牛体外受精胚胎卵裂阶段对其体外发育能力影响的研究

将经过体外成熟培养（ＩＶＭ）、体外受精（ＩＶＦ）后获得的牛早期胚胎，按其所处卵裂阶段的不同，划分为２细胞、３～４细胞和５细胞以上３个试验组，在体外条件下继续培养到发育囊胚和孵化囊胚阶段，以观察在胚胎早期，受精卵裂发育的快慢与其后胚胎所获得的继续发育能力的关系。结果显示，牛早期胚胎体外囊胚发育率的高低，与其在体外培养（ＩＶＣ）前卵裂发育的快慢成正比。在ＩＶＦ后４２～４６ｈ处于２细胞、３～４细胞和５细胞以上卵裂阶段的早期胚胎，其囊胚发育率分别为６．５％、２１．４％和４４．９％，差异非常显著（Ｐ＜０．００１）；而经过７～９ｄ的ＩＶＣ后仍滞留在ＩＶＣ前原卵裂阶段，丧失继续发育下去能力的胚胎比率则分别为５１．６％、３２．７％和２５．７％，与其ＩＶＣ前卵裂发育的快慢成反比。在ＩＶＦ后６６～７０ｈ仍处于２细胞和３～４细胞卵裂阶段的早期胚胎，其体外发育能力明显降低，囊胚发育率只有１．３％和８．２％；而滞留胚胎率则分别高达９０．９％和５９．４％。结果表明，牛体外受精早期胚胎卵裂发育的快慢，直接影响到其后体外发育的能力。     

牛体外受精胚胎卵裂阶段对其体发育能力影响的研究

将经过体外成熟培养（ＩＶＭ），体外受精（ＩＶＦ）后获得的牛早期胚胎，按其所处卵裂阶段的不同，划分为２细胞、３～４细胞和５细胞以上３个试验组，在体外条件十继续培养到发育囊胚和孵化囊胚阶段，以观察在胚胎早期，受精卵裂发育的快慢与其后胚胎所获得的继续发育能力的关系。结果显示，牛早期胚胎体囊胚发育率的高低，与其在体外培养（ＩＶＣ）前卵裂发育的快慢成正比。在ＩＶＦ后４２～４６ｈ处于２细胞、３～４细胞和５细胞     

Cdx2和aPKC对胚胎早期发育的影响

尾型同源盒转录因子(Cdx2)能促进早期胚胎滋养外胚层(TE)的发育,并在胚胎发育体节的延伸中发挥着重要的作用;非典型性蛋白激酶(aPKC)则控制着细胞对称性和胚胎的极性,以维持哺乳动物神经细胞的功能和干细胞的分化,同时aPKC还参与调节外胚层细胞的发育,此外,Cdx2的表达水平也影响着aPKC在胚胎卵裂球顶端的定位.论文对Cdx2和aPKC在胚胎发育和极性建立方面的作用机制进行综述.     

Cdx2和aPKC对胚胎早期发育的影响

尾型同源盒转录因子（Cdx2）能促进早期胚胎滋养外胚层（TE）的发育,并在胚胎发育体节的延伸中发挥着重要的作用;非典型性蛋白激酶（aPKC）则控制着细胞对称性和胚胎的极性,以维持哺乳动物神经细胞的功能和干细胞的分化,同时aPKC还参与调节外胚层细胞的发育,此外,Cdx2的表达水平也影响着aPKC在胚胎卵裂球顶端的定位。论文对Cdx2和aPKC在胚胎发育和极性建立方面的作用机制进行综述。     

四个发育基因在蜜蜂幼虫中的整体原位杂交表达谱

本研究通过转录法合成了4个发育基因eve、ben、Dfd和Scr的cRNA探针,并对蜜蜂幼虫进行了原位杂交。结果显示:eve、ben、Dfd和Scr基因在幼虫中都有表达,eve与ben基因是在体节上呈横竖条纹状表达而dfd与Scr基因是在体节两侧边缘呈点状表达。结果表明这4个基因在蜜蜂幼虫阶段也参与了体节的发育和形态建成。基于此,还对胚胎整体原位杂交中的一些技术细节,如探针标记、探针保存、信号检测、固定时间、消化时间和操作手法等进行了讨论。     

