家禽精子冷冻保存技术研究进展

精子冷冻保存技术是一种在体外长期低温保存精子的技术。该技术不仅在人类精子保存方面应用广泛,而且在畜牧业生产和动物保种等领域具有重要意义。然而,目前家禽精子冷冻保存效果还并不理想,大部分精子冷冻复苏后损伤严重,丧失受精能力,限制了该技术的应用和推广。鉴于近年来关于冷冻保护剂、抗氧化剂和药物传递系统在精子冷冻保存技术中的作用,文章从精子冷冻技术的研究历程、冷冻保存程序、冷冻损伤机制和家禽精子冷冻保存液等方面进行综述,为家禽精子冷冻保存技术的研究与应用提供参考。     

牛体外胚胎冷冻保存的研究进展

体外胚胎冷冻保存技术是胚胎移植技术的重要组成部分,在辅助生殖技术中发挥重要作用,同时对种质资源保存、加强遗传改良和促进优质种源国际交流等方面具有重要意义。然而,体外胚胎冷冻过程中存在脂质含量过高、活性氧水平升高及机械损伤等问题,导致体外胚胎冷冻效率低,这极大地限制了体外胚胎冷冻保存技术的广泛应用。大量研究表明,通过去脂质、优化体外胚胎培养液、人工塌陷囊胚腔和优化冷冻程序等手段,可以有效提高冷冻后胚胎的存活率和发育能力。因此,本文概述了体外胚胎冷冻保存技术的研究进展和胚胎冷冻过程中存在的问题,总结了提高体外胚胎冷冻效率的方法措施,旨在为提高体外胚胎冷冻保存效率提供一定参考。     

鸡的尖端技术的实用化方向

一、鸡的尖端技术的现状 1.鸡精液冷冻保存技术鸡精液的冷冻保存最早是在1949年由英国的Polge等研究成功。1981年美国的Lake等取得了受精率86％,孵化率81.9％的好成绩。但由于①鸡的冷冻精液受精率差异大;②精液的冷冻保存比牛等要困难;③鸡的繁殖性能高,世代周转快,鸡的育种部门认为不太必要使用冷冻精液等,所以实际上是没有采用精液冷冻保存技术,更没有达到实用化。     

鸡囊胚细胞DMSO细管冷冻保存技术研究

旨在研究高效鸡囊胚细胞(Blastodermal cells,BCs)冷冻保存技术,为利用BCs保存禽类雌性遗传资源以及胚胎干细胞研究奠定基础。采用解冻后二乙酰荧光素(Fluorescein diacetate,FDA)染色以及培养24h后细胞贴壁率双重检测BCs活力方法,比较二甲基亚砜(DMSO)不同浓度、不同冷冻与解冻速率等对BCs的冷冻保存效果。结果表明:(1)DMSO不同浓度,20%组解冻后活力最高(0.58),与15%组差异不显著(P0.05),但与5%、10%和25%组差异极显著(P0.01);细胞复苏后贴壁率,20%组最高(30.5%),与15%组差异不显著(P0.05),与25%组差异显著(P0.05),与5%和10%组差异极显著(P0.01)。(2)冷冻速率,使用三步法冷冻,以-1℃·min-1的速率降温至-7℃,保持10min,继续降温分别至-15、-35、-55、-75℃后,投入液氮中保存,-75℃组解冻后活力最高(0.53),但与-35℃、-55℃组差异不显著(P0.05);贴壁率,各组间差异极显著(P0.01),其中-35℃组最高(36.6%)。(3)37℃水浴解冻,10s、1min、2min、3min解冻后,各组间活力差异不显著(P0.05),其中10s组最高(0.60),解冻后贴壁率,37℃水浴1min组结果最好(43.9%),与水浴2min组差异不显著(P0.05),但与水浴10s组差异显著(P0.05),与水浴3min组差异极显著(P0.01)。50℃水浴5s、20s、40s、1min解冻,5s组活力最高(0.70),与20s组差异显著(P0.05),与40s、1min组差异极显著(P0.01),解冻后贴壁率,各组间差异均极显著(P0.01),其中50℃水浴5s组最高(36.9%),50℃水浴1min组最低(5.6%)。综上表明,鸡BCs使用DMSO浓度为20%的冷冻保护剂进行细管冷冻,以-1℃·min-1的速率降温至-7℃保持10min,继续以此速率降温至-35℃后,投入液氮保存,37℃水浴1~2min解冻,BCs通过FDA染色与体外培养贴壁率双重检测均可获得较好效果。     

