的N基因由1542个核苷酸组成,与来自我国和日本RYS分离株N基因序列进行比对,其核苷酸序列同源性分别为98.1%和97.9%,对应的推导氨基酸序列同源性为83.4%和99.4%.以RYSV病毒粒子、洗脱纯化N蛋白和N蛋白条带聚丙烯酰胺切片匀浆3种抗原免疫家兔获得的多克隆抗体均能有效检测出水稻植株中的RYSV,其中,感病植株的OD405分别为1.449、2.337和1.649,健康植株的OD405分别为0.375、0.294和0.283.PTA-ELISA检测结果表明,获得的多克隆抗体能从单个带病毒黑尾叶蝉中检测出RYSV,且该结论在RT-PCR检测中得到进一步验证.[结论]制备获得的多克隆抗体对RYSV具有较高特异性和敏感性,可用于水稻和黑尾叶蝉上的病毒诊断,同时表明以含有病毒植物蛋白的聚丙烯酰胺切片直接注射免疫模型动物制备多克隆抗体具有可行性.     

水稻矮缩病毒非结构蛋白Pns6和外壳蛋白P8多克隆抗体的制备及其应用

利用RT-PCR的方法从感染水稻矮缩病毒(Rice dwarf virus,RDV)的水稻中克隆该病毒的运动蛋白基因S6和外壳蛋白基因S8,通过Gateway系统进行原核表达,获得表达载体p DEST17-Pns6和p DEST17-P8,将表达载体转化E.coli Rosetta,经IPTG诱导表达后获得分子质量约为59和46 ku含HIS标签的融合蛋白.以诱导表达的目的蛋白为抗原,免疫注射新西兰大白兔制备多克隆抗体.结果表明,Western blot检测制备的Pns6和P8抗体可特异性检测RDV,间接ELISA测定Pns6和P8抗体的效价均约为6 400倍,并建立了可靠、灵敏、特异的Dot-blot ELISA方法检测RDV.以上研究表明,RDV运动蛋白和外壳蛋白抗体均可应用于该病毒在田间的大规模调查和检测.     

公主岭地区小麦黄矮病毒株系的鉴定

小麦黄矮病是我国北方冬、春麦区广为发生的一种严重危害小麦的病毒病害。周广和等人用生物测定法查明在上述地区危害小麦的3种病毒株系。1970年以来东北地区曾多次发生小麦黄矮病的流行,给小麦生产造成严重损失。我们用生物方法查明1986年公主岭地区的小麦黄矮病毒属 GAV 株系,即二叉蚜长管蚜株系。     

水稻黄矮病、纹枯病的防治

○水稻黄矮病水稻黄矮病又名黄叶病、暂黄病,是病毒性病害,流行年份一般可使水稻减产20%～30%,甚至失收。本病由黑尾叶蝉、二条黑尾叶蝉和二点黑尾叶蝉传播。水稻从秧苗至始穗期都能感染发病,但以分蘖期最易感病,受害也最重。叶蝉吸食病株毒汁后,可以终     

几种水稻病毒非结构蛋白研究进展

对水稻病毒编码的病毒基质、管状蛋白、逆转录酶、基因沉默抑制子、核酸结合活性蛋白、转录调节功能蛋白6种非结构蛋白及其功能进行了介绍,为发现水稻病毒的潜在药物靶标以及研究病毒与寄主互作关系提供了参考。     

南方水稻黑条矮缩病毒P8蛋白的定位和致病性分析

P8是南方水稻黑条矮缩病毒(Southern rice black-streaked dwarf virus,SRBSDV)编码的一种外壳蛋白,该蛋白的其他功能未知。利用马铃薯X病毒(Potato virus X,PVX)异源病毒载体和pEarleyGate101在本氏烟(Nicotiana benthamiana)中表达了P8,通过荧光共聚焦显微镜观察这些蛋白的亚细胞定位情况,分析该蛋白的表达对本氏烟的影响。结果显示:P8主要定位于细胞质,在细胞质中形成颗粒状聚集体;与PVX空载体侵染的本氏烟相比,P8蛋白的表达能够促使本氏烟表现出一定程度的花叶和新叶皱缩症状,推测可能参与病毒的致病性过程。     

