主要农作物种子转基因检测方法及应用

每年我国进口大量的转基因大豆、玉米等农产品,目前也正在研发多种转基因农作物新品种。按照我国和国际有关法律法规,需对农作物的种子和加工制品进行转基因成分检测,确定为非转基因产品或将转基因成分标识后才可以进入市场流通,对于正在研发的转基因新品种也需通过检测进行监管。对我国主要农作物种子转基因检测方法的实际应用进行了综述,包括种子产品抽样、核酸定性、定量检测(通用元件检测、品系特异性检测等)、蛋白定性检测(试纸条快速检测)等方法。旨在为有关农作物种子生产、经营、产品加工和管理及研发工作者提供相关技术信息。     

主要农作物种子中转基因成分筛查策略

在农作物种子监管中,大量的样品需要进行转基因成分检测,建立快速、准确、低成本的转基因成分筛查方法十分必要。对玉米、大豆、水稻、棉花、小麦等主要农作物的转基因研发及商业化情况进行分析,分别建立了各主要农作物转基因成分筛查策略和检测线路图。建立的方法可以对农作物种子中的转基因成分实现快速、准确和高效的筛查检测。     

玉米样品中转基因玉米Bt176含量检测

根据其检测特异性,转基因产品检测技术可分为筛选、基因、构建和转化体特异性检测四类.由于转化体特异性检测方法的具有高度特异性,目前,一些发达国家对于转基因产品检测方法正逐步过渡到转化体特异性序列的检测方法.本研究针对转基因玉米Bt176的外源基因3'端与玉米基因组DNA相接区序列设计具有转化体特异性的引物和荧光探针.利用实时荧光定量PCR,以已知Bt176含量样品为标准样品建立内外源基因标准曲线,利用该标准曲线对多个玉米样品Bt176玉米成分含量进行检测,结果显示该方法检测结果准确,检测特异性强,Bt176玉米检测极限浓度达到0.001 ng/μL.同时该方法操作简单,适合转基因样品大批量检测.     

中美转基因作物产业化最新进展

转基因作物的种植带来了巨大的政治、经济、社会和生态效益。美国作为世界上最大的发达国家,种植了全球转基因作物种植面积的近 40%,主要农作物普及率达 90% 以上,获得了全球 50% 以上的经济效益。中国作为世界上最大的发展中国家,从 1998 年开始种植转基因棉花,种植面积仅占全球转基因作物种植面积的 2%~4%。参考了美国农业统计服务局（NASS）美国转基因作物商业化种植数据及国际农业生物技术应用服务组织（ISAAA）1996-2019 年间全球转基因作物商业化种植数据,概述了全球转基因作物商业化种植现状,分析了美国及中国转基因作物商业化发展趋势,展望了我国转基因作物商业化发展前景。随着 2022 年转基因作物监管政策的明朗化和转基因玉米大豆品种审定标准的具体落实,我国的转基因作物产业化必将迎来一个跨越式的发展。     

超低温11年保存期对转基因作物基体标准样品核酸检测的影响

标准物质是转基因检测结果可靠性、可比性以及准确性的重要参比,不可缺少。本文研究了植物转基因成分检测中基体标准物质的长期保存对PCR检出及低含量标准物质量值稳定性的影响。应用普通定性PCR、实时荧光PCR和微滴式数字PCR3种方法,对不同含量转基因标准物质和转基因检测样品进行了复现性和量值稳定检测。结果表明,-70～-75℃保存条件下, 9年保存期的转基因含量为0.1%的单一作物转化体标准物质中依然能得到清晰的转化体目标片段扩增,且Ct值在36左右。数字PCR定值结果表明, 9年保存期的转基因基体标准物质的量值保持稳定。11年保存期的大豆、玉米、水稻的混合基体样品中各转基因元件均能稳定检出。研究结果表明转基因基体标准物质的长期低温保存不会影响其各转基因元件的检出和作为转基因核酸检测阳性对照的应用。     

产品是否转基因五十分钟可测出

上海市农科院生物技术中心承担的科技部、上海市科委“主要转基因农产品标准检测技术研究”和“转基因农产品检测试剂盒”的研究，经过2a的攻关，取得突破，转基因农产品检测试剂盒成功研制并进行规模生产。该试剂盒可系统检测大豆、油菜、玉米等多种转基因农产品的外源基因，DNA提取率高，纯     

美国主要作物转基因商业化进展及启示

分析了美国玉米、大豆和棉花3种主要作物转基因品种的商业化进程,结果表明:玉米、大豆和棉花在美国已经基本实现了品种的转基因化,2010年已分别达到86%、93%和93%.无论是抗虫、还是抗除草剂、或者是既抗虫又抗除草剂的转基因品种,在美国都大受农场主的欢迎,这揭示转基因技术为农业生产者带来了巨大的利益.分析了我国转基因作物商业化现状,棉花、玉米、大豆都与美国有很大的差距,仅水稻的转基因研究领先于美国.因此,建议积极推进转基因水稻的商业化进程,保持水稻研究的先发优势,加强其他作物转基因研究,并适时商业化,保障我国的粮食安全.     

