包心菜无菌苗子叶及叶片原生质体高频分裂和高频植株再生

以包心菜子叶和叶片原生质体为材料。经不同液体培养基(Bp1,Bp2,B1)浅层培养,再生细胞高频分裂并形成愈伤组织。愈伤组织经扩增后转移到分化培养基上诱导植株分化,从这两种原生质体中获得了再生植株。在原生质体培养过程中,原生质体及细胞团的褐化程度与培养基中的有机成分的多少有关。原生质体的分化频率与培养基中植物激素种类关系甚大。在植株分化时,谷氨酰胺和腺嘌呤对植株分化有很大促进作用。另外,原生质体的来源及原生质体培养基对原生质体植株分化能力均有不同的影响。     

芜菁油菜叶肉原生质体再生植株

以芜菁油菜为材料，从无菌苗５—８天叶龄的叶片分离叶肉原生质体，然后以６×１０￣４／ｍＬ的密度用ＭＰ１－３液体培养基进行浅层培养。培养１０天后，用ＭＰ４培养基对ＭＰ１－２中的培养物进行稀释（１：１）．用ＭＰ５培养基对ＭＰ３中的培养物进行稀释（１：１），每次间隔１０天。在培养期间时常用手轻轻摇动培养物。用这种方法，再生细胞分裂并形成愈伤组织，愈伤组织经ＭＳ１培养基增殖３周，转到分化培养基上诱导植株分化，分化出的苗经诱导生根发育成完整的小植株（共５４株）．在研究中发现：①激素的种类、浓度及组合对刺激细胞分裂的作用差异明显；②提高培养基的ｐＨ值可明显地控制细胞褐化；③ＡｇＮＯ＿３（５ｍｇ／ｍＬ）有益于愈伤组织分化植株；④谷氨酰胺（８０ｍｇ／ｍＬ）和腺嘌呤（４０ｍｇ／ｍＬ）能提高愈伤组织的植株分化频率；⑤原生质体培养基对原生质体植株的分化亦有影响．     

Plant Regeneration from Hypocotyl Protoplast of Brassica campestris

以大白菜成青２号为材料,从萌发５天的无菌苗下胚轴分离原生质体,然后以附加８．２％葡萄糖,０．４ｍｇ／Ｌ２,４－Ｄ,０．４ｍｇ／ＬＮＡＡ和０．５ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ的改良ＫＭ８ｐ液体培养基进行浅层培养．培养１３天后,用含５．２％葡萄糖的ＫＭ８ｐ培养基以１∶１进行稀释．４～６周后,再生细胞分裂并形成愈伤组织,直径约０．４～０．５ｍｍ的愈伤组织经ＭＳ培养基（附加２％蔗糖,０．８％的琼脂,１．５ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ,０．５ｍｇ／ＬＮＡＡ和０．２ｍｇ／Ｌ２,４－Ｄ）诱导植株分化．５９％的愈伤组织可分化形成芽,分化的芽经诱导生根发育成完整的植株．０．８ｍｇ／ＬＩＢＡ和４００ｍｇ／Ｌ的羧苄青霉素对分化再生有促进作用．     

胡萝卜悬浮细胞原生质体的培养及植株再生的研究

采用继代培养4～5 d 后的胡萝卜悬浮细胞,经酶解获得大量原生质体,并在不同的培养基上经培养,细胞进行分裂,形成愈伤组织,获得了完整的再生植株。探讨了影响原生质体培养及植株再生的多种因素,实验表明:①原生质体的培养密度在5×10~4/mL～5×10~5/mL 范围内均可,以2.5×10~5/mL 为佳。②对于细胞的分裂、细胞团的生长以及愈伤组织的形成,以改良的 B_5培养基最好,N_5培养基其次,MS 较差。③适当降低原生质体培养基中的甘露醇浓度,有利于细胞的分裂和生长。④在本实验所涉及的培养方法中,以液体浅层培养为优。⑤诱导愈伤组织分化,以 1mg/L KT 为佳。⑥不同培养基对愈伤组织的生长速度和分化频率产生一定影响,以 MS 培养基提高分化频率效果较好。     