家禽胚胎的早期发育及影响其死亡率的因素

一．引言家禽胚胎死亡并不是在整个孵化过程中随机地死亡，一般而言，胚胎在孵化的早期及后期阶段的死亡率要高于中间阶段。根据观察统计发现，鸡胚在孵化过程中的第２至第４天死亡机率较高，而火鸡胚胎在第３天至第６天死亡机率较高。家禽胚胎在早期发育过程中在生理及遗传方面要发生许多变化。二．胚胎早期发育１．排卵前发育自卵子在输卵管漏斗部开始受精就意味着胚胎开始发育，在卵排出以前，这枚胚胎将在体内４１．５℃的环境下发育２４－２６小时（禽卵经由输卵管排出所需的时间）。第一次卵裂大约在输卵管的峡部，也就是卵沿输卵管下…     

精卵共孵育时间等因素对绵羊卵母细胞体外发育的影响

本试验通过研究精卵作用时间、培养密度、气相环境对卵裂率和囊胚发育率的影响及早期发育快慢与胚胎发育能力的关系,得出:精卵共作用12 h和18 h,不影响囊胚率(P>0.05),但受精18 h的卵裂率明显高于受精12 h的卵裂率(P<0.05);对于四孔板而言,培养密度在50～80枚/孔之间,不影响胚胎后期发育率(P>0.05);早期用5%CO2,空气为平衡气,后期用5%CO2、5%O2,N2为平衡气的气相条件的卵裂率、囊胚率分别极显著高于单独使用这两种气相环境的囊胚率和卵裂率(P<0.01);早期发育较快的胚胎后期发育的能力更强(P<0.01)。     

聚合嵌合法制作黄牛和水牛种间嵌合胚的初步研究

通过聚合嵌合法初步建立一套黄牛和水牛种间嵌合的程序与方法。聚合嵌合法采用链酶蛋白酶消化透明带或用机械剥离法去除透明带，然后在含有100 μg/ml PHA的培养液中聚合形成嵌合胚。结果发现， 8-细胞黄牛胚胎聚合水牛桑椹胚与黄牛囊胚聚合水牛桑椹胚相比，聚合胚存活率和囊胚发育率均无显著差异（P>0.05）。采用显微手术法分离黄牛和水牛8-细胞胚胎卵裂球进行聚合，聚合率为92.3%，囊胚发育率为58.3%，与用0.25%链酶蛋白酶分离胚胎卵裂球进行胚胎聚合的聚合率（86.7%）和囊胚发育率（46.2%）均无显著差异（P>0.05）。以上结果表明：①水牛和黄牛胚胎通过卵裂球聚合获得的种间嵌合胚胎能继续发育；②胚胎聚合前的发育阶段对其聚合成功率和随后的胚胎发育无明显影响。③胚胎卵裂球的分离方法（显微手术法和酶消化法）对其聚合率和囊胚发育率无明显影响。     

辽宁绒山羊羔羊体外胚胎生产技术的研究

以4~8周龄的辽宁绒山羊母羔为研究对象,研究不同年龄阶段羔羊卵泡发育数量和发育质量的变化,同时还比较了不同基础液作为受精液对体外受精和早期卵裂的影响,并尝试研究了在早期胚胎的发育培养液中添加EDTA的效果。结果表明:6~8周龄母羔的卵母细胞体外成熟率和受精率均显著高于4~6周龄母羔;利用SOF液作为受精体系的基础液时体外受精的效果更好,卵裂率达42.47%;在早期胚胎的发育液中添加10μmol/L EDTA可有效提高16细胞以上的胚胎数。     