转基因耐除草剂大豆ZH10-6实时荧光定量PCR检测方法的建立

转基因耐除草剂大豆ZH10-6是含有G2-EPSPS基因和GAT基因耐除草剂大豆新品系,对广谱型除草剂草甘膦具有耐受性,在中国具有重要产业化应用前景。本研究以其转化体特异性序列为靶标,建立了基于Taqman水解探针的实时荧光定量PCR检测方法。该方法能特异、定量检测出转基因耐除草剂大豆ZH10-6转化体成分,线性度大于0.995,RSD为0.17%～2.07%,定量限达0.16%,检测限达到0.032%。该方法为转基因耐除草剂大豆ZH10-6的精准定量检测提供了一种新的技术手段,为农业转基因监管提供技术支撑。     

双重荧光定量PCR杂交探针标记法快速鉴定转基因玉米MON89034

本研究创建一种简单快捷、成本低廉、灵敏准确及可靠性强的高通量鉴定转基因玉米MON89034转化体的快速检测方法。采用多重实时荧光聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)对转基因玉米MON89034品系进行检测,并针对转基因玉米MON89034靶标基因设计高效稳定的引物和探针,使用zSSIIb基因作为内源基因,避免检测出现假阴性,将反应体系及条件优化后,用实时荧光定量PCR仪进行扩增,初步建立转基因玉米MON89034双重实时荧光PCR检测方法,通过对该方法进行特异性和大样本可靠性测试验证,继而创建出一种高通量鉴定转基因玉米MON89034转化体的检测方法。通过建立的双重荧光定量PCR方法对转基因玉米、非转基因玉米和转基因大豆的DNA混合模板检测得出的结果表明,多种作物DNA混合模板可在单根PCR反应管内实现对zSSIIb基因和MON89034的同时检测,并在2 h内完成检测得到准确结果。目前,建立的该双重实时荧光PCR方法可用于多个转基因作物样品间快速筛查,检测快速,结果准确,可满足大多数检测机构日常检测的需求。     

转基因作物研究进展及我国转基因大豆的现状与未来

转基因作物从20世纪90年代发展至今,在农业、环境和社会经济等方面均取得了可观效益。随着转基因技术的不断发展,转基因作物育种可利用的目的基因、可改良的性状逐渐增多,基因编辑技术的兴起,使作物改良简单化、精准化。转基因作物种类增多、数量增加、种植面积增加,转基因产品的流通速率明显提高。对转基因技术进行了详细介绍,结合国际农业生物技术应用服务组织(ISAAA)数据分析得到国际及我国转基因作物的种植情况,针对转基因大豆的技术应用和研发成果进行了汇总与讨论,总结出现阶段我国转基因大豆及其产品在研发过程中存在的问题,并对转基因大豆的产业发展提出了合理建议,以期为中国转基因大豆育种工作提供参考。     

转基因在欧盟从“反转国”到“倒戈行动”

<正>1996年末,第一批转基因玉米和大豆从美国运到欧洲,由此开始转基因在欧盟的发展生涯。1997年5月14日,欧盟通过"欧盟议会委员会新食品和食品成分管理条例第258/97号令",并于当日生效,由此开始了欧盟对转基因产品的严格管制。截至2014年,欧盟共批准两个转基因作物品种用于商业化种植:转基因Bt抗虫玉米和转基因Amflora土豆     

玉米种子生产基地品种转基因成分快速检测的策略

近年来,种子监督管理过程中发现部分地区存在非法繁育转基因作物的现象.为了打击转基因玉米非法繁育的行为,更好地保障农业转基因安全,对玉米种子生产基地的品种进行转基因成分的现场快速检测十分重要.本研究检索已知商业化转基因玉米的外源目的基因信息,构建了转基因玉米常用外源目的基因数据库,建立了玉米品种转基因成分快速检测的策略.研究发现,利用Cry 1 Ac/Ab、CP 4 EPSPS、Pat/Bar3个快速检测试纸组合可完成20个转基因玉米转化事件的现场快速检测.     

