切除结膜结合淋巴组织鸡对新城疫疫苗点眼免疫反应 Ⅱ.组织学与免疫组织化学研究

60只 1日龄健康雏鸡随机分为 A、B、C三组。A组于 1日龄手术切除下眼睑结膜。A、B两组于 12日龄时结扎鼻泪管 ,用新城疫克隆 30苗点眼。C组为对照组。 2 3日龄分别采取其 CAL T和哈德氏腺 ,比较观察其组织细胞。结果 ,1日龄手术切除下眼睑结膜后造成鸡 CAL T缺失 ,点眼免疫后 ,哈氏腺的免疫细胞也较正常免疫鸡少 ,而正常接种 ND克隆 30 (B组 )后 ,CAL T发生早 ,生长快 ,淋巴细胞数量多 ,故本实验证实 CAL T对哈氏腺免疫细胞的数量与成分有一定的调控作用。 CAL T缺失鸡是研究黏膜免疫系统比较理想的模型     

切除结膜结合淋巴组织鸡对新城疫疫苗点眼免疫反应Ⅱ.组织学与免疫组织化学研究

60只1日龄健康雏鸡随机分为A、B、C三组。A组于1日龄手术切除下眼睑结膜。A、B两组于12日龄时结扎鼻泪管，用新城疫克隆30苗点眼。C组为对照组。23日龄分别采取其CALT和哈德氏腺，比较观察其组织细胞。结果，1日龄手术切除下眼睑结膜后造成鸡CALT缺失，点眼免疫后，哈氏腺的免疫细胞也较正常免疫鸡少，而正常接种ND克隆30（B组）后，CALT发生早，生长快，淋巴细胞数量多，故本实验证实CALT对哈氏腺免疫细胞的数量与成分有一定的调控作用。CALT缺失鸡是研究黏膜免疫系统比较理想的模型。     

切除结膜结合淋巴组织鸡对新城疫疫苗的免疫反应Ⅰ.局部与循环抗体检测

实验将 60只 1日龄健康雏鸡随机分为A、B、C 3组。A组为CALT缺失组 ,B组为免疫组 ,C组为非免疫对照组。A组于 1日龄手术切除下眼睑结膜 ,A、B两组于 1 2日龄结扎鼻泪管后进行点眼免疫接种新城疫克隆 30疫苗。2 3日龄时 ,收集A、B、C各实验组鸡的血清和泪液 ,做红细胞凝集抑制试验 (HI试验 )、酶联免疫吸附试验(ELISA)。比较观察各实验组雏鸡血清和泪液抗体HI效价与IgA、IgG、IgM含量的变化特点。结果 ,1日龄手术切除下眼睑结膜后造成鸡CALT缺失 ,CALT缺失鸡点眼免疫后 ,泪液抗体HI效价与IgA、IgG、IgM含量比免疫组雏鸡低。但对雏鸡的抗体生成的规律并不产影响。故实验证实了CALT对眼区局部抗体的产生及其种类有重要的调控作用 ,协同哈氏腺完成局部免疫的功能     

切除结膜结合淋巴组织鸡对新城疫疫苗的免疫反应I.局部与循环抗体检测

实验将60只1日龄健康雏鸡随机分为A、B、C3组。A组为CALT缺失组，B组为免疫组，C组为非免疫对照组。A组于1日龄手术切除下眼睑结膜，A、B两组于12日龄结扎鼻泪管后进行点眼免疫接种新城疫克隆30疫苗。23日龄时，收集A、B、C各实验组鸡的血清和泪液，做红细胞凝集抑制试验（HI试验）、酶联免疫吸附试验（ELISA）。比较观察各实验组雏鸡血清和泪液抗体HI效价与IgA、IgG、IgM含量的变化特点。结果，1日龄手术切除下眼睑结膜后造成鸡CALT缺失，CALT缺失鸡点眼免疫后，泪液抗体HI效价与IgA、IgG、IgM含量比免疫组雏鸡低。但对雏鸡的抗体生成的规律并不产影响。故实验证实了CALT对眼区局部抗体的产生及其种类有重要的调控作用，协同哈氏腺完成局部免疫的功能。     

