DNA指纹图谱法在动物遗传分析中的应用及操作方法

ＤＮＡ指纹图谱法在动物遗传分析中的应用及操作方法黄晓东，徐士清，王维洪（浙江省农业科学院畜牧兽医研究所）１ＤＮＡ指纹图谱法（ＤＮＡｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｉｎｇ）的基本概念在真核生物的染色体基因组中普遍分布着一些高可变区（ＨｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅＲｅ...     

用质粒DNA指纹图谱法分析猪水肿病大肠杆菌的流行病学特征

从广西各地病死猪器官、组织中分离到17株细菌,经细菌形态、培养特性及生化反应鉴定为大肠杆菌。作本动物回归试验、小白鼠致病性试验和溶血试验结果表明,全部为致病性大肠杆菌。血清定型鉴定结果发现,菌株血清型分布不规律。17株致病性大肠杆菌的质粒指纹图谱显示:来源于不同猪群的菌株GP20-3和GP25-1以及GP18-9和GP8-3分别具有相同的质粒图谱,说明发病猪群传染源的首发菌相同。所有菌株都含有1条大小相同的质粒带,广西流行的猪水肿病主要是由在遗传学上具有高度同源相关性的大肠杆菌的广泛流行传播所引起。菌株GP18-9和GP8-3的质粒指纹图谱相同,但它们的血清型却不一致的现象,可作为自然条件下,同一质粒在不同血清型大肠杆菌中扩散转化的一个生物学依据。     

6株副猪嗜血杆菌基因组DNA的PCR指纹图谱研究

根据肠道菌基因闻重复一致序列，设计了一对特异性引物，采用ERIC-PCR和RAPD技术，研究了副猪嗜血杆菌6个分离菌株的指纹图谱和DNA多态性。结果表明，6个分离株的PCR指纹图谱与15个标准血清型指纹图谱相比较可分辨出4种血清型；6个分离株的RAPD研究结果均表现出多态性。有意义的是，6个菌株的多态性DNA片段也能明显将其分为4种类型的副猪嗜血杆菌，与特异性引物PCR结果相一致。该研究可作为流行病学调查和该菌的分子分型快速诊断方法的基础。     

海南岛红毛丹种质资源DNA指纹图谱构建

分别利用筛选出的多态性高、谱带清晰的8条ISSR标记和18对SRAP标记对海南岛69份红毛丹种质资源进行PCR扩增,8条ISSR引物共检测到425个多态性条带,其中品种(系)特异条带47个,平均位点多态性信息含量(PIC)值为0.928,可鉴别的种质资源数25～67份;18对SRAP引物共检测到894个多态性条带,其中品种(系)特异条带69个,平均位点多态性信息含量(PIC)值为0.936,可区分的种质资源数为17～63份。综合各项指标利用ISSR16和ISSR5引物21个条带用于构建红毛丹种质DNA指纹图谱,该图谱可有效区分69份红毛丹种质资源。同时该DNA指纹图谱还可为下一步红毛丹种质资源鉴定、利用、品种权保护和分子育种等提供了理论依据。     

地方鸡种微卫星DNA指纹图谱的建立与应用

品种资源是遗传多样性的载体，是遗传育种的重要基础。我国所拥有的地方鸡种资源在世界上是独一无二的，有的品种还具有独特的基因类型。既有体型较小的茶花鸡、藏鸡，也有体型较大的大骨鸡；既有丝毛乌皮乌肉乌骨具有药用保健功能的丝羽乌骨鸡，也有用于观赏娱乐的斗鸡；     

副猪嗜血杆菌ERIC-PCR指纹图谱多样性研究

建立了副猪嗜血杆菌ERIC-PCR分型技术,并应用于临床分离菌株的流行病学调查。试验结果表明,47株副猪嗜血杆菌产生28种不同的指纹图谱,分离自同一猪场和相同血清型的菌株表现出不同的指纹图谱,不能进行血清分型的副猪嗜血杆菌应用该方法可得到充分区分,证实副猪嗜血杆菌ERIC指纹图谱存在丰富的多样性,ERIC-PCR方法是副猪嗜血杆菌流行病学规律分析的有效方法。     

柱花草DUS测试标准品种DNA指纹图谱构建

为建立柱花草(Stylosanthes spp.)DUS测试标准品种DNA指纹图谱数据库,实现柱花草品种的快速、准确鉴定,利用筛选到的25个SSR标记对15份柱花草DUS测试标准品种进行了遗传多样性分析及DNA指纹图谱构建。结果表明,25个SSR标记共产生132个等位基因,每个标记可产生3~9个等位基因,平均5.280个;各SSR标记的多态性信息含量为0.393~0.847,平均为0.638。利用这25个SSR标记构建的指纹图谱能有效区分15份柱花草DUS标准品种,并为每份标准品种建立了QR二维码图谱,为SSR标记技术在柱花草DUS测试中的应用提供依据。     

DNA指纹技术用于湖北白猪群体遗传结构的研究

本文通过人源小卫星探针３３．１５和３３．６,分析长白猪（２０头）、大约克（１４头）、杜洛克猪（２０头）、湖北白猪Ⅲ系（２１头）及Ⅳ系（２１头）、通城猪（１９头）的ＤＮＡ指纹图谱。结果表明：（Ｆ１）在２．５￣２３．０ｋｂ之间,探针３３．１５得到平均指九分别为１１．００、１２．２０、１０．３６、１２．７６、１０．４７、９．７５;探针３３．６的结果分别为９．８９０、９．００、１１．００、８．１８、１０．     