旱稻原生质体再生植株的性状表现

从旱稻仿野８７－７０７品系种子中诱导的愈伤组织，在氨基酸培养基中进行细胞悬浮培养，取该细胞悬浮培养物游离的原生质体，培养在ＫＭ８Ｐ培养基中得到原生质体再生愈伤组织，经不同分化培养基的培养均得到再生植株，当小苗长到５￣８ｃｍ时，从试管移栽到蛭石中过渡，上苗长到１０￣１５ｃｍ时，再移栽到盆钵中，同时播种该品系的种子作为对照。在各生育期分别对再生植株和对照株的某些性状作多次调查，观察株高、分蘖数、穗长、     

马铃薯悬浮细胞原生质体培养及植株再生

试验所培养的 3个基因型的马铃薯悬浮细胞原生质体均获得再生植株。愈伤组织继代培养基、分化培养基及基因型对分化频率有显著影响     

单双低油菜原生质体培养高效成株体系的研究

以甘蓝型单低和双低油菜为材料，对原生质体培养及植株再生进行了研究。结果表明：低温预处理无菌苗可提高原生质体活力。不同下胚轴部部位对原生质体的得率及分裂频率均有影响。用琼脂糖包理法，在不含ＮＨ４ＮＯ３及ＫＮＯ３，而加有丝氨酸和谷氨酰胺的Ｋｍ８ｐ培养基上培养原生质体获得了高频率再生愈组织。在Ｍ＋ＢＡ１ｍｇ／Ｌ分化培养基上两周后得到芽的分化，转至ＭＳ＋ＮＡＡ０．１ｍｇ／Ｌ＋生根粉０．１ｍｇ／Ｌ的培养基上     

山梨醇对枇杷原生质体分离和培养的效应

以山梨醇作为游离枇杷原生质体的渗透压稳定剂，效果较同质量分数的甘露醇差，但随着山梨醇质量分数的提高，原生质体得率递次升高，至１６％时，可达１．３×１０６ｇ－１．原生质体经液体培养在附加一定浓度糖类的培养基上，可出现第１次细胞分裂并持续分裂，１０％蔗糖加５％山梨醇是原生质体早期培养最合适的稳压剂兼Ｃ源，效果比单用蔗糖或山梨醇好．原生质体起源的愈伤组织，只有转入以３％或５％的山梨醇为Ｃ源的培养基中，才能分化茎原基并进而再生植株；转入含蔗糖的培养基，不能分化，继代数次，愈伤组织褐化．分化茎原基的愈伤组织与一般愈伤组织和褐化愈伤组织相比，其山梨醇含量和山梨醇脱氢酶的比活力，均显著升高．且愈伤组织内出现了一些结构变化的区域，这些区域的细胞没有中央液泡，只有小液泡，细胞器非常丰富．这种愈伤组织的显微结构特点与上述山梨醇代谢活跃相平行，共同构成茎原基分化的基础．     

小麦愈伤组织状态调控与原生质体培养

 愈伤组织及其细胞的状态可通过调整培养基成分来调控。一般情况下，生长素、还原态氮、KCl促进愈伤组织生长，细胞分裂素、硝态氮抑制愈伤组织生长。绝大多数易培养基因型诱导的愈伤组织往往表现为质地紧硬或外软内硬，不适于进行悬浮培养和原生质体培养。利用不同水平的2，4-D、NH#++#-4、谷氨酰胺、水解酪蛋白、KCl、KT、6-BA、NO#+-#-3等进行处理，可使不适的愈伤组织变成适宜的类型，也可使那些生长过旺而不分化的愈伤组织分化出植株。用这些方法，从6个小麦基因型的原生质体中培养出了再生植株。     

