不同培养方法对相似穿孔线虫致病力的影响

利用从进口观赏植物上截获的相似穿孔线虫6个种群,采用胡萝卜愈伤组织长期培养和温室盆栽的方法,观察不同培养方法对相似穿孔线虫致病力的影响。结果表明:在胡萝卜愈伤组织上长期培养和在寄主植物上接种复壮后的相似穿孔线虫均对红掌有致病性,但致病力有差异并发生变化;接种线虫后红掌根部发病率最低的为24.40%、最高的为90.00%,繁殖倍数最低的为0.20、最高为2.80;在胡萝卜愈伤组织上长期培养后6个种群的致病力降低,在寄主植物上接种复壮后致病力会增强,但至少要连续复壮2代致病力才能稳定。     

不同方法培养保存后相似穿孔线虫的单雌繁殖力的测定

采用胡萝卜愈伤组织培养(25℃)的方法,测定传入中国温室的相似穿孔线虫6个种群单条雌虫的繁殖力,并比较这些种群经长期在胡萝卜愈伤组织上培养保存和在寄主红掌上接种复壮保存的单雌繁殖力.结果表明,在25℃条件下,供试相似穿孔线虫种群经长期在胡萝卜愈伤组织上培养保存和在寄主植物上复壮后的单条雌虫在胡萝卜愈伤组织上均能完成生活史并进行繁殖,同一种群经不同保存处理的后代单雌繁殖力以及不同种群经同种保存处理的后代单雌繁殖力均存在差异;在胡萝卜愈伤组织上长期培养保存和在寄主植物上接种复壮保存都会对相似穿孔线虫的单雌繁殖力产生影响,但不同种群单雌繁殖力所受影响的情况不同.     

香蕉穿孔线虫培养技术及其种群繁殖力研究

以10g/L琼脂粉培养基为对照，研究筛选了新的培养基．新筛选的100g／L马蹄粉培养基、100g/L玉米粉培养基和100g/L菱角粉培养基可以培养用于繁殖香蕉穿孔线虫的胡萝卜愈伤组织．其中100g/L马蹄粉培养基和100g／L玉米粉培养基培养的胡萝卜愈伤组织繁殖香蕉穿孔线虫的效果较好，而100g/L马蹄粉培养基培养周期短、速度快、成本低，可以用于代替琼脂粉培养基培养胡萝卜愈伤组织来繁殖香蕉穿孔线虫．香蕉穿孔线虫不同种群的繁殖力存在明显差异，本研究的10个种群中，来源于红掌的RH1种群的繁殖力最强．     

进口红掌上香蕉穿孔线虫种群的个体发育

对温室中的进口红掌上查获的香蕉穿孔线虫种群的个体发育进行研究,结果表明,香蕉穿孔线虫种群的卵在25 ℃的清水中培养12 h后发生卵裂,从单胞卵到二龄幼虫孵出经历10.0～11.5 d.在25 ℃胡萝卜愈伤组织中, 卵的孵化需要7～9 d,幼虫期为8～10 d,完成1个生活史需要18～22 d.     

愈伤组织和培养温度对花生茎线虫繁殖力的影响

测定了不同的愈伤组织(胡萝卜、甘薯)及培养温度(15、20、25、30、35℃)下花生茎线虫的繁殖力.结果表明:花生茎线虫在胡萝卜和甘薯的愈伤组织上均能繁殖并完成生活史,但在胡萝卜愈伤组织上的繁殖力更强;花生茎线虫在胡萝卜愈伤组织上的适宜培养温度为20~30℃,当温度低于15℃或高于35℃时线虫的繁殖受到抑制;花生茎线虫6个不同地理种群在胡萝卜愈伤组织上的繁殖力没有明显差异.     

相似穿孔线虫消毒方法筛选及其对线虫繁殖量的影响

通过比较不同消毒方法对相似穿孔线虫的消毒效果和对其活力的影响,筛选出5种消毒方法,再通过接种 胡萝卜愈伤组织繁殖线虫的方法,测定了这些消毒方法对相似穿孔线虫繁殖量的影响.结果表明:供试的5个相似 穿孔线虫种群,用硫酸链霉素进行消毒后的雌虫平均繁殖量最大,用次氯酸钠处理后的雌虫平均繁殖量最小,而用 氯化汞、洗必泰+氯化汞和硫酸链霉素 氯化汞进行处理后的雌虫平均繁殖量介于上述两者之间,综合消毒效果 和对繁殖量的影响2个因素,其中洗必泰 氯化汞是最合适的消毒方法.     

