马铃薯黑胫病生防菌株的筛选与鉴定

利用本实验室前期分离保存的58株芽孢杆菌进行马铃薯黑胫病生防菌株的筛选与鉴定,旨在为内蒙古地区马铃薯黑胫病的防治探索新方法。经平板初筛,共有17个菌株对马铃薯黑胫病菌(Pectobacterium atrosepticum)具有拮抗活性,占供试菌株的29.31%;进一步复筛获得拮抗效果较好的5个菌株,分别为Chi8-7、Genyun4-4、Gen7-4、Jing6-7、S-7。其中,菌株Genyun4-4的抑菌效果最为明显,抑菌圈宽度达到20.7 mm,显著高于其他供试菌株处理,且生物活性测定结果也表明该菌株的抑菌效果较好。通过形态学观察、分子鉴定和生理生化特征测定,菌株Chi8-7鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)、Genyun4-4鉴定为枯草芽孢杆菌(B. subtilis)、菌株Gen7-4、Jing6-7和S-7均鉴定为甲基营养型芽孢杆菌(B. methylotrophicus)。     

进境油菜籽中黑胫病菌和茎基溃疡病菌的检测

为准确鉴定从进境澳大利亚油菜籽样品中分离的真菌分离物,利用形态学特征、PCR检测、序列分析以及致病性测试等方法对分离物6382-43和6382-51进行了鉴定试验。结果表明,分离物6382-43的形态特征和油菜茎基溃疡病菌Leptosphaeria maculans相似,菌丝生长较慢,菌落边缘不规则,不产生色素。油菜茎基溃疡病菌特异性引物LmacF/LmacR检测为PCR阳性;ITS区序列和油菜茎基溃疡病菌的序列相似性为99.8%;接种幼嫩油菜子叶产生油菜茎基溃疡病的典型症状。分离物6382-51的形态特征和油菜黑胫病菌L.biglobosa相似,菌丝生长较快,菌落边缘规则,产生色素;油菜黑胫病菌特异性引物LbigF/LmacR检测为PCR阳性;ITS区序列和油菜黑胫病菌的序列相似性为100%;接种幼嫩油菜子叶产生油菜黑胫病的典型症状。根据分离物的形态特征、PCR检测结果、序列分析以及致病性测试结果,将进境澳大利亚油菜籽样品中的真菌分离物6382-43和6382-51分别鉴定为油菜茎基溃疡病菌Leptosphaeria maculans和油菜黑胫病菌L.biglobosa。     

烟草黑胫病拮抗根际芽胞杆菌FB-16的筛选鉴定及其抑菌活性

为获得对烟草黑胫病有较强生防效果的拮抗细菌,从健康烟草根际采集30份土壤样品,分离纯化得到347株细菌,经病原真菌定向筛选后得到1株对烟草黑胫病菌等病原真菌拮抗活性较好的细菌FB-16,其对烟草黑胫病菌的抑菌带宽为23mm。采用菌丝生长速率法、作用机制试验、温室防病试验测定FB-16的抑菌作用,并通过形态学特征、生理生化特征及16S rDNA序列分析对菌株进行鉴定。结果显示,菌株FB-16发酵液对烟草黑胫病菌菌丝生长抑制率为95.96%;其代谢产物对烟草黑胫病菌菌丝有致畸作用;菌株FB-16为解淀粉芽胞杆菌Bacillus amyloliauefaciens(Gen-Bank登录号为JN245982);饱和度25%硫酸铵获得的抑菌物质对烟草黑胫病菌的抑菌活性较高,抑菌圈直径达42.00 mm;FB-16活性产物处理的烟草植株在接种烟草黑胫病菌7天后的防治效果为69.96%。表明菌株FB-16在烟草黑胫病生物防治中具有潜在的利用价值。     

马铃薯黑胫病田间防治药剂筛选

本试验通过药剂浸种法,研究了20%噻菌铜悬浮剂、30%琥胶肥酸铜悬浮剂等6种不同药剂对马铃薯黑胫病的防治效果,结果表明:在马铃薯播种前用20%噻菌铜悬浮剂600倍和30%琥胶肥酸铜悬浮剂400倍浸种对马铃薯黑胫病有较好的防效,两处理的防效均在75%以上。通过药剂浸种能有效降低黑胫病菌对马铃薯薯块的侵染,提高出苗率,降低田间病株率,对马铃薯黑胫病起到较好的防治作用,在生产中值得推广应用。     