接种不同剂量的新城疫疫苗对鸡免疫应答的影响

目前在我国使用的新城疫疫苗主要有Ⅰ系、Ⅱ系、F系、LaSota系（Ⅳ系）弱毒疫苗和灭活疫苗。其中Ⅳ系苗因其使用方便，免疫效果较好，引起的反应小，所以在临床上应用较多，并常以饮水免疫，但使用剂量较大。机体的免疫应答能力受抗原用量的影响，在一定的范围内随抗原用量的加大免疫效果也相应增强，但并不是抗原用量越多越好，过高的免疫剂量不但不能提高机体的免疫效果，反而会产生免疫抑制，同时也增加了经济投入。为了给临床应用剂量提供了一个参考标准，我们设计了本试验，现报告如下。     

鸡眼区相关淋巴组织对ND疫苗点眼免疫应答Ⅱ.眼区局部T淋巴细胞亚群的变化

本研究采用流式细胞仪技术对鸡眼区相关淋巴组织(HALT)在鸡新城疫疫苗点眼免疫后的局部T淋巴细胞亚群的变化进行了研究。研究发现,LaSota 系ND疫苗点眼免疫后眼区相关淋巴组织对ND疫苗可产生良好的细胞免疫应答。免疫组结膜相关淋巴组织(CALT)和哈氏腺(HG)中CD4 T及CD8 T淋巴细胞数量于首免后迅速升高。免疫期间其百分比含量明显高于非免疫组,到40 日龄时,有恢复到正常值的趋势。     

鸡眼区相关淋巴组织ND疫苗点眼免疫应答 Ⅱ.局部T淋巴细胞亚群的变化

本研究采用流式细胞仪技术对鸡眼区相关淋巴组织在鸡新城疫疫苗点眼免疫后的局部 Ｔ 淋巴细胞亚群的变化进行了研究。研究发现, Ｌａｓｏｔａ 系 Ｎ Ｄ 疫苗点眼免疫后眼区相关淋巴组织对 Ｎ Ｄ 疫苗可 产生良好的细胞免疫应答,免疫组 Ｃ Ｄ＋４ Ｔ及 Ｃ Ｄ＋８ Ｔ 淋巴细胞数量于点眼免疫后迅速升高,其百分比含量明显高于非免疫组。     

接种不同剂量的新城疫疫苗对鸡免疫应答的影响

采用不同剂量的鸡新城疫La系疫苗免疫鸡,经HI实验检测血清抗体效价,结果显示当免疫剂量为3倍时HI效价最高。     

接种不同剂量的新城疫疫苗对鸡免疫应答的影响

鸡新城疫,也称亚洲鸡瘟,是由新城疫病毒引起的一种急性、热性、高度接触性传染病。以呼吸困难、下痢、神经机能紊乱、黏膜和浆膜出血为特征。在我国,该病是所有鸡病中危害最严重的一种,造成很大的经济损失。对鸡新城疫采取的综合防治措施中,施行合理的免疫接种是预防鸡新城疫的重要手段。我国目前使用的新城疫疫苗有Ⅰ系、Ⅱ系、Ⅲ系和Ⅳ系4种,大多是弱毒疫苗。Ⅰ系疫苗是一个中等毒力的疫苗,用于经过两次弱毒力的疫苗免疫后的鸡或2月龄以上的鸡。此苗的优点是产生免疫力快(3~4 d),免疫期长(1年以上),在发病地区常用来作紧急预防接种。此次…     