不同抗氧化剂对鸡胚盘细胞冷冻效果的影响

为探究不同抗氧化剂对鸡胚盘细胞(blastodermal cells,BCs)冷冻保存效果,试验在冷冻液中分别添加不同浓度的N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC)、过氧化氢酶(catalase,CAT)和番茄红素(lycopene,LP)3种抗氧化剂,用胚胎程序冷冻仪冻存BCs,解冻后测定细胞活率(简称"活率"),并于培养24h后测定细胞贴壁率(简称"贴壁率")。结果表明:在活率上,除了0.05mol/L NAC组(76.7%)与800U/mL CAT组(77.3%)极显著低于对照组外(P0.01),其余各组与对照组差异均不显著(P0.05);在贴壁率上,除了800U/mL CAT组(34.2%)极显著低于对照组(P0.01)外,其余试验组均极显著高于对照组(P0.01),其中NAC、CAT与LP的最佳浓度,分别为0.01mol/L(48.3%)、200U/mL(45.4%)与0.05g/L(39.8%)。因此,在冷冻液中添加适量的NAC、CAT或LP,可以提高BCs冷冻保存活率(差异不显著),极显著提高解冻BCs培养24h后的贴壁率。     

禽类生殖嵌合体的制作及其应用

目前已能够运用禽类囊胚细胞 (BCs)或原生殖细胞 (PGCs)制作嵌合体。为了提高生殖嵌合体的制作效率 ,已有许多方法被采用。最近的研究表明 ,对BCs或PGCs进行同性别移植也可以提高生殖嵌合的制作效率。BCs和PGCs体外培养的成功使得嵌合体技术能够应用于禽类转基因中 ,并且 ,还可应用于珍稀鸟类的保种     

鸡胚胎体外操作技术的研究现状和进展（续）

5嵌合体鸡的生产　　嵌合体制作最早主要用于发育生物学、细胞遗传学等学科的理论研究。目前，禽类嵌合体的制作中作供体细胞用的囊胚层细胞(BC)和原生殖细胞(PGCs)可以代替受精卵和早期胚胎用于体外遗传操作，已成为禽类转基因研究的一个热点。同时，BC和PGCs还可以在体外进行培养和冷冻保存。基本原理是经过遗传操作的BC细胞或PGCs细胞作供体，嵌合到受体胚胎中。如果是嵌合在生殖细胞，则该嵌合体性成熟后可产生一定比例经过遗传操作的配子。　　有关鸡嵌合体方面的报道及鸡嵌合体制作方法、嵌合体的嵌合程度的判断以及怎样提高嵌…     

猪早期胚胎体外培养和保存研究进展

早期胚胎的体外培养和保存不仅是研究胚胎生物学的基础,而且也是胚胎移殖推广和应用的先决条件。目前,家兔、牛、绵羊和山羊胚胎的体外培养与冷冻保存技术已基本成功,但猪这方面的研究却不足。本文就猪早期胚胎的体外培养     

鸡精液冷冻保存技术研究进展

鸡精液冷冻保存对于家禽生产业发展和种质资源保护具有重要意义,有利于在鸡育种中进行后裔测定和基因组选择。但由于鸡精子的特殊结构,冷冻保存对其活力和受精率有较大影响,目前尚处于研究阶段。本文分析了鸡精子的结构与特点,对鸡精液冷冻技术的发展历程、冷冻保护剂和冷冻方法等研究进展进行综述,为今后禽类精液冷冻技术研究提供参考。     