值得关注的检疫性线虫——较小根结线虫

较小根结线虫(Meloidogyne minor)是一种对马铃薯及草坪草有极大破坏力的检疫性有害生物。该线虫在欧洲和美洲发生严重,我国没有分布。本文介绍了该线虫的形态学鉴定特征和生物学特性等内容,为口岸检疫鉴定提供参考。     

内蒙古马铃薯黑胫病病原菌的分离和鉴定

 马铃薯是我国的第四大主粮。内蒙古是我国最大的马铃薯生产基地,马铃薯产业是当地农民收入的主要来源。2017年8月,内蒙古锡林郭勒盟部分马铃薯田块发生了一种细菌性黑胫病,发病面积约为200亩,发病率约为20%。发病初期,植株的茎基部变色、发黑,伴有臭味,严重时茎秆腐烂,植株死亡。为明确该地区马铃薯细菌性黑胫病的病原菌种类,本研究对该病原菌进行了分离,并利用生理生化测定,Biolog分析和分子生物学手段将该病原菌鉴定为胡萝卜软腐果胶杆菌巴西亚种(Pectobacterium carotovorum subsp. brasiliense)。据以往报道,我国马铃薯黑胫病主要由黑腐果胶杆菌(P. atrosepticum)和胡萝卜软腐果胶杆菌胡萝卜亚种(P. carotovorum subsp. carotovorum)两种病原菌引起,本研究是P. carotovorum subsp. brasiliense引起马铃薯黑胫病在国内的首次报道。     

拮抗细菌B8对烟草黑胫病菌的抑制作用及其菌株鉴定

从烟草根际土壤中分离到对烟草黑胫病菌及其它植物病原菌具有抑制作用的菌株B8,平板对峙培养抑菌带内菌丝畸形、原生质凝集或外渗。其发酵原液和发酵液的无菌滤液均能抑制烟草黑胫病菌和蜡状芽孢杆菌;离体叶片接种法测定其发酵液对烟草黑胫病的防效,结果表明预防作用达100%。室内盆栽试验表明B8菌株发酵液对烟草黑胫病的预防作用可达78.1%,优于治疗作用。该菌菌体杆状,芽孢侧生、椭圆形,经形态学、生理生化性状和16S rDNA序列测定,将其鉴定为侧孢短芽孢杆菌。     

烟草黑胫病菌致病性分化和烟草品种的抗病性差异

用游动孢子浸根接种法对我国主产烟区的117个烟草黑胫病菌(Phyto-phythora parasitica var.nicotianae)致病性测定结果表明，黑胫病菌茵株问致病性存在明显差异，病情指数范围4．66—84．30，强、中和弱致病性菌株各占11．1l％、58．97％和29．91％。对国内主要的59个烟草品种经室内和大田的抗病性鉴定表明，目前尚没有抗黑胫病菌的免疫品种，但不同烟草品种抗性差异明显，其中Coker371G、NC82、K346和单育三号等品种有较强的抗病性，且室内鉴定与大田鉴定结果基本一致。     

广东马铃薯黑胫病的病原鉴定

 通过对分离自马铃薯黑胫病的病原菌在选择性CVP培养基上菌落形态观察、致病性测定及16S rDNA序列比较,鉴定出引起广东省冬种马铃薯黑胫病的病原为γ-变形菌门肠杆菌科果胶杆菌属黑腐果胶杆菌(Pectobacterium atrosepticum)。生理生化试验表明,该病原菌菌株不能在37℃生长,能使明胶液化,具有运动性、耐盐性(5％NaCl),对红霉素不敏感;过氧化氢酶和蔗糖还原试验反应均为阳性,氧化酶、吲哚产生和磷酸酶活性试验均为阴性;可利用乳糖、麦芽糖、棉籽糖、蜜二糖、纤维二糖、柠檬酸盐和α-甲基酮葡萄糖苷,不能利用山梨醇、d-阿拉伯糖和丙二酸盐。研究结果可为广东冬种马铃薯黑胫病的综合防治提供科学依据。     