草木樨状黄芪A4转化系原生质体培养研究

建立了草木樨状黄芪A4转化系原生质体再生植株的实验体系.以草木樨状黄芪发根农杆菌A4转化系再生植物幼叶为材料,通过酶解法,游离出大量有活力的原生质体,原生质体经培养持续分裂形成了愈伤组织,并分化出再生苗.比较了不同酶解时间、培养密度和培养基对原生质体分裂和再生植株的影响.结果表明,原生质体植板密度为3×105个/mL,采用液体浅层培养,在附加了2.0mg/L 2,4-D、0.5mg/L 6-BA、0.3mol/L甘露醇和2%蔗糖的DPD培养基中,可获得最高分裂频率,达32.4%.原生质体持续分裂形成愈伤组织可高频[(91.75±3.1)%]分化出再生苗.甘露碱纸电泳和PCR分析表明,外源基因T-DNA在原生质体来源的再生植株中仍然存在.     

云南水稻品种原生质体培养研究

采用KPR和R2培养基进行水稻原生质体培养，日本晴、楚粳8号、云粳9号、大白谷和元江普通野生稻先后获得了原生质体培养的成功，除日本晴外，其余品种均为首次报道，品种间绿苗再生率有显著差异。日本晴最高，大白谷最低，同一品种不同的俞伤组织间，分化率有很大差异。有的愈伤组织极易分化出绿苗，有的不能再生出绿苗，说明分化前的预培养非常重要。N6分化培养基的再生绿苗率极显著地高于MS。配方为N6 葡萄糖20g/L 蔗糖30g/L IAA0.2mg/L 6-BA0.5mg/L Agarose-110g?L的培养基。分化率最高，按初次接种的愈伤组织块计，每块平均再生绿苗1.4苗,酶解原生质体量的多少,与愈伤组织在N6 1mg/L2,4-D的液体培养基中悬浮培养时间的长短有关,悬浮时间较长则易于获得较多的原生质体.日本晴的再生植株中,有两株多移栽到抽穗仅45d,有可能是极早良的变异株,有些植株的粒型和稃毛也有明显变异对鉴定和利用变异的植株具有现实意义.     

海岛棉胚性细胞团的原生质体游离和培养

以海岛棉无菌苗下胚轴为外植体诱导产生愈伤组织，挑选胚性愈伤组织建立悬浮培养胚性细胞系。用含有纤维素酶、半纤维素酶和离析酶的混合酶液从新海３号、新海７号和２８２这３个品种的胚性细胞悬浮培养物中游离出原生质体。原生质体用液体浅层法培养仅见再生细胞的１次分裂；用含有低融点琼脂糖的ＫＭ８Ｐ培养基进行琼脂糖珠悬浮法培养，原生质体再生细胞经几次分裂后产生再生细胞团     

普通野生稻胚性细胞悬浮系的建立及原生质体再生植株

广西普通野生稻(Oryza rufipogon)2个品种的成熟种子经54±1℃温度处理5d打破休眠后,诱导产生出愈伤组织。挑选胚性愈伤组织置于液体培养基中振荡培养。经6个月继代培养,建立起胚性细胞悬浮系。其中1个品种(No.40)的悬浮细胞经酶解游离获得大量原生质体,用琼脂糖包埋培养,2周内分裂频率达21.4％。形成的小愈伤组织经增殖后在分化培养基上再生出绿色小植株。     

从长期继代培养的胡萝卜愈伤组织原生质体获得再生小植株

从继代3年以上的胡萝卜(Daucus carota var.sativa Dc.)非胚性愈伤组织酶解分离出大量成活的原生质体,在 DPD、V—KM 和 C81V 培养基中液体浅层培养,获得微愈伤组织后,在固体 N_6和 MS 培养基上分化培养,获得再生小植株。证明长期继代培养的胡萝卜愈伤组织仍具有再生植株的能力。     