水稻矮缩病毒外壳蛋白P9具有体内转录激活活性

将RDV微核心蛋白基因S9克隆到酵母表达载体pGBKT7中，转入AH109酵母细胞，转化子可以在SD／Trp^-His^-Ade^-多营养缺陷固体培养基上正常生长，证明RDVP9在酵母中具有转录激活活性，运用β-半乳糖苷酶的活性分析对重组质粒转化子的转录激活程度做了定量分析，发现与正对照相比，转化pGBK-S9的酵母菌中β-半乳糖苷酶活性可达到正对照的40％以上。构建了含有gusA报告基因的植物表达载体用来分析P9在植物中的转录激活活性，实验结果表明，融合GAL4DB的P9蛋白可以在植物体内激活报告基因的表达，Weestern印迹法分析表明了P9蛋白在酵母和植物中均可以表达。证明了在植物体内RDVP9蛋白同样能够激活基因的转录，暗示该蛋白可能在病毒的侵染和复制过程中参与调控病毒或寄主基因的转录表达。     

水稻簇矮病毒的提纯及其性质

 采用差速离心和蔗糖密度梯度离心，可获得水稻簇矮病毒（RBSV）提纯制剂。提纯制剂经紫外扫描，呈典型的核蛋白吸收曲线，A260/240=1.18，A260/280=1.61。在电镜下观察提纯病毒，可见大量比较均一的球状粒体，直径为60.0nm。病毒粒体有双层衣壳，蛋白亚基清晰可辨。通过免疫扩散和免疫电镜试验，病毒粒体与自制的RBSV抗血清有明显的血清学反应，而这种抗血清与水稻矮缩病毒(RDV)、水稻瘤矮病毒(RGDV)不起反应。提纯病毒制剂以苯酚-甲基苯酚-SDS方法提取核酸。将其注射到介体昆虫内，具有侵染性。核酸制品有典型的核酸紫外吸收曲线，A260/228=2.27，A260/280=2.02。根据核酸在不同离子强度下对RNase的稳定性等的测定，表明其核酸属双链RNA。根据紫外吸收测定，RNA在RBSV粒体中的含量为17.5%-20.1%。用聚丙烯酰胺凝胶电泳，其RNA的总分子量为16.66×10#+(6)d，含组分分子量为2.70、2.30、1.90、1.70、1.68、1.50、1.38、1.20、1.10、0.60、0.35、和0.25(× 10#+6)。这些结果表明，RBSV是植物呼肠弧病毒亚组Ⅰ的一个新成员。     

双重RT-PCR法同时快速检测南方水稻黑条矮缩病毒和水稻黑条矮缩病毒

南方水稻黑条矮缩病毒(SRBSDV)和水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)在病害症状、传播介体及寄主等方面非常相似,田间很难对其进行诊断及鉴定.根据SRBSDV与RBSDV外壳蛋白(CP)基因核苷酸序列差异设计特异性引物,建立一种快速、准确的双重PT-PCR鉴别方法,为SRBSDV和RBSDV的流行监测提供技术支持.     

水稻黑条矮缩病毒与南方水稻黑条矮缩病毒的检测及其在江西省的区域分布

为明确水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)和南方水稻黑条矮缩病毒(SRBSDV)这2种病毒在江西省的分布,首先从永修县、南昌县和大余县等8县市采集水稻疑似矮缩病株,用2种病毒一步检测法对这2种病毒进行RT-PCR检测.结果表明:永修县所有样品均检出RBSDV,检出率为100％;南昌县同时检出RBSDV和SRBSDV,检出率分别为90％和20％,其中南昌县的1个样品同时检出2种病毒,存在复合侵染;大余县、莲花县、崇义县、婺源县、万安县和井冈山市等6县的所有样品均检出SRBSDV,检出率100％.然后,对这2种病毒在江西省的分布特点进行分析.统计分析结果表明:江西省西南部和东北部只有SRBSDV分布,江西省北部只有RBSDV分布,而处于以上3个病毒重发区之间的南昌县同时有RBSDV和SRBSDV分布.同时基于S9序列和S10序列建立这2种病毒及其近缘种的系统发育树,分析其亲缘关系.     