鸭胚胎后期腿肌成肌细胞增殖和肌纤维发育特点研究

本研究以18、21、24胚龄和27胚龄的鸭胚为实验对象,研究鸭胚胎后期腿肌成肌细胞增殖和肌纤维发育的特点。采用BrdU标记鸭胚,用免疫荧光法检测腿肌成肌细胞的增殖情况,同时制作石蜡切片进行H-E染色,照相并观察腿肌肌纤维发育规律。结果表明:鸭胚后期腿肌发育明显,全胚重以47.91%的平均速率增长,而腿肌以78.21%的平均速率增长;4个阶段的肌纤维直径、横切面积和单位面积内肌纤维根数均差异显著(P<0.05),而单位面积细胞核数、BrdU标记率差异不显著(P>0.05),但以21胚龄时BrdU标记率最高。研究结果显示,鸭胚胎后期腿肌成肌细胞增殖速率稳定、不断融入肌纤维,导致肌纤维肥大并快速发育,且21胚龄左右是鸭胚胎期腿肌发育的高峰时期。     

昆明小鼠不同性别早期胚胎体外培养发育潜力观察

自主设计2对引物,提取已知性别小鼠肝细胞DNA,扩增雄性小鼠特有的Sry基因及雌、雄小鼠共有的ZFX基因,建立双重PCR性别鉴定方法.提取小鼠早期8细胞胚胎单卵裂球、双卵裂球DNA,分别进行双重PCR性别鉴定,选择出早期8细胞胚胎的适宜模板量;将已测性别的8细胞胚胎按照雌、雄性别分开培养,观察统计雌、雄8细胞胚胎发育至囊胚的比率.试验结果显示,与单个卵裂球DNA模板量相比,双卵裂球的模板量检出率高,两者之间差异显著(75.00%Vs 93.33%,P<0.05);经过性别鉴定的雄性8细胞胚胎比雌性8细胞胚胎发育至囊胚的比率高,两者之间差异显著(53.33%Vs 33.33%,P<0.05).结果表明,采用双重PCR性别鉴定方法,以双卵裂球的DNA量为模板能够有效的对小鼠早期8细胞胚胎进行性别鉴定;雄性胚胎在体外培养条件下比雌性胚胎具有更好的发育潜力.     

高邮鸭和金定鸭胸肌早期发育及MyoD1基因表达分析

 
采用qPCR分析生肌调节因子MyoD1基因在高邮鸭和金定鸭胚胎期及初生早期(13、17、21、25、27胚龄和出雏后7日龄)胸肌发育中的表达模式以及与胚胎和胸肌发育的相关性。结果表明,MyoD1 mRNA在两个品种鸭胸肌早期发育中表现出一致的表达规律,均呈“波浪形”,在13胚龄时表达量相对较高,17胚龄时下降,21胚龄时上升到最高,随后下降,出雏后又维持较高水平;品种间比较结果显示除了在25胚龄时金定鸭胸肌中MyoD1 mRNA表达量稍低于高邮鸭,在其他所检测的胚龄/日龄中,金定鸭胸肌中MyoD1 mRNA表达量均高于高邮鸭胸肌中的表达量(P>0.05);高邮鸭胸肌MyoD1 mRNA表达与胚胎和胸肌发育无显著相关性,而金定鸭胸肌中MyoD1 mRNA的表达与其胚胎和胸肌发育呈强负相关(P胚重=0.048;P胸肌重=0.006)。MyoD1基因参与鸭胚胎期及出雏早期胸肌的发育,胸肌中MyoD1基因表达分析研究为进一步深入研究MyoD1基因在胚胎期胸肌发生过程及其调控机理中的功能提供一定的理论依据     

Cdc25B mRNA在早期鸡胚中的动态表达

本试验旨在研究Cdc25B mRNA在早期鸡胚中的时空表达模式。通过分子克隆的方法获得Cdc25B基因特异性目的片段,并用体外转录的方法合成了Cdc25B RNA探针,通过全胚胎原位杂交的方法检测了早期不同发育阶段鸡胚中的Cdc25B mRNA水平。结果表明,Cdc25B的杂交信号主要分布于中枢神经系统(CNS)、体节和肢芽的顶端,在尾部神经上皮中缺乏杂交信号。早期阶段,Cdc25B的杂交信号不对称地分布在亨氏节的左侧。随着胚胎的发育,Cdc25B的杂交信号逐渐增强,并且在即将封闭的神经管中,杂交信号呈现出腹背递减的浓度梯度。然而,在早期各个阶段,脊索都是阴性的。这些结果提示,Cdc25B在前、后期的CNS、体节和肢芽发育中可能发挥不同的功能,这种功能的改变可能与Cdc25B的表达浓度有关。此外,鸡胚胎内部器官的左右不对称性发育可能是Cdc25B与其它基因共同调控的结果,这些调控发育的机制可能是Cdc25B蛋白参与了细胞周期进程,调控细胞增殖或分化。     

