志贺氏菌显色培养基在饲料检测中的应用研究

探讨志贺氏菌显色培养基在饲料志贺氏菌检测中的应用。将痢疾志贺氏菌、福氏志贺氏菌、鲍氏志贺氏菌和宋氏志贺氏菌标准菌制备成10-5、10-6、10-7梯度稀释的菌液,对志贺氏菌显色培养基、HE琼脂、SS琼脂、麦康凯琼脂、伊红美蓝琼脂进行检测灵敏度的评价。利用人工污染饲料样品进行显色培养基和上述四种普通培养基检出率的测试。结果表明:志贺氏菌显色培养基和普通培养基的检测灵敏度均为10-7;对混合污染样品的检测中,显色培养基优于普通培养基。志贺氏菌显色培养基用于饲料志贺氏菌的检测,具有菌落形态易于分辨的特点,适合于饲料中志贺氏菌的检测。     

出口食蟹猴志贺氏菌的分离和初步鉴定

我们在对出口食蟹猴进行检疫过程中分离出一株细菌。经细菌培养、形态学观察、生化特性和血清学检测初步鉴定为志贺氏菌属的福氏志贺氏菌。进行了该菌株的药敏试验，对氧氟沙星、环丙沙星和头孢噻肟敏感，而对常用药丁胺卡那霉素和庆大霉素产生耐药。     

鸡志贺氏菌凝集抗原及其标准血清的研制

利用分离鉴定的鸡鲍氏和鸡痢疾志贺氏菌,分别经细菌培养、灭活、浓度调整等方法研制诊断用鸡志贺氏菌凝集抗原,并用鸡志贺氏菌疫苗免疫清洁级小白鼠研制鸡志贺氏菌标准血清.结果显示,制备细菌抗原的最佳培养基是1%葡萄糖营养琼脂,抗原最佳灭活温度和时间为121℃和120 min,凝集抗原合适浓度为40亿/mL,最佳稀释液为pH 7.2的0.5%石炭酸生理盐水.制备的鸡鲍氏和鸡痢疾志贺氏菌阳性血清经效价测定分别可达8 log2和10 log2,阴性血清与鸡志贺氏菌凝集抗原作用无凝集反应发生.通过研究同时确定了平板凝集试验反应的合适温度为20～35℃,结果判定时间为3～5 min.研制的凝集抗原及其标准血清具有特异性强、稳定性好、使用方法简便、便于保存和检测结果准确可靠等优点,便于在基层生产单位推广应用.     

袋鼠源志贺氏菌的分离鉴定

志贺氏菌(Shigella),是一类革兰阴性、不活动、不产生孢子、无荚膜、无鞭毛、多数有菌毛的杆状细菌,可引起人和其他哺乳类动物的细菌性痢疾.根据其抗原构造的不同,可分为4个种,即称痢疾志贺氏菌(Sh.dysenteriae)、福氏志贺氏菌(Sh.flexneri)、鲍氏志贺氏菌(Sh.boydii)、宋内氏志贺氏菌(Sh.sonnei).     

志贺氏菌对第三代头孢菌素的耐药机制初步研究

通过对福氏志贺氏菌的诱导及其诱导耐药菌MIC与β-内酰胺酶、超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的检测，探讨福氏志贺氏菌对三代头孢菌素的耐药机制。结果表明，随诱导代数的增加，诱导菌对抗菌药的MIC值亦逐步增大，诱导至30代时，三代头孢对诱导菌的抗菌活性显著降低，MIC范围为2μg／mL-32μg／mL。当对福氏志贺氏菌诱导5代时，已有β-内酰胺酶的产生；诱导至15代时，已有ESBLs产生。诱导至30代时，ESBLs已大量产生。志贺氏菌对三代头孢菌素的主要耐药机制为超广谱β-内酰胺酶的产生。     