进境荷兰风信子种球中马铃薯黑胫病菌的分离鉴定

从进境荷兰风信子种球的软腐组织处分离到1株菌株5318,对菌株进行菌落形态观察、Biolog测定、PCR检测、序列比对、烟草过敏性实验和致病性测定。试验结果表明,菌株5318在NA培养基上菌落淡黄色,煎蛋状。Biolog测定的结果表明,菌株5318为Dikceya sp.。利用马铃薯黑胫病菌(Dickeya solani)特异性引物ds-f/r和探针ds-p对菌株5318的基因组DNA进行扩增,结果为阳性。菌株5318的rec A的序列与Genbank中D.solani的rec A序列(CP015137,KM405241)相似性为100%。基于dna X序列构建的系统进化树显示,菌株5318与D.solani聚在同一分支,亲缘关系最近。接种烟草叶片产生过敏性反应。创伤接种马铃薯幼苗、风信子幼叶,接种组织处出现典型软腐症状。根据以上测试结果,将菌株5318鉴定为马铃薯黑胫病菌(Dickeya solani)。     

从进口废钢船携带的马铃薯中截获两种检疫性病害

1989年9月20日福建省轮船总公司从香港建兴航务企业有限公司进口一艘“金湖”号轮废钢船,该船抵达马尾港,我所立即派员登轮实施检疫,经查发现船上食品库中储有马铃薯30kg,将其截留带回逐个检查。在实验室制片镜检,根据病菌形态特征,鉴定为马铃薯粉痂病和马铃薯环腐病。因此     

拮抗放线菌JD211的抑菌活性及其鉴定

本实验室从江西庐山珙桐树中分离筛选出的一株拮抗放线菌,编号为JD211。为明确放线菌JD211菌株在植物病害生物防治中的应用潜力,采用菌丝生长速率法测定其抑菌作用,通过多相分类法研究其分类地位。结果表明：JD211的粗提物可显著抑制水稻纹枯病菌、稻瘟病菌、烟草黑胫病菌、根霉、胶孢炭疽病菌、犁头霉、西瓜枯萎病菌等真菌的生长,其中对稻瘟病菌、烟草黑胫病菌等植物病原真菌的相对抑制率高达90％以上。根据形态特征、培养特征、生理生化特征及16SrDNA序列分析结果,将菌株JD211初步鉴定为奈良链霉菌（Streptomyees naraensis）。     

温度对烟草黑胫病菌致病力及代谢表型的影响

为揭示温度对烟草黑胫病菌Phytophthora nicotianae致病力及代谢表型的影响,采用菌丝生长速率法和离体叶片法分别测定不同温度下烟草黑胫病菌的生长速率和致病力,同时采用Biolog代谢表型技术测定其在20、27、30和35℃下的渗透压和pH代谢表型。结果表明,烟草黑胫病菌在21~35℃范围内生长良好且具致病力,30℃时生长速率最快,为17.72 mm/d,30℃和35℃时致病力较强,叶片接种烟草黑胫病菌后24 h内便出现病斑,随温度升高病害的潜伏期缩短。温度影响烟草黑胫病菌的渗透压和pH适应性;27℃和30℃时烟草黑胫病菌的渗透压适应范围最广,其次为21℃,35℃时烟草黑胫病菌渗透压适应范围最窄;在20、27和30℃时,烟草黑胫病菌在pH 5.0~10.0范围内可正常代谢,在35℃时pH代谢范围为5.5~10.0。     

福建省马铃薯黑胫病病原菌的鉴定及其遗传多样性分析

为明确福建省马铃薯黑胫病病原菌的种类、分布情况及群体遗传特性,通过16S rDNA序列分析法对分离自福建省各马铃薯产区的90株黑胫病病原菌进行鉴定,并利用细菌基因组重复序列PCR(repetitive sequence-PCR,Rep-PCR)方法分析福建省不同地区的马铃薯黑胫病病原菌群体的遗传变异情况。结果表明,经16S rDNA序列分析鉴定,引起福建省马铃薯黑胫病的病原菌包括黑腐果胶杆菌Pectobacterium atrosepticum、胡萝卜果胶杆菌巴西亚种P. carotovorum subsp. brasiliense、胡萝卜果胶杆菌胡萝卜亚种P. carotovorum subsp. carotovorum、帕曼蒂氏果胶杆菌P. parmentieri、P. polaris和达旦提狄基氏菌Dickeya dadantii。对90株菌株的Rep-PCR检测得到47多态性条带条,多态性比率为100.00%。按采集地区将菌株划分为8个群体,其等位基因数平均为1.48,有效等位基数平均为1.30,Nei’s基因多样性指数平均为0.17,Shannon信息指数平均为0.26,多态...     