猪ESR基因一个外显子片段的克隆与序列分析

参考人、鸡、鼠的ESR基因序列，设计一对引物，采用PCR技术扩增出猪ESR基因一段DNA片段，将该片段克隆到pGEM-T Easy质粒中，重组质粒用PCR扩增和酶切分析进行阳性克隆鉴定，然后测定核苷酸序列，并推导其氨基酸序列。将测定的猪ESR基因的部分序列（332bp)与人、鼠、鸡的序列进行比较，结果表明：猪的核苷酸和氨基酸序列与人、鼠、鸡相比，同源性分别为90．06％和86．36％，85．54％和88．18％，74．10％和71．82％，显示了强的保守性，猪的核苷酸序列与人、鼠、鸡相比存在着4处特有变异，氨基酸序列aa25-30存在高变异区。     

家猪毛色的基因定位,染色体标记和遗传规律的研究

为验证猪的黑、白毛色基因定位于８号染色进行并与核仁组织者区（ＮＯＲ）连锁的研究结果，和进一步研究猪的毛色遗传规律，测定了８６头不同毛色的长白×枫泾猪（长枫猪）Ｆ２代的８号染色体上Ａｇ－ＮＯＲ的分布，分析了长枫Ｆ２、Ｆ３、Ｆ４仔猪的毛色分离，用已知８号染色体上Ａｇ－ＮＯＲ分布特点的不同毛色的长枫猪进行交配试验，记录了２３窝（白猪×白猪：８窝：花猪×黑猪：５窝；黑猪×黑猪：５窝；花猪×花猪：５窝）２２     

应用DNA指纹图谱法对湘白猪群体遗传结构的研究

本文采用Ｊｅｆｆｒｅｙｓ小卫星探针３３．６和３３．１５检测了４个湘白猪品系（Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ）和５个亲本品种（大约克、长白、杜洛克、大围子、沙子岭）的ＤＮＡ指纹图谱。根据指纹带型计算了每个群体的相似系数、平均等位基因频率和最低杂合率。４个湘白猪品系的分析结果表明：湘白猪各品系内的相似系数为０．４５－０．４９，接近于欧美引进品种长白猪（０．４８－０．５０），具有较好的遗传纯合性。根据９个品种（系）的群     

香猪等五品种猪的C—带和银染带的分析和比较

本文分析和比较了香猪、北京黑、长白、长北和社长北杂种的C-带和银染带。指出了家猪有可能存在Lin所没有揭示的异染质。得出了它们的NORs平均值分别为3.96、3.88、2.03、2.95和3.00。NORs联合率平均值为3.00％,但香猪高达7.31％。对香猪的结果分析表明,香猪具有以下细胞学特征:(1)染色体Y长;(2)染色体Y长臂C-带浅染;(3)D组染色体C-带具有极大的多态性;(4)染色体2～4之一的长臂有时出现C-带;(5)染色体NORs联合率高。     

提取家蚕肠道微生物总DNA的2种方法的比较研究

为寻找提取家蚕中肠道微生物总DNA的方法,比较研究了2种方法:①直接提取家蚕中肠道内容物的总DNA,再选择性研究其中来源于微生物的DNA;②先分离家蚕中肠道的微生物,再提取其总DNA.结果表明,方法②所得到的DNA数量较少,但纯度较高;方法①的数量多,种类齐,但杂质多.2种方法分别适合于不同的研究目的.     

家畜近亲繁殖群体的遗传组成分析

本文推导出了家畜近亲繁殖群体遗传组成的通用公式，据以计算在任何规则与不规则近亲繁殖体系下任意世代家畜群体涉及多个不连锁位点的基因型频率、表型频率及同一表型内不同基因型频率，研究结果有助于家畜交育种，近交系选育中质量性状的选择，确定适宜的近交程度，群体规模及选择的最佳世代。     

中国部分猪种同种异名问题的研究 Ⅰ.中南及华东六省区两头乌猪及小耳猪遗传关系的研究

对我国中南及华东六省区11地方猪品种(系)1171头猪进行的血清前白蛋白、后白蛋白、转铁蛋白以及铜蓝蛋白多态性实验结果表明,主要饲养于湖北省的通城猪、监利猪,湖南省的沙子岭猪,江西省的赣西两头乌猪、蒙山猪,广西壮族自治区的东山猪以及浙江省的金华猪Ⅰ系、Ⅱ系、Ⅲ系各两头乌猪品种(系)问存在着紧密的遗传关系;同样,4个血清蛋白多态位点的实验结果也表明了饲养于广东及广西二省区的广东小耳猪和陆川猪有着密切的遗传关系。     

MOET核心群内个体遗传评定精确性的模拟分析

在ＭＯＥＴ核心群育种方案中，个体遗传评定的准确性主要取决于全同胞姐妹数和核心群大小。本文通过计算机模拟考察了不同的全面胞姐妹数和核心群规模对个体遗传评定的准确性的影响。结果表明，在核心群规模一定的情况下，个体遗传评定的准确性随着全同胞姐妹数的增加而上升，但上升的幅度逐渐减小，公牛遗传评定的准确性的上升幅度大于母牛。在全同胞姐妹数一定时，个体遗传评定的准确性也随着群体规模的扩大而上升，但上升幅度较小     

奶牛体型线性性状的遗传因子分析

本研究对北京荷斯坦牛３８头公牛的２０３５头女儿１５个线性体型性状（评分１￣５０分）１９８８年至１９９２年的评定资料进行了主成分分析。结果表明：由遗传相关矩阵得到的前５个主因子占全部变异的８９．６％。主成分和因子分析对于阐明体型性状与牛群泌乳寿命和生产变量之间的关系是有用的。