龟源松鼠葡萄球菌的分离鉴定及药敏特性分析

为明确一起致乌龟发病死亡的病原,本研究通过细菌的分离培养从患病龟体内分离出一株优势菌,并通过革兰氏染色观察、生化鉴定、16S rRNA序列比对分析、动物回归试验进行鉴定。结果显示,分离菌在血琼脂平板上形成表面粘稠、大而凸起、白色的菌落;革兰氏染色结果显示分离菌为革兰氏阳性,球型,成葡萄串状排列;生化试验结果显示分离菌对葡萄糖、触酶、氧化酶等呈阳性反应,而密二糖、鸟氨酸脱羧酶、V-P反应等阴性;16S rRNA基因序列进化树分析显示该分离菌株与GenBank登录的松鼠葡萄球菌聚为一簇,且同源性达99%以上;动物回归试验显示该菌对乌龟有较强的致病性;药敏特性分析显示,该菌对多数抗生素较为敏感,但对大环内酯类及部分头孢类抗菌药物耐药。研究结果为乌龟松鼠葡萄球菌感染的防治提供参考依据。     

一株致病纤维素降解菌的鉴定

为了筛选出高效的纤维素降解菌,实现纤维类饲料的资源化利用,试验采用形态学观察、生化试验、16S rDNA鉴定对奶牛粪便纤维素降解菌进行了研究,同时还测定了该菌株的最优酶活性。结果表明:形态学观察该菌株为革兰氏阴性直杆菌;生化试验初步鉴定其为志贺氏菌属;16S rDNA试验最终确定该菌为革兰氏阴性兼性厌氧志贺氏菌,将其命名为NC007384;在pH值为7、温度为35℃、装液量为40%、接种量为2.5%、摇床转速为180 r/min的条件下培养42 h,志贺氏菌CMCase活性最大,达到21.842 U。     

志贺氏菌检测和分群PCR方法的建立

为弥补目前志贺氏菌分子生物学检测方法的不足,根据志贺氏菌的invC、rfc、wbgZ和rfpB等基因,分别设计引物建立了鉴定志贺氏菌属、福氏志贺氏菌、宋内志贺菌和痢疾志贺氏菌的PCR方法。同时,以根据ompA基因设计的引物作为参照,通过特异性试验和人工接种试验等,对该方法进行验证。结果显示:17株志贺氏菌和19株非志贺氏菌均出现100%的特异性反应;对增菌肉汤直接进行PCR检测时,在消毒奶、冰淇淋、酸奶、奶酪、熟肉和香肠等即食食品中的志贺氏菌检出限为1~3 cfu/(25 g·mL~(-1)),在原奶、生肉和奶粉中的检出限分别为≤12、27和≤27 cfu/(25 g·mL~(-1));分离培养后再对可疑菌落进行PCR鉴定时,所有样品检出限均为1~3 cfu/(25 g·mL~(-1)),与传统培养法检出限一致。结果表明,该PCR方法快速、敏感、特异,适合用于志贺氏菌的常规检测分析。     

豪猪源福氏志贺菌的分离鉴定及喹诺酮类耐药基因检测

为调查四川省某规模化豪猪养殖场中豪猪大面积腹泻死亡的原因,本研究采集病死豪猪的肠道内容物和肺脏等病料样品进行细菌的分离纯化,通过培养特性观察、革兰染色镜检、生化鉴定、16S rRNA基因的克隆测序进行鉴定,并对分离菌株进行致病性、耐药性分析,对其喹诺酮类耐药基因进行PCR检测并测序分析。结果显示,分离得到1株革兰阴性菌,该分离株符合福氏志贺菌的培养特性和生化特性,并且其16S rRNA基因序列与福氏志贺菌该基因序列的同源性为99%;对小鼠具有较强致病性;药敏试验结果显示分离株具有多重耐药性,仅对丁胺卡那敏感,对喹诺酮类、四环素类、头孢类、氨基糖苷类、青霉素类和氯霉素类药物均表现为耐药;分离株的DNA促旋酶Ⅱ和拓扑异构酶Ⅳ的喹诺酮耐药决定区均有突变,且携带有质粒介导的喹诺酮耐药基因qnr A和qnr S。本研究是国内首次关于豪猪源福氏志贺菌病的报道,为豪猪养殖中该细菌性疾病的诊断防治等相关研究提供参考。     

吉林市郊区猪场仔猪细菌性腹泻病原的调查与药敏试验

为了明确引起吉林市郊区猪场仔猪细菌性腹泻的病原菌,筛选防治敏感药物,试验对225份粪便样本进行细菌分离培养与鉴定,并对主要致病菌进行了药敏试验。结果表明:样本中大肠杆菌检出率为100%、志贺氏菌检出率为77. 78%、沙门氏杆菌检出率为31. 56%,分离菌对恩诺沙星、左氧氟沙星、盐酸环丙沙星、阿奇霉素、诺氟沙星、硫酸新霉素高度敏感。说明引起该地区仔猪细菌性腹泻的主要病原菌为大肠杆菌、志贺氏菌、沙门氏杆菌,而恩诺沙星、左氧氟沙星是防治该地区细菌性仔猪腹泻的敏感药物。     