香蕉穿孔线虫不同种群耐寒性的测定

采用胡萝卜片愈伤组织接种培养法,在室内条件下对供试香蕉穿孔线虫10个种群的耐寒性进行了测定.结果表明,在12℃和10℃低温下分别处理15 d、25 d、35 d后,供试香蕉穿孔线虫各种群生活力虽然有所下降,但仍然能够保持一定的繁殖能力;而在8℃时,各种群生存能力明显下降,有些种群无法在此温度下存活.8℃处理15 d后,Rs6种群无法存活;处理25 d后,Rs 2种群亦无法存活;处理35 d后,Rs8、Rs4种群无法存活.Rs1、Rs3、Rs5、Rs7、Rs9和Rs10等6个种群在8℃低温下处理35 d后仍然能够存活.     

香蕉穿孔线虫对烟草和芒果的寄生性和致病性

 【目的】利用从进口观赏植物上截获,并培养保存在胡萝卜愈伤组织上的香蕉穿孔线虫10个种群,研究香蕉穿孔线虫对烟草和芒果的寄生和致病性。【方法】采用温室盆栽接种方法,进行寄生和致病性测定。【结果】香蕉穿孔线虫在烟草和芒果根际的繁殖率Rf＞1,接种香蕉穿孔线虫的烟草和芒果植株生长缓慢、矮小,根系衰弱、变色腐烂,有明显受害症状。【结论】烟草和芒果是香蕉穿孔线虫新的适合寄主植物,香蕉穿孔线虫对这2种植物具有明显的致病性,不同种群的致病力有差异。     

菊花滑刃线虫的培养条件和繁殖特性

采用胡萝卜和甘薯愈伤组织培养的方法,分别在4个不同培养温度和6个不同培养时间条件下,观察菊花滑刃线虫(Aphelenchoides ritzemabosi(Schwartz,1911)SteinerBuhrer,1932)在2种植物愈伤组织上的繁殖特性。结果表明:菊花滑刃线虫在2种植物愈伤组织上培养繁殖的适温为15~25℃,温度达到30℃及以上均不能正常繁殖。在胡萝卜愈伤组织上培养,20℃时第5周繁殖率最大,为3 937.50倍;在甘薯愈伤组织上培养,20℃时第6周繁殖率最大为576.68倍;在相同培养温度和时间条件下,菊花滑刃线虫在胡萝卜愈伤组织上的繁殖率均大于在甘薯愈伤组织上的繁殖率。     

4种杀线虫剂对红掌相似穿孔线虫病的防治效果

通过盆栽试验,测定了杀线虫剂克线磷、福气多、涕灭威、卡线特对红掌相似穿孔线虫病的防治效果.结果表明:红掌在被相似穿孔线虫侵染前或侵染后,在根际土壤中施用供试药剂,均能有效防止病害的发生,且在侵染前用药防治效果更好;每盆施用克线磷1.2 g、福气多1.5 g和涕灭威0.9 g,不仅能有效地杀灭红掌根和根际介质中的相似穿孔线虫,且能将病级控制在1以下;在红掌被相似穿孔线虫侵染发病的情况下,施用上述药剂虽然也能有效地杀灭线虫,但因施药前红掌根部被线虫侵染而严重腐烂,故对植株病情的恢复效果较差;卡线特对红掌有药害,不宜用于红掌相似穿孔线虫病的防治.     

Early Identification of Stable Transformation Events by Combined Use of Antibiotic Selection and Vital Detection of Green Fluorescent Protein （GFP） in Carrot （Daucus carota L.） Callus

Genetic transformation is a useful technique to complement conventional breeding in crop improvement. Although carrot has been a model organism for in vitro embryogenesis study, genetic transformation of carrot is still lengthy and labor intensive. An efficient transformation and detection system is desirable. Direct infection of Agrobacterium to carrot calli has provided an easy way for carrot genetic transformation. To improve the efficiency of antibiotic selection in this method, we report the combined use of an improved green-fluorescent protein, referred to as smGFP, to establish a versatile selection method for carrot callus transformation system. By combining antibiotic selection with the bright fluorescence observed in the callus tissue, we were able to easily identify stable transformants in early stage of the transformation process. In addition to the GFP expression of the callus cells, the transgenic nature of callus cells was confirmed with Southern and Western analysis. We found we can link the simplicity of carrot-callus-cell transformation, early detection of stable transformants with antibiotic selection, visualization of GFP fluorescence, and molecular analysis （Southern and Western） of callus tissue （non-photosynthetic tissue） to provide a more efficient way in identifying stable transformants at early stage of carrot transformation.     