氯化铝对非洲爪蟾胚胎神经发育的影响

为探讨氯化铝对非洲爪蟾胚胎神经发育的影响,以不同浓度(1和2 mmol/L)AlCl3溶液处理原肠期的胚胎,采用免疫组化方法检测铝处理对胚胎体节发育的影响;采用整胚原位杂交方法检测神经发育标志基因Sox3、NeuroD的表达;利用BrdU掺入法检测细胞增殖;利用TUNEL方法检测细胞凋亡。结果显示:氯化铝处理的胚胎体轴弯曲、缩短,神经褶未完全融合。铝处理后胚胎体节发育未受明显影响;神经发育相关基因sox3、neuroD的表达明显减少;细胞增殖减少,凋亡增加。结果提示:氯化铝通过抑制增殖,促进凋亡而影响非洲爪蟾胚胎神经发育。     

家畜的早期胚胎生理

“受精”还不能说就是“受胎”,因为从受精排卵到附植的过程中是十分复杂的。不少受精卵没有能发育成胎儿。为了提高受胎率,防止胚胎早期死亡,应该知道早期胚胎的生理。(一)早期胚胎的发育受精完成以后,当合子一旦开始发育,就称为早期胚胎。早期胚胎的发育,可分为以下三期: 1.桑椹期:第一次卵裂,合子分为二个分裂球之后,继续进行分裂,但分裂球并不同时     

卵泡抑素对牛胚胎早期发育的影响

利用添加外源性卵泡抑素或抑制卵泡抑素基因表达的方法,以牛受精胚胎为研究对象,结果显示,胚胎阶段适当的添加卵泡抑素,可以加快胚胎发育,不但提高卵裂率,还可以在受精后7d提高囊胚发育率,这其中10μg/L的卵泡抑素为最佳添加量,达到35%的囊胚率。研究还发现,早期阶段沉默卵泡抑素基因,不会影响囊胚率,与处理组无显著差别。结果表明,可能在早期的胚胎发育的最初阶段,卵泡抑素并不是必须的,但如果外源性的添加适量的卵泡抑素可以在正常的基础上提高发育率。     

昆明小鼠早期胚胎体外发育阻滞原因分析

为了分析小鼠早期胚胎在体外发育阻滞的原因 ,建立早期胚胎体外培养系统 ,应用几种不同的培养系统对昆明小鼠单细胞胚胎在体外培养了 96～ 12 0 h。结果表明 ,小鼠单细胞胚胎在 M1 6 和 BWW培养液中卵裂均受到阻滞 ,且两者之间差异不显著 (P>0 .0 5 ) ;CZB和 HTF培养液能有效地克服小鼠胚胎的 2 -细胞发育阻滞 ,与 M1 6 和 BWW相比 ,2 -细胞卵裂率和囊胚率均存在显著性差异 (P<0 .0 1) ;在 M1 6 培养液中添加牛磺酸对早期胚胎发育有促进作用 (P<0 .0 1) ;小鼠早期胚胎在 CZB和牛输卵管上皮细胞 (COEC)共培养体系中的卵裂率较对照组明显提高 (P<0 .0 5 )     