马链球菌马亚种-MDMC0316株的分离鉴定与遗传进化分析

从内蒙古锡林浩特市某马场中疑似患有马腺疫的马匹下颌部淋巴结中采集脓汁样本,通过实验室常规检测和分子生物学方法进行细菌分离鉴定和遗传进化分析。采用绵羊血琼脂平板划线法分离和纯化培养可疑细菌,并进行革兰染色和镜检;绘制分离菌生长曲线,并对该分离菌进行常规生化试验;对16S rRNA基因使用标准PCR方法扩增和测序并应用Mega 7.0生物软件绘制出该分离菌的系统发育进化树并确定其种属地位;对纯化的分离菌进行药物敏感性试验,拟筛选出辅助治疗效果最佳的抗生素类药物。结果显示,分离菌在绵羊血琼脂平板上呈现典型的β溶血环,染色特点为革兰阳性链球菌,从生长曲线上可以看出分离菌16 h后达到平台期;在生化试验中,分离菌对蔗糖、葡萄糖、麦芽糖、甘露糖利用呈现阳性,而对乳糖、甘露醇、蕈糖、七叶苷、山梨醇等呈现阴性,对精氨酸脱羧酶分解试验呈阳性,而对硝酸盐(还原)试验、胆汁溶菌试验、马尿酸盐分解试验、VP试验呈现阴性,提示分离菌与典型马链球菌马亚种生化试验标准结果吻合;根据16S rRNA基因BLAST比对分析发现,分离菌与NCBI中已注册的马链球菌马亚种序列同源性为100%,遗传进化树上可以看出分离菌与新...     

志贺氏菌检测和分群实时荧光PCR方法的建立

为对志贺氏菌属细菌进行快速、准确检测和分群鉴定,根据志贺氏菌invC、rfc、wbgZ和rfpB基因,分别设计引物和探针,建立了鉴定志贺氏菌属以及福氏志贺氏菌、宋内志贺氏菌和痢疾志贺菌氏菌实时荧光PCR方法,同时将根据ompA基因设计的引物和探针作为内参照,并通过特异性试验和人工接种试验等对该方法进行验证。结果显示,该方法对17株志贺氏菌和19株非志贺氏菌均出现100%的特异性;用增菌肉汤直接进行PCR检测,发现在消毒奶、冰淇淋、酸奶、奶酪、熟肉和香肠等即食食品中的志贺氏菌检出限为1～3 cfu/25 g(mL),在原奶、生肉和奶粉中的检出限分别为≤8 cfu/25 mL、12 cfu/25 g和≤12 cfu/25 g;分离培养后再对可疑菌落进行实时荧光PCR鉴定,发现所有样品的检出限为1～3 cfu/25 g(mL),与传统培养法检出限一致。结果表明,该实时荧光PCR方法是一个快速、敏感、特异的检测方法,适合于志贺氏菌的常规检测分析。     

西宁市售鲤鱼鳃中志贺氏菌的检测及血清学分型

志贺氏菌是最常见的肠杆菌科的病原菌,可引起人类肠道传染病。应用常规细菌分离法对西宁市售的80份鲤鱼鳃样品进行了志贺氏菌的检测,同时对阳性菌株进行了血清学分型。结果显示,在80份鲤鱼鳃样品中共检出志贺氏阳性6份,阳性率为7.5%(6/80)。通过形态学观察、生化试验和血清学鉴定为志贺氏菌A群2株,其血清型为痢疾志贺氏菌1型;B群4株,其血清型为福氏志贺氏菌1b型。此次检测为以后西宁地区志贺氏菌流行病学的调查和相关疾病的防治提供了理论依据。     

獭兔源铜绿假单胞菌的分离鉴定及药敏试验

为了确定某獭兔养殖场獭兔发病的主要病原菌,分析该病原菌的耐药性,本试验对青岛市某獭兔养殖场送检的病死兔进行病理剖检,并从肺脏中分离得到1株细菌,随后进行分离菌形态观察、生化试验、细菌16S rRNA基因测序。该株分离菌为革兰阴性杆菌,博检革兰阴性细菌鉴定系统的生化鉴定结果为铜绿假单胞菌,细菌的16S rRNA基因序列经同源性比较,与铜绿假单胞菌同源性为100%。药敏试验结果表明该株分离菌对多种头孢类、喹诺酮类药物高度敏感。细菌分离鉴定和药敏试验结果为临床用药治疗该病提供参考依据。     