牛羊卵母细胞玻璃化冷冻保存的研究进展

卵母细胞玻璃化冷冻保存对于胚胎生物技术的发展具有重要意义,因其简便、快速、廉价等优点而广泛应用于人类辅助生殖、体外胚胎生产、转基因、克隆等方面.由于受到低温和抗冻保护剂的影响,卵母细胞在冷冻过程中都会造成形态和功能上的损伤,并且存活率和发育能力随之降低.本文以牛、羊卵母细胞玻璃化冷冻保存为例,对卵母细胞玻璃化冷冻保存的...     

鸡胚胎原始生殖细胞的体外培养

旨在对影响鸡胚胎原始生殖细胞（PGCs）体外培养、传代过程的各种影响因素进行探讨。将分离到的19期鸡胚胎生殖腺的PGCs在以鸡胚成纤维细胞（CEF）为饲养层，添加细胞因子的培养体系中进行培养、传代。经冷冻保存的PGCs在添加细胞因子的培养体系中能增殖，并具有分化能力。从细胞形态、集落形态、增殖生长能力、核型检测、碱性磷酸酶测定等方面对培养过程中的鸡胚胎PGCs进行检测。结果表明，采用传至3代的CEF为饲养层，多次离散法进行传代所获得的5代鸡胚胎PGCs不但能有效维持PGCs的未分化状态和正常二倍体核型，也具有其作为多能性胚胎干细胞的一系列特征。     

猪卵母细胞冷冻保存效果的评判

建立快速、准确、有效的猪卵母细胞冷冻保存效果的判定方法,将有助于促进猪卵母细胞冷冻保存的研究,从而提高猪卵母细胞冷冻保存效果,为哺乳动物配子和胚胎工程方面的研究提供大量优质卵母细胞。作者主要介绍通过形态学观察结果和发育潜力来判定猪卵母细胞冷冻保存效果的一些方法,如检查冷冻解冻后猪卵母细胞形态和超微结构正常情况,或进行体外成熟、体外受精、孤雌激活、显微受精,然后据此对猪的卵母细胞冷冻保存效果进行评判。     

对鸡的原生殖细胞冻存后重建种群的研究

在家禽面临意想不到的疾病(例如禽流感)大流行时,或者不喜爱某些家禽产品的时候,(冷冻)保存现有种群的遗传多样性,并在未来通过回交重新建立种群,是家禽业生物安全保障、预防禽种(特别是珍稀品种)遗传资源减少或流失的关键措施。从单个供体鸡胚胎(阶段16,孵化2.5d)的背侧主动脉抽出血液,体外培养原生殖细胞(PGCs)、冷冻保存。若干年之后,解冻PGCs、体外培养使其苏醒。将PGCs注入寄主鸡胚胎(阶段16,孵化2.5d)背侧主动脉,继续孵化至出雏,有些后代鸡就会携带供体鸡的遗传基因。通过繁殖扩大数量,就可重新建立供体鸡种群。     

猪卵母细胞OPS玻璃化冷冻保存的研究

为了研究猪卵母细胞的开放性拉长脉管(OPS)玻璃化冷冻保存,试验采用不同的冷冻保护剂对比生发泡期(GV期)(体外成熟12 h)和成熟期(MⅡ期)(体外成熟48 h)猪卵母细胞的冷冻保存效果。结果表明:GV期猪卵母细胞的冷冻保存效果要优于MⅡ期和未经体外培养的猪卵母细胞;不同的冷冻保护剂相比,5%PVP+梯度乙二醇的冷冻保存效果最好。     