巴西多措并举推动转基因作物发展

正据报道,巴西是世界重要的农业国,也是重要的转基因作物种植大国,自2009年超越阿根廷成为仅次于美国的全球第二大转基因作物种植国以来,转基因作物种植面积越来越大,增长越来越快。2015年,巴西种植有4420万公顷转基因大豆、玉米和棉花,占全世界转基因作物的1/4。至2014年底,巴西已有5例大豆、20例玉米、12例棉花转基因品种获准商业化,转     

美国转基因作物种植面积扩大

尽管转基因作物商业化已超过10年,美国种植转基因作物面积仍继续增加。依据美国农业部的最新统计,美国种植的棉花和大豆中携带有转基因的已超过80%,60%以上的玉米作物现在也都为转基因作物。今年美国种植的玉米中大约61%携带转基因,而2005年为52%。转基因玉米面积增加了大约14%     

农作物转基因检测技术现状及改善措施

随着科学技术的发展,近20年来,包括小麦、玉米、水稻在内的主要农作物转基因研究得到了突飞猛进的发展,转基因棉花、大豆、玉米和油菜已经在世界各地广泛种植,种植面积逐年扩大。在提高经济效益的同时,为了防止作物间基因漂移,打击非法种植、销售转基因作物,维护消费者的知情权和选择权,对农作物进行转基因检测变得尤为重要。     

植酸酶基因定性PCR检测方法及阳性质粒分子的构建

植酸酶基因在农业生产中具有很高的应用价值,正被广泛用于农作物的基因工程研究。为了满足转植酸酶基因作物安全监管的需要,通过优化PCR检测条件,建立了植酸酶基因特异性定性PCR检测方法。该方法具有良好的扩增特异性和检测灵敏度,可以满足我国植酸酶转基因作物监管需要。此外,我们将6大作物(小麦、水稻、棉花、大豆、玉米和油菜)的内标准基因和植酸酶基因克隆到同一载体上,构建成了阳性质粒分子pBS Endogenous-phytase。该质粒分子适用于这6大作物中植酸酶基因的筛查检测。本研究为转植酸酶基因作物的安全监管提供了阳性材料和检测方法。     

欧盟批准11种转基因玉米、3种转基因大豆投放市场

正据悉,9月16日欧盟委员会表示已经批准了先正达开发的11种转基因玉米,可以用于生产食品或者饲料。此次批准的范围不包括播种,有效期为10年。根据欧盟法律,任何含有转基因玉米成分的产品都需要遵守标识以及可追踪来源的规定。此外,据欧盟公报消息,欧盟委员会发布委员会实施决议(EU)2016/1215、(EU)2016/1216、(EU)2016/1217,批准三种转基因大豆投放市场。此前,欧盟在7月22日宣布批准进口美国孟山都公司研发的Roundup Ready 2Xtend转基因大豆。     

黑龙江明年5月起全面禁止转基因粮食作物

正12月16日,黑龙江省官方发布消息称,根据最新修订的《黑龙江省食品安全条例》将在该省行政区域内全面禁止种植、生产、加工和销售转基因玉米、水稻、大豆等作物,以及含有转基因成分的食用农产品。新规自2017年5月1日起施行。当天,黑龙江省十二届人大常委会第三十次会议通过了新修订的《黑龙江省食品安全条例》。报道称,《黑龙江省食品安全条例》规定,"本省行政区域内依法禁止种植转基因玉米、水稻、大豆等粮食作     

实时荧光PCR技术定量检测转基因大豆方法的研究

以转基因大豆Roundup Ready为材料，通过特异性引物和探针，对转基因大豆中外源基因cp4-epsps进行了定量检测。研究发现Taqman荧光探针法和SYBR荧光染料法均可作为转基因大豆定量检测的方法，但前者比后者具更高的检测灵敏度和精确度，其检测阈值可降到0.05%，变异系数为0.09%~0.53%。在此基础上，建立和优化了Taqman探针实时荧光定量PCR检测技术体系，有助于提高转基因作物及产品的生物安全性定量检测的准确度和可靠性。     

多重RT-PCR快速检测转基因油菜

全球转基因油菜的数量和种类日益增多,其所带来的潜在风险也备受人们的关注,迫切需要开发一套精准、高效、便捷检测转基因油菜的技术体系。本研究针对花椰菜花叶病毒35 S启动子(pCaMV 35S)、膦丝菌素乙酰转移酶(bar)、5-莽草酸-3-磷酸合成酶基因(epsps)3个目标基因的序列,以及油菜内源基因cruciferinA (CruA)序列设计四重实时荧光定量聚合酶链式反应(Multiplex real-time fluorescence quantitative,PCR)特异性强的引物和多重荧光探针。通过对多个转基因油菜材料验证,结果表明该方法检测特异性强,重复性好,4个基因的扩增效率都在90%～105%之间,标准曲线相关系数R2都大于0.99。转基因成分bar,epsps和pCaMV35S的检出限为0.1 ng/μL,内参基因CruA的检出限为0.01 ng/μL。本研究建立了一种能快速、高效、准确检测转基因油菜四重实时荧光定量PCR技术的检测体系。