油松胚性愈伤组织培养中褐化因素研究及增殖培养基的优化

【目的】调查油松Pinus tabulaeformis胚性愈伤组织增殖培养阶段不同因素对于褐化产生的影响,并结合增殖率对培养基进行调整优化以降低褐化率,提高利用率。【方法】以3个年份的9个细胞系的油松胚性愈伤组织为材料,利用单因素试验设计对放置不同数量愈伤块、pH、植物凝胶含量、糖种类和含量以及培养时间的褐化率和增殖率进行测定计算。采用正交试验选出最佳培养条件。【结果】单因素试验结果表明,褐化率在不同基因型间差异显著,且与增殖继代年龄显著正相关;在培养皿中放置6~7块愈伤组织、pH 5.8~6.0、培养基中添加2.0~3.0 g·L~(-1)植物凝胶、添加10 g·L~(-1)蔗糖能保证较低的褐化率和较高的增殖率,且蔗糖优于葡萄糖和麦芽糖。【结论】结合正交设计,90 mm培养皿中放置7块愈伤组织,培养基中添加2.5 g·L~(-1)植物凝胶、10 g·L~(-1)蔗糖,调节pH为5.9时,褐化率、增殖率和利用率最理想。     

欧洲卫矛愈伤组织分化及其生理生化特性

以欧洲卫矛生长健壮的叶片愈伤组织为材料,通过不同激素配比筛选出适宜其分化的培养基,将愈伤组织置于不同条件下培养。结果表明,适宜欧洲卫矛愈伤组织分化的培养基为MS+1.0 mg·L^-1 6-BA+0.1 mg·L^-1 NAA;欧洲卫矛愈伤组织适宜在光照条件下进行培养,生长周期为28 d,28 d后愈伤组织出现不同程度的褐化;可溶性糖含量先升后降;SOD和POD活性均出现2个峰值,可溶性蛋白变化趋势与POD变化趋势基本一致;可溶性蛋白在分化中起重要作用,且光照条件下,可溶性糖和可溶性蛋白含量、SOD和POD活性均高于黑暗条件下,PPO在培养后期活性下降,可能与愈伤组织褐化有一定关系。     

RNA-Seq定量分析盐肤木对铅胁迫的响应

为探究重金属污染地生态修复先锋植物——盐肤木对重金属胁迫的分子响应机制,设置3个铅胁迫水平(0、250、1000mg·kg~(-1)),应用Illumina HiSeq~(TM)2000进行盐肤木根系的转录组测序,并通过Gene Ontology(GO)与Pathway功能显著富集分析方法,分析说明盐肤木响应不同铅胁迫水平下的差异表达基因。结果表明,盐肤木在遭受轻度铅胁迫时,主要有4类水解酶与2类磷酸酶相关基因显著富集,说明盐肤木主要通过调节细胞内水解酶与磷酸酶相关基因来抵御胁迫,而在重度铅胁迫下,主要有6类氧化还原酶相关基因出现显著富集,此时氧化还原酶相关基因起到主要调节作用;盐肤木在铅胁迫下细胞受损,在轻、重度铅胁迫下,分别有24、16类细胞相关基因显著富集,但其自身可通过调节细胞内细胞器、细胞质等相关的细胞运动以应对逆境;核糖体代谢通路是盐肤木适应铅胁迫的主要代谢通路。研究表明,核糖体相关基因是盐肤木响应铅胁迫的主要应答与调节基因。     

凹叶厚朴用于细胞悬浮培养的愈伤组织的制备研究

目的 研究凹叶厚朴适用于细胞悬浮培养的愈伤组织。方法 通过对基本培养基（B₅、MS和1/2MS）、外植体（茎段、顶芽和叶片）、激素浓度及组合进行筛选的方法进行厚朴愈伤组织诱导和继代研究。结果 B₅ 为最适合厚朴愈伤组织诱导的基本培养基;顶芽是最佳诱导愈伤组织的材料;最适合厚朴愈伤组织诱导的培养基为B₅+2.0 mg/L 2,4-D+1.0 mg/L 6-BA;最佳继代培养基为B₅+2.0 mg/L NAA+1.0 mg/L 6-BA,愈伤组织生长倍数达到2.87倍。结论 初步筛选出凹叶厚朴用于细胞悬浮培养的愈伤组织,为凹叶厚朴细胞培养奠定基础。     