鸡胚原始生殖细胞的冷冻保存和体外培养

采用Ficoll密度梯度离心,提取第19期(孵化72h)鸡受精蛋性腺中的原始生殖细胞(primordialgermcells,PGCs),用不同的冷冻保护液对PGCs采用提纯后直接冷冻保存和在培养体系中培养24h后再进行冷冻保存,7d后复苏,用台盼蓝染色检测其存活率,并用PAS染色对冷冻后的PGCs进行特异性鉴定。复苏后的PGCs在培养体系中培养5d后,更换为培养体系继续培养,进行体外分化试验。结果如下分离后直接进行冷冻保存的PGCs复苏后存活率最高为(85.93±1.24)%;复苏后的PGCs在培养体系中培养48h后进行了PAS染色鉴定,结果PGCs呈PAS阳性(细胞核不着色,细胞质呈红色),表明PGCs的染色特性没有因冷冻保存和体外培养而发生改变;复苏后的PGCs在培养体系中培养可形成细胞克隆,当把PGCs更换到培养体系培养5d后,PGCs克隆有的仍保持克隆状态,但体积缩小,克隆中细胞排列紧密,颜色较深,有的克隆由鸟巢状变为不规则形,且在克隆周围形成类神经细胞样细胞。而经体外培养后再进行冷冻保存的PGCs,复苏后存活率最高为(42.26±1.36)%。     

驴精液冷冻保存技术研究进展

精液冷冻技术在驴种质资源的长期保存和引进以及人工辅助繁殖技术应用等方面具有重要意义,精液冷冻保存有利于充分发挥优秀种公驴的繁殖力,降低驴养殖产业的生产成本。近年来,驴精液冷冻保护剂和冷冻方法不断优化,驴精液冷冻保存技术也取得了很大的进步。但由于驴冷冻复苏的精子活力和受胎率低,严重限制了驴冷冻精液的推广与应用。本文对驴精液冷冻保存技术的发展历程、精子冷冻损伤机制、影响驴精液冷冻保存的因素和驴冷冻精液的应用进行综述,为今后驴精液冷冻保存技术的研究提供参考。     

中药防治鸡白痢研究进展

使用抗生素防治鸡白痢易产生耐药性，且会给动物源性食品安全带来隐患，运用中药防治不仅毒副作用小，而且能提高机体免疫力。本文从致病机理、体外抑菌效果、防治效果以及实践应用等几个方面总结了中药防治鸡白痢的进展，以期为鸡白痢的中药防治提供参考。     

鸡生殖干细胞研究现状与展望

鸡生殖干细胞是一类多能性干细胞,既可以在体外进行长期的自我更新,又能保持多向分化潜能,在禽类胚胎发育研究、转基因禽类生产及家禽育种等方面均有巨大应用价值.本文主要就鸡生殖干细胞的分离、培养与鉴定方法的研究进展及其应用前景进行简要综述,为进一步发展更高效的鸡生殖干细胞培养体系并应用于生产实践提供一定的借鉴.     

家禽精液冷冻保存

家禽精液冷冻保存技术可以有效地保护许多由于受到育成品种冲击而濒临灭绝的地方品种,保持家禽遗传资源的多样性。因此,家禽精液冷冻保存在家禽育种中有着非常重要的意义。关于家禽精液冷冻保存的研究,鸡是最早的研究对象。1941年Shaffner等用-6℃冷冻保存30秒的精液输精获第一只小鸡,1949年英国学者Polge等发现甘油具有对精子低温保护功能,从而开创了精液低温保存的历史。自此以后,人们对精液冷冻保存进行了许多研究,如防冻剂的选择、冷冻方法、冷冻速度、解冻方法、冷冻后精子形态和活力的变化以及冷冻后精液的输精量和输精部位等等,使得…     

鸡冷冻精液现状和存在问题

鸡的冷冻精液保存技术,自1949年成功以来,虽然做了很多研究,但至今还未能作为实用化技术来应用。现将有关本技术的意义及其现状和若干问题叙述如下: 一、鸡精液冷冻保存的意义能加快鸡的改良速度;能防止公鸡因病或事故死亡而失去种用价值;能建立起巨大的具有优良性