结膜相关淋巴组织和哈氏腺免疫协同关系的研究Ⅰ．结膜相关淋巴组织缺失对哈氏腺点眼免疫应答的影响

采用ＥＬＩＳＡ、免疫组织化学方法、手术切除结膜相关淋巴组织（Ｃｏｎｊｕｎｃｔｉｖａ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ Ｌｙｍｐｈｏｉｄ Ｔｉｓｓｕｅ，ＣＡＬＴ）法对结膜相关淋巴组织和哈氏腺（Ｈａｒｄｅｒｉａｎ Ｇｌａｎｄ，ＨＧ）在点眼免疫应答过程中的相互协同关系进行了研究。研究发现，采用外科手术于１日龄切除结 膜相关淋巴组织后切除组点眼免疫后泪液中ＮＤＶ－特异性ＩｇＡ、ＩｇＭ型抗体滴度及哈氏腺中ＩｇＡ、ＩｇＭ     

含粘膜佐剂的鸡新城疫疫苗诱导雏鸡非特异性免疫应答的研究

为研究分析重组大肠杆菌不耐热肠毒素（labile enterotoxin,LT）作为粘膜佐剂,配伍鸡新城疫疫苗的冻干样品对免疫鸡非特异性免疫应答的影响,在前期已经构建的LTR72/G192基础上,选择2、4μg LTRG蛋白作为每羽份疫苗添加量,及降低新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV）50%抗原量等配伍条件。按照生产条件制备冻干疫苗,进行雏鸡免疫试验,免疫后24、48、72 h采集脾脏、胸腺淋巴结,检测几种非特异性细胞因子表达水平。结果表明：IL-6、INF-γ水平在各疫苗免疫后24h即升高,48 h达最高值;添加2、4μg LTRG蛋白的NDV疫苗组IFN-β、TNF-α水平在48 h左右显著升高,其中含4μg LTRG疫苗组与其他组差异具有极显著统计学意义（P〈0.01）;IL-6、IFN-γ转录水平有所增强,但各组间差异不具有显著统计学意义（P〉0.05）,72 h左右几种细胞因子水平均迅速下降,与NDV疫苗接种组相近。由此可见,LTRG能辅助抗原诱导免疫雏鸡的非特异性免疫应答,有利于对感染病毒的清除。     

CpG寡核苷酸增强鸡新城疫疫苗免疫效力的研究

为了探讨CpG寡核苷酸（CpG oligonucleotide,CpG ODN）对鸡新城疫疫苗免疫效力的影响,将CpG2007与鸡淋巴细胞共孵育,测定淋巴细胞增殖率,结果发现CpG2007对鸡淋巴细胞具有显著的刺激活性。将CpG2007与不同浓度的新城疫抗原混合,制备灭活疫苗,免疫健康雏鸡。分别于免疫后不同时间采血,测定抗体效价和细胞因子表达量,并进行攻毒保护试验。结果发现,添加CpG ODN佐剂的试验组均比对应相同抗原剂量的免疫对照组的抗体水平高,产生抗体速度快;抗原剂量降低10倍的佐剂试验组与高抗原剂量免疫对照组抗体水平和攻毒保护率均相当,表明CpG ODN能显著增强新城疫疫苗的免疫效力,能促进机体产生更强烈的免疫应答,是有效的疫苗佐剂候选物质。     

鸡新城疫消化道免疫的研究 Ⅱ、幼雏消化道免疫组织化学及功能研究

本实验采用免疫组织化学方法及酶联免疫吸附试验(ELISA)对鸡新城疫弱毒活苗消化道直接免疫后,对其免疫机制和免疫效果进行了研究。 7日龄前,雏鸡肠道无免疫球蛋白G阳性细胞出现。7日龄后出现并缓慢上升,第二次免疫(嗉囊免疫、饮水免疫)后增长明显,出现峰值。免疫组与对照组差异显著,表明雏鸡胃肠道具有保持产生局部抗体的功能,并且血清IgG抗体效价的消长与之呈现相关免疫状态。胃肠道T淋巴细胞在第一次免疫(嗉囊免疫、饮水免疫)后10天和二免后5～10天出现峰值,然后下降并稳定在一定水平,证明细胞免疫参与鸡新城疫消化道免疫。     