牛源绿脓杆菌的分离鉴定与药敏试验

为了解河北地区绿脓杆菌的感染状况及耐药情况,试验采用传统的细菌分离鉴定、生化鉴定、分子生物学鉴定及药敏试验等方法对该地区6个牛场的83份奶样进行研究。结果表明:从83份牛奶样品中分离出28株绿脓杆菌,其分离率可达到33.73%,分离菌株在普通营养琼脂和十六烷三甲基溴化铵琼脂培养基上的生长状态良好;革兰氏染色镜检分离菌为排列不规则的阴性短杆菌;分离菌的葡萄糖、尿素、枸橼酸盐和硝酸盐还原试验为阳性,麦芽糖、蔗糖、甘露醇、硫化氢试验、V-P试验和吲哚试验均为阴性,根据生化鉴定管说明书鉴定分离菌为绿脓杆菌;绿脓杆菌eta基因PCR扩增和序列测定再次确定该分离菌为绿脓杆菌;所有分离菌均表现出不同程度的耐药,其中对氨苄西林、复方新诺明、链霉素和氟苯尼考等药物的耐药情况严重,而对新霉素、环丙沙星、丁胺卡那及呋喃唑酮等药物敏感。说明绿脓杆菌是引起奶牛乳房炎的主要致病菌,新霉素、环丙沙星、丁胺卡那及呋喃唑酮等药物可作为治疗绿脓杆菌的首选药物。     

禽源产色葡萄球菌的分离鉴定及其耐药性分析

为了解禽源产色葡萄球菌的耐药性,本研究从发病金陵花鸡中分离到1株产色葡萄球菌GZQX2019,并进行细菌分离培养、革兰氏染色镜检、生化试验、16S rDNA序列分析、药敏试验、部分耐药与肠毒素基因检测和动物回归试验。结果显示,分离菌在鲜血琼脂培养基上长出表面凸起、边缘整齐的溶血现象白色菌落;革兰氏染色镜检呈葡萄串状球菌。生化试验结果显示,分离菌蔗糖、精氨酸水解酶、木糖等反应阳性,尿素、木糖醇、麦芽糖等反应阴性。系统进化树显示,分离菌与产色葡萄球菌处于同一分支;药敏试验结果显示,分离菌对红霉素、头孢他啶、多西环素等6种抗菌药耐药,对头孢呋辛、头孢哌酮、新霉素等11种抗菌药敏感。耐药与肠毒素基因检测结果显示,分离菌能检测出热敏感细胞肠毒素基因Alt,耐大环内酯类基因ermB,β-内酰胺类基因VIM、TEM,四环素类基因tetB。动物回归试验结果显示,分离菌对小鼠和雏鸡致病能力不强或者没有致病力。试验成功分离到1株禽源产色葡萄球菌,丰富了禽源产色葡萄球菌的认知。     

肉鸽铜绿假单胞菌分离与鉴定

从南京某肉鸽养殖场死亡病鸽肝脏中分离到1株细菌,经分离培养、形态染色镜检、生化试验、药敏试验、实验动物致病性试验和16S rDNA基因片段PCR检测及基因测序试验,结果表明,该菌可以在普通营养琼脂和SS琼脂平板上生长,革兰染色镜检为革兰阴性菌,生化试验检测结果鉴定值为1 655,符合铜绿假单胞菌生化特性;药敏试验表明,该菌对磷霉素、环丙沙星和阿米卡星高度敏感,接种小鼠能导致其死亡并分离出同一细菌,16S rDNA基因片段测序后与GenBank中登录的铜绿假单胞菌同源性为99%。综合以上结果鉴定该分离菌为铜绿假单胞菌。     