广西南方水稻黑条矮缩病毒及水稻齿叶矮缩病毒的分子检测

[目的]探索南方水稻黑条矮缩病毒(SRBSDV)和水稻齿叶矮缩病毒(RRSV)的分子检测技术,了解两种病毒在广西的分布,为生产上开展两种病害的防治奠定基础.[方法]用RT-PCR技术检测采自广西各地的水稻、杂草及稻飞虱样品;用CF-11纤维素粉提取水稻茎叶组织中的dsRNA,1.5%琼脂糖凝胶电泳观察dsRNA图谱.[结果]从水稻、稗草、五节芒、李氏禾和白背飞虱样品中获得850 bp左右的SRBSDV序列,从水稻和褐飞虱样品中获得700 bp左右的RRSV序列;首次从五节芒和李氏禾中检测到SRBSDV.SRBSDV单独侵染、SRBSDV和RRSV复合侵染可见8条dsRNA条带,但带谱不一致;RRSV单独侵染可见5条dsRNA带.在供检测的181株水稻样品中,除了来自北海、贵港和梧州市的水稻样品外,其余样品均检测到SRBSDV;除了来白梧州、贺州、玉林、贵港和来宾的水稻样品外,其余样品均检测出RRSV;其中带SRBSDV的样品数占44.8%,带RRSV的样品占21.5%,两种病毒复合感染占11.0%.[结论]研究设计的特异性引物能用于RT-PCR检测SRBSDV和RRSV、水稻样品提取dsRNA能快速直观地鉴定SRBSDV、RRSV单独感染及混合感染水稻.用设计的引物首次检测出SRBSDV的两种新寄主五节芒和李氏禾.     

水稻黄矮病的防治

一、水稻黄矮病症状 本病是由黑尾叶蝉传染，其病毒不能经卵传至下一代，早，中，晚稻均可发生。病株矮缩，株形比健株松散，叶片平展。病叶初发生时至黄绿相间的黄叶，以后叶片橙黄色，由叶尖开始骤然向下至全叶卷缩。病株根系不发达，多老根，苗期发病的植株不分蘖，早期枯死；     

关于小麦黄矮病的研究进展

小麦黄矮病以晚熟冬麦和春麦区发生流行危害最重，新发生红穗症状，小麦品种抗病性持久，具有慢黄矮病和发病的康复现象；介体禾谷缢蚜传播能力提高，赶上和超过了优势介体麦二岔蚜；发病与湿度关系密切；近年明显感染玉米和开始感染水稻。     

病毒抑制剂对小麦黄矮病防治效果的研究

为明确不同致病机理的病毒抑制剂对小麦黄矮病的预防和防治效果,在小麦苗期将大麦黄矮病毒GAV株系接种于小麦阿勃上,喷施杀虫剂（毒死蜱）与病毒抑制剂（病毒特、好普、嘧肽核苷病毒唑、1.5％植病灵乳剂）的不同组合.结果表明,病毒特与毒死蜱组合的平均预防和防治效果最好.     

安徽省水稻黑条矮缩病毒和南方水稻黑条矮缩病毒的 分子检测和序列分析

近年来,水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)和南方水稻黑条矮缩病毒(SRBSDV)在安徽各稻区危害日益严重,生产上仅凭症状难以区分2种病毒。本研究建立的RT-PCR方法可以实现一次性检测和鉴定RBSDV和SRBSDV 2种病毒,根据RBSDV和SRBSDV S9保守序列设计3个引物,不仅可以从单独感染RBSDV或SRBSDV的水稻样本中分别扩增出1条大小不同的特异性条带,而且还可以从感染RBSDV和SRBSDV的混合水稻样本中一次性扩增出2条大小不同的特异性条带。从安徽省庐江县、郎溪县、怀宁县和宣州市4个地区水稻田采集表现明显矮缩病症状的水稻样本,RT-PCR检测结果表明,庐江和郎溪水稻样本受到RBSDV侵染,怀宁和宣州水稻样本受到SRBSDV侵染。选取庐江县、郎溪县、怀宁县和宣州市各1个水稻样本,利用RT-PCR扩增出特异性条带,再分别克隆和测序。序列分析表明,庐江、郎溪2个样本的核苷酸序列与RBSDV-Shandong和RBSDV-Zhjr S9部分片段序列相似性高达99.3%～99.8%,且与RBSDV的亲缘关系最近,说明庐江和郎溪样本感染的病毒是RBSDV的2个分离物;怀宁、宣州2个样本的核苷酸序列与SRBSDV-Shangdong和RBSDV-2 S9部分片段序列相似性高达99.5%,且与SRBSDV亲缘关系最近,说明怀宁和宣州样本感染的病毒是SRBSDV的2个分离物。     

水稻齿叶矮缩病毒的研究进展

水稻齿叶矮缩病毒（rice ragged stunt virus,RRSV）属呼肠孤病毒科水稻病毒属,其所致的水稻齿叶矮缩病是东南亚、东亚和南亚一些国家的重要病害,病害的发生对当地的水稻生产造成严重影响。综述了国内外有关RRSV的生物学、分子生物学方面的研究进展及其所致病害的控制策略。