杀虫药剂对不同寄主葱地种蝇的亚致死效应及田间药效

选取8种不同类型化学药剂,分别测定其对3种寄主品系葱地种蝇1龄、3龄幼虫的毒力,研究亚致死浓度处理条件下各药剂对个体生长发育和繁殖力影响,并选取不同剂量进行田间药效试验。结果表明：8种药剂均对葱地种蝇幼虫的发育历期、幼虫质量、蛹期、蛹质量、化蛹率、羽化率、产卵前期、成虫寿命、繁殖力有不利影响。田间药效试验表明,1.44 kg/hm² 毒死蜱、1.20 kg/hm² 噻虫胺、1.20 kg/hm² 噻虫嗪、1.20 kg/hm² 灭蝇胺对不同寄主品系葱地种蝇的药后7 d、14 d防治效果均在87.15%、90%以上,防治效果好,具有较高的推广应用价值。     

TDZ对牛皮杜鹃叶片分化及继代增殖的影响

以牛皮杜鹃组培苗为试材,研究以改良MS为基本培养基,不同质量浓度TDZ、ZT与IBA组合,对叶片愈伤组织诱导及分化、继代增殖的影响。结果表明：TDZ对组培苗叶片愈伤组织诱导及分化的效果显著优于ZT,但在继代培养时增殖效果不如ZT;TDZ 0.3 mg/L+IBA 0.5 mg/L处理的叶片分化效果最好,分化率高达97.44%;不定芽在改良MS+ZT 0.2 mg/L+IBA 0.5 mg/L中继代培养后,每瓶分化的不定芽数最多（30.2个）。     

掌叶覆盆子离体培养适宜外植体的筛选及脱分化条件研究

以安徽地区掌叶覆盆子（Rubus chingii Hu）为试验材料,MS培养基为基本的培养基,研究了在不同外植体和不同植物生长调节剂水平下对其愈伤形成率的影响和不同因素的抗氧化试验对其污染率与褐化率的影响,筛选出能稳定形成健康的愈伤组织的培养条件。结果表明,最适合掌叶覆盆子愈伤组织形成的外植体为腋芽;最佳外植体的表面灭菌条件为75 %乙醇溶液处理30 s和0.1 %HgCl₂溶液处理8 min;最优掌叶覆盆子愈伤形成的培养基为MS + 5.0 g·L ^-1 PVP + 0.5 mg·L ^-1 6-BA + 0.1 mg·L ^-1 NAA + 0.5 mg·L ^-1 GA₃ + 25 g·L ^-1蔗糖 + 6.0 g·L ^-1琼脂;最适合暗培养时间为7 d;最适合的抗氧化剂为PVP。在上述条件下,掌叶覆盆子的愈伤组织形成率为96.67%,且能基本抑制外植体的褐化现象。该研究结果为掌叶覆盆子的种苗快繁及后期开展覆盆子次生物质代谢途径的研究提供了材料基础。     

不同有机添加物及柠檬酸钠组合对春兰根状茎增殖的影响

通过添加不同浓度猕猴桃汁、香蕉汁、梨汁、苹果汁、白萝卜汁、胡萝卜汁、土豆汁、红薯汁等8种有机物及柠檬酸钠组合,研究其对春兰根状茎增殖及抗褐化效果的影响。结果表明,单独添加猕猴桃汁100.0 g·L-1、梨汁100.0 g·L-1或柠檬酸钠1.0 g·L-1比对照能显著促进根状茎增殖,增殖中生长倍数分别为3.9、2.4和2.2,梨汁和猕猴桃汁处理中,根状茎中细胞分裂相关基因CgCki、CgCKS、CgClins、CgE2F和CgRb表达量显著提高。1/2MS+NAA5.0 mg·L-1+活性炭1.0 g·L-1+猕猴桃汁100.0 g·L-1+柠檬酸钠1.0 g·L-1组合对春兰根状茎增殖及抗褐化效果最好,根状茎增殖的生长倍数为4.2,细胞分裂相关基因CgCDKS、CgCki、CgCKS、CgClins、CgE2F和CgRb表达显著提高。因此,在春兰组培快繁过程中猕猴桃汁+柠檬酸钠组合可以有效地促进根状茎增殖,并防止根状茎褐化。     

二穗短柄草DREB1G基因表达模式分析和在拟南芥中的异源过量表达

CBF/DREB基因是一类植物特异性转录因子,通过调控下游抗逆相关基因的表达,在植物逆境胁迫应答过程中发挥重要作用。为了研究新型的禾本科模式植物二穗短柄草DREB基因的功能,克隆BdDREB1G的cDNA序列,分析该基因在各种非生物胁迫条件下的表达,构建过表达载体,获得转基因拟南芥。结果表明:高温、低温和水杨酸胁迫处理显著诱导BdDREB1G的表达,暗示该基因响应高温和低温胁迫。初步观察结果说明,该与野生型拟南芥相比,转基因植株生长发育迟缓。这些为研究该基因响应非生物胁迫的功能奠定基础。