一株驴源奇异变形杆菌的分离鉴定与毒力基因检测

为探明山东聊城地区某驴场驴驹腹泻并死亡的原因,试验采集死亡驴驹的肝脏、脾脏、肾脏等组织病料,采用RT-PCR方法检测病料中的马轮状病毒和马冠状病毒病原,并对病料中的细菌进行分离纯化,通过革兰氏染色、形态特征观察、生化鉴定和16S rDNA基因序列分析对分离菌进行鉴定,并进行药敏试验、毒力基因检测及小鼠致病性试验。结果表明：病料中马轮状病毒、马冠状病毒检测均为阴性,从肝脏组织中分离出一株细菌,该菌在SS琼脂培养基、LB琼脂培养基、血琼脂培养基、MAC琼脂培养基上均能生长,经镜检确定为短杆状或球杆状的革兰氏阴性小杆菌,生化特性与奇异变形杆菌相符。该菌16S rDNA基因序列与GenBank中的10株奇异变形杆菌的核苷酸相似性在99.87%～100%之间,进一步确定该菌为奇异变形杆菌,命名为LC1株(GenBank登录号为ON018729)。LC1株对氨苄西林、诺氟沙星、氧氟沙星、头孢唑啉、头孢哌酮、头孢噻肟、氨曲南、左氧氟沙星、丁胺卡那、大观霉素、庆大霉素、环丙沙星敏感,对红霉素、克林霉素、亚胺培南、多西环素和多黏菌素B耐药,对头孢氨苄中介。在LC1株中共检测到9种毒力基因,分别为MrpA...     

弗格森埃希氏菌的分离与鉴定

为了阐明伴侣动物发生化脓性疾病的原因,试验采用微生物学方法对天津市某动物医院的一例犬子宫蓄脓病例的脓汁进行病原学研究,包括细菌的分离、纯化、涂片和革兰氏染色镜检及基因序列分析。通过观察分离菌菌落形态和染色特征、生化培养鉴定特性、药敏试验测定该菌对不同抗菌药物的敏感程度、PCR方法扩增16S rRNA基因并测定序列、进行同源性分析和基因进化树的构建,确定病原菌的种类。结果表明:该菌在普通琼脂培养基上形成圆形、湿润的菌落,染色镜检为革兰氏阴性杆菌,生化培养特征与埃希氏菌属一致;该菌对链霉素、麦迪霉素、哌拉西啉、妥布霉素、头孢曲松、氧氟沙星、头孢西叮药物高度敏感,对头孢吡肟、头孢呋辛、头孢他啶、氨曲南、头孢哌酮和卡那霉素耐药;该菌16S rRNA基因核苷酸序列的同源性比对与弗格森埃希氏菌最接近,基因进化树构建与弗格森埃希氏菌属在同一分支上。说明该分离菌属于弗格森埃希氏菌。     

1株罗曼粉鸡源申氏不动杆菌的分离鉴定及耐药性分析

为了解贵州省某养殖场罗曼粉鸡发病病原的特征及其耐药性,本试验从病死鸡中分离出一株革兰氏阴性菌,命名为GZ2019,并对其进行纯化培养、生化试验、16S rRNA序列分析、药敏试验及动物回归试验。分离菌在普通琼脂培养基上呈圆形凸起、表面光滑、半透明的灰白色小菌落,鲜血营养琼脂培养基上菌落形态与普通琼脂培养基上的一致,但不溶血;革兰氏染色结果镜检显示,分离菌为成双排列的阴性球杆菌,偶见单个存在或链状排列;生化试验结果显示,分离菌枸橼酸盐利用、过氧化氢酶反应为阳性,硝酸还原、氧化酶、葡萄糖发酵等反应为阴性,无运动性;16S rRNA序列分析结果显示,分离株与不动杆菌的核苷酸同源性在72.6%～99.9%之间,与申氏不动杆菌LUH 4760株(GenBank登录号:AJ275041)、SNSK 752株(GenBank登录号:MG584984)、MCDA01株(GenBank登录号:KY385627)及RP1株(GenBank登录号:MG461636)的核苷酸同源性高达99.9%;药敏试验结果显示,分离菌对头孢曲松和痢特灵敏感,对头孢哌酮、头孢呋辛、头孢他啶等5种药物中度敏感,对新霉素、环丙沙星、羧苄西林等17种药物耐药;动物回归试验结果显示,试验组小鼠隔离饲养1周仅死亡1只,死亡率为20%,表明该分离菌致病性较弱。本试验成功分离出1株低致病性申氏不动杆菌GZ2019,可为鸡源申氏不动杆菌病的预防和治疗提供一定的参考依据。