猪胚胎早期卵裂时间与其发育潜能关系的初步研究

旨在探讨初次卵裂时间对猪孤雌胚胎发育潜能及其基因相对表达水平的影响。本试验从健康母猪卵巢上抽取卵母细胞进行体外成熟培养,将猪孤雌激活胚胎分为早期卵裂组(16～22 h)与晚期卵裂组(26～32 h)统计比较卵裂率和囊胚率,并对囊胚的多能性相关基因Oct4、Sox2、Klf4等和凋亡相关基因Bcl-xl、Bax、Caspase-3的相对表达水平进行分析检测。结果表明,猪孤雌激活胚胎在16～22 h发生卵裂的为50%～60%,而26 h之后发生卵裂的不到20%,在18 h前完成第一次卵裂的胚胎囊胚发育率为79%,42 h后发生初次卵裂的胚胎无法发育至囊胚期。猪孤雌激活胚胎早期卵裂组的囊胚发育率显著高于晚期卵裂组(P0.05)。早期卵裂组囊胚的Oct4、Nanog、Sox2、Klf4基因的表达量显著高于晚期卵裂组(P0.05),Oct4、Sox2、Klf4基因的相对表达量极显著高于晚期卵裂组(P0.01),Bax和Caspase-3基因的相对表达水平极显著低于晚期卵裂组(P0.01),而Bcl-xl作为保护因子其表达量相对于晚期卵裂胚胎(26～32 h)显著上调(P0.05)。结果显示,初次卵裂时间较早的猪孤雌激活胚胎发育潜能显著高于较晚卵裂胚胎,其囊胚多能性相关基因表达上调,凋亡相关基因表达下调,卵裂时间可作为鉴定猪孤雌激活胚胎发育潜力的重要参数。     

PLCγ1基因对绵羊早期胚胎体外发育的影响

旨在探究磷脂酶Cγ1（phospholipase Cgamma 1,PLCγ1）基因对绵羊早期胚胎体外发育的影响,为揭示PLCγ1基因在早期胚胎发育过程中的作用机制奠定基础。本研究选取包裹3层以上颗粒细胞的绵羊卵母细胞为试验材料,体外培养成熟后将其分为两组,利用显微注射技术将PLCγ1基因导入MⅡ期（减数第二次分裂中期）卵母细胞（n=127）中为试验组,以显微注射空载体pcDNA3.1-EGFP作为对照组（n=120）,经48 h后统计其卵裂率;并利用Ca²⁺探针Rhod 2-AM监测MⅡ卵母细胞和显微注射后16、48、72、96、120 h时各时期卵母细胞以及早期胚胎内Ca²⁺波动。结果显示,PLCγ1基因显微注射后卵母细胞被激活,卵裂率为（（19.67±0.2）%,P<0.01）,桑椹胚发育率为（（9.00±0.17）%,P<0.05）;PLCγ1基因注射后,卵母细胞和早期胚胎不同发育时期有Ca²⁺浓度变化,可观察发现Ca²⁺主要分布在胞质中且注射48 h时可达到峰值（P<0.01）。结果表明,PLCγ1基因可以引起绵羊卵母细胞发育过程中发生Ca²⁺振荡,启动其卵裂,并促使早期胚胎的继续发育。     

猪孤雌激活早期胚胎线粒体分布及mtDNA拷贝数变化的研究

本研究通过线粒体分子探针标记技术检测孤雌激活早期胚胎线粒体的分布变化,运用实时荧光定量PCR技术检测mtDNA拷贝数的变化,揭示早期胚胎发育过程中线粒体分布、mtDNA拷贝数变化趋势。结果表明,成熟卵母细胞电激活后,由2-细胞胚胎开始,卵裂球内线粒体分布均匀且密集,每个细胞均有分布,卵裂球之外的空隙未见线粒体分布,直到囊胚形成,线粒体均有分布。孤雌激活4-细胞胚胎mtDNA拷贝数显著高于8-细胞胚胎mtDNA拷贝数(907210.77±145520.77,186224.33±103308.00,P<0.05),但显著低于2-细胞胚胎、桑椹胚、囊胚的mtDNA拷贝数(1563422.54±224666.51、1697626.25±176999.53和1752301.29±101146.64,P<0.05)。孤雌激活扩张囊胚mtDNA拷贝数最高,为2812545.67±156819.31,显著高于其他发育时期胚胎的mtDNA拷贝数(P<0.05)。由此可见,孤雌激活早期胚胎发育进程中线粒体分布及mtDNA拷贝数会发生变化。