感染鸡贫血病毒雏鸡接种新城疫疫苗后局部粘膜免疫功能的变化

雏鸡1日龄感染鸡贫血病毒（CAV），8日龄接种Lasota疫苗，以未感染免疫雏鸡为对照，于免疫后7、14、28d检测其哈德尔腺和盲肠扁桃体T细胞及IgG^ 、IgM^ 、IgA^ 抗体生成细胞数量，泪液、气管液、肠液、胆汁中IgG、IgM、IgA含量以及泪液、胆汁HI抗体滴度的动态变化。揭示了感染CAV雏鸡接种ND疫苗免疫后哈德尔腺、盲肠扁桃体的T细胞和IgG^ 、IgM^ 、IgA^ 抗体生成细胞数量，泪液、气管液、肠液、胆汁中免疫球蛋白IgG、IgM、IgA含量以及泪液、胆汁HI抗体滴度，均较未感染免疫雏鸡明显减少。表明眼部、呼吸道和消化道局部粘膜免疫防御能力减弱。     

鹌鹑对新城疫病毒的易感性试验

用从新城疫病死鹌鹑中分离的新城疫病毒(NDV)株(QNDV-1)和鸡新城疫毒株(F_(48)E_8),对5日龄、10日龄、25日龄、35日龄和70日龄等不同日龄鹌鹑进行了感染试验,并用15日龄鹌鹑做了呼吸道、肌肉注射、皮下注射、脑内注射、静脉注射和消化道等不同途径的感染试验。结果表明:供试不同日龄鹌鹑均可被感染发病,并出现和自然病例同样的症状或死亡,随着日龄增长,死亡率有降低趋势,70日龄鹌鹑(成年产卵)出现同自然病例同样的产卵量下降和产出异常卵现象;不同途径均可使鹌鹑感染发病或死亡,其中以脑内注射和静脉注射所表现的发病或死亡最为急剧;从病死鹌鹑中可重新收回到新城疫病毒,发病耐过鹌鹑可产生特异性抗体。     

新城疫病毒特异性糖蛋白基因探针的制备及应用

应用ＲＴ－ＰＣＲ获取新城疫病毒Ｆ４８Ｅ８株的部分囊膜糖蛋白基因片段。扩增产物经琼脂糖凝胶电泳分析,长为９２６ｂｐ,与预期结果相符;将该基因片段定向克隆入质粒载体ＰＵＣ１９只,得到重组质粒Ｐ９２６,酶切分析结果与已发表的ＮＤＶ毒株酶切位点一致。     

宿主细胞磷酸激酶在新城疫病毒感染中的作用

为探讨磷酸化通路在新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV）感染中的作用,使用多种蛋白磷酸激酶抑制剂和激活剂预处理细胞,比较处理后NDV在细胞上生长状况的差异。结果显示NDV在PKC蛋白激酶抑制剂处理的细胞上的生长受到抑制,这种抑制作用能够被PKC蛋白激酶激活剂中和,而PKA蛋白激酶抑制剂和p38MAPK蛋白激酶抑制剂对其影响不大。通过PKC蛋白激酶抑制剂的细胞毒性试验证实,这种抑制作用不是由于药物对细胞的毒性或者因药物加入而改变培养基pH值而造成的。病毒在staurosporine处理的细胞上的生长曲线试验显示,浓度在20~200 nmol/L能对病毒感染产生抑制作用,并且药物浓度越高,上清中病毒的滴度相对越低。本研究结果表明PKC磷酸化通路在新城疫病毒的感染过程中发挥了重要作用。     

奶牛离体PBMC和体内免疫应答的个体差异及其机理的研究

检测１５头奶牛离体外周血单核细胞和体内产生抗体免疫应答的结果表明，１．０μｇ／ｍｌ的ＰＷＭ或ＳＥＢ使ＰＢＭＣ增殖达最高值，但在分泌Ｉｇ中却表现出不同作用，还发现在群体内离体细胞增殖强度的变异程度小于分泌的Ｉｇ量的变异程度。