根癌农杆菌介导Ds转座因子的水稻遗传转化

以水稻品种中花１１的幼胚,成熟胚和幼惠的愈伤组织材料,经携带Ｔｉ质粒ｐＤｓ－Ｂａｒ１３００的根癌农杆菌ＥＨＡ１０５感染和共培养后,通过５０ｍｇ／Ｌ和２５ｍｇ／Ｌ潮霉素的二次筛选,结果表明：３４％经胚愈伤组织１７％成熟胚愈组织和１６．５％幼穗愈伤组织表现潮霉素抗性,这些抗性愈伤组织转入分化和再生培养基培养,获得了１４棵转基因植株,经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析,证明Ｄｓ和Ｂａｒ基因都已整合进转基因植株的     

一种简化有效的普通烟草原生质体培养方法

用不同方法进行普通烟草叶肉细胞原生质体培养,在低温（１０℃）预处理原生质体分离材料后,加厚双层培养基中的固相至固液相体积比为４：１～５：１时,有利于愈伤组织的快速形成和植株再生。     

草莓叶片愈伤组织形成及再生芽分化的组织学研究

本文将草莓品系Ｍ１４的叶片分别在培养基ＣＫ（ＭＳ＋Ｂ５）、培养基Ａ（组成为ＭＳ＋Ｂ５＋ＴＤＺ１．０ｍｇ．Ｌ－１＋ＩＡＡ１．０ｍｇ．Ｌ－１）、培养基Ｂ（组成为ＭＳ＋Ｂ５＋ＴＤＺ２．５ｍｇ．Ｌ－１＋ＩＡＡ０．１ｍｇ．Ｌ－１）中培养,对细胞的脱分化、愈伤组织的形成、叶状体的产生及再生芽分化进行组织学观察。结果表明,激素可诱导叶表皮细胞、叶肉细胞及维管束周围的其他薄壁细胞脱分化;愈伤组织就是由后两类细胞脱分化形成分裂中心,进一步发育而成的;叶状体可由表皮细胞脱分化后直接分裂形成,不经愈伤组织阶段,但更普遍的是在愈伤组织表层产生;再生芽发生于叶状体上。     

疣粒野生稻原生质体再生小植株

 以我国特有的疣粒野生稻成熟胚和幼穗作外植体诱导愈伤组织 ,挑选致密颗粒状愈伤组织建立胚性细胞悬浮系并分离原生质体 ,将原生质体固体包埋后添加液体培养基进行培养。在培养过程中调节培养体系渗透压诱导产生胚状体 ,成功得到疣粒野生稻的原生质体再生植株 ,对提高原生质体再生频率的途径进行了探讨。     

通过苹果原生质体融合获得融合体再生植株(简报)

苹果品种 Gala和富士单倍体原生质体经 PEG诱导融合 ,6 0 d左右培养产生愈伤组织 .该愈伤组织经分化诱导的再生植株 ,通过细胞学 ,同工酶和 RAPD鉴定 ,再生植株 RH- 1具有双亲共同特征为融合体植株     

软化菊苣高效原生质体培养及植株再生

为了进行体细胞杂交和基因工程改造的尝试,采用10mL酶解液处理12h,1g鲜重叶片游离出4.5~5.9×106个原生质体,生活率达78%~85%。原生质体分别用3种培养基进行培养,以软化菊苣种子无菌苗的叶片为起始材料进行了叶肉原生质体分离、培养和植株分化的研究,并建立高频率的植株再生系统。结果表明:最适合培养基为改良KMP,原生质体的分裂率和植板率分别达到48.0%和27.5%。同时对原生质体培养的时间长度与愈伤组织的胚胎发生能力及植株分化频率进行了试验比较,培养时间28~41d为最佳时间,愈伤组织的胚性(81.2%)和分化率(70.9%)最高;培养时间42~55d,胚性愈伤及植株分化的比例分别为55.0%和45.2%;培养时间56~69d,愈伤组织的胚性(22.5%)和分化率(16.5%)较差。原生质体再生植株在不含激素的1/2MS培养基上,部分植株直接生根,未生根植株转至1/2MS+IBA 0.3mg·L~(-1)+0.1%活性碳可以生根。