一株烟草黑胫病高效拮抗菌的筛选、鉴定及生防潜力评价

采用稀释涂布平板法、对峙培养法和牛津杯法从烟草黑胫病土壤中分离和筛选出21株对烟草黑胫病有拮抗作用的细菌,其中,XCS007菌株拮抗作用最明显,运用微观形态学、生理生化特征及16Sr DNA基因序列鉴定其为一株铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)。菌株XCS007菌液及其粗提物对烟草黑胫病病菌菌丝的抑制率分别是91.80%和97.11%;盆栽试验结果显示,其防治效果分别是83.18%和83.55%;大田试验结果显示,其防治效果分别达到78.64%和79.54%。     

进境大麦中病原真菌的分离与鉴定

对来源于乌克兰、法国和加拿大的大麦所携带的病原真菌进行了分离,并通过形态学观察和分子生物学手段对分离物进行了鉴定。共分离出51个真菌菌株,经鉴定,共有13个菌种,其中检疫性真菌1种,为麦类壳多胞斑点病菌（Stagonospora avenae）;非检疫性真菌12种。侵染链格孢菌（Alternaria infectoria）的分离率最高,达40%,其次是互隔链格孢菌（Alternaria alternata）、大麦网斑病菌（Pyrenophora teres）、麦根腐平脐孺孢菌（Bipolaris sorokiniana）、梨孢镰刀菌（Fusarium poae）、大麦黑变病菌（Cladosporium herbarum）等。该鉴定结果对海关工作人员开展大麦真菌病害的检疫鉴定,防止检疫性有害生物传入,保护我国农林经济生产安全与生态安全具有重要意义。     

冷杉枯梢病菌

冷杉枯梢病菌(Gremmeniella abietina(Lagerb.)M.Morelet)是我国进境植物检疫性有害生物,中国无分布。本文从分布、寄主、危害、形态特征、生物学特性、检疫及鉴定方法等方面对其进行综述,为进一步研究、检疫和防范该病菌提供参考。     

马铃薯早疫病菌的分子鉴定与田间早期诊断

马铃薯早疫病由茄链格孢Alternaria solani引起,通常导致产量损失达30％以上[1-2].目前关于马铃薯早疫病菌的鉴定主要是基于形态特征进行.然而,该病菌在离体培养时不易产孢,增加了鉴定的难度.马铃薯早疫病的早期诊断在早疫病防控中占有重要地位,建立马铃薯早疫病菌的分子鉴定和早疫病的田间早期诊断技术将有助于防控措施的制定.本研究选择ITS序列作为早疫病菌分子鉴定的目标区域,通过ITS序列分析设计马铃薯早疫病菌的特异性引物,建立早疫病菌的分子鉴定技术并探索早疫病早期诊断技术.     

马铃薯坏疽病Phoma foveata生防菌的筛选及鉴定

采用平板对峙法筛选到了马铃薯坏疽病的生防菌 ZA1,其对马铃薯坏疽病菌的抑制率为71.83%;通过形态特征和生理生化测定,结合16S rDNA和gyrB基因序列同源性分析,鉴定该菌为莫海威芽孢杆菌Bacillus mojavensis。抑菌谱测定表明,菌株ZA1对番茄早疫病菌Aalternaria solani、马铃薯褐腐病菌Stysanus stemonitis、马铃薯干腐病菌Fusarium oxysporum和马铃薯炭疽病菌Colletotrichum coccodes的抑制率分别达64.30%、41.05%、61.42%和74.92%。在贮藏库中进行10倍液喷雾,对马铃薯坏疽病的防效达64.31%。     

进境哈萨克斯坦油葵中向日葵黑茎病菌的检疫鉴定

依据出入境检验检疫行业标准SN/T 3174-2012,对新疆口岸进境的哈萨克斯坦油葵中的向日葵黑茎病菌进行检疫鉴定。挑取油葵样品中的可疑病种子和植株残体作为实验材料,分别提取其DNA,用向日葵黑茎病菌特异性检测引物LEPB/LEPF对挑取的样品进行PCR检测初筛,初筛结果阳性者,进行病原分离培养。对分离获得的阳性纯培养菌株的菌落、孢子形态进行观察,PCR检测及致病性测定,最终确定其为向日葵黑茎病菌。本研究从进境哈萨克斯坦油葵中分离到检疫性病原菌,新疆周边口岸应进一步加强疫情监测与调查。