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以差速离心和密度梯度离心法纯化的新城疫病毒(NDV)F_(48)E_6株免疫接种 BALB/C 小鼠,取其脾脏制备脾细胞,与 SP2/0骨髓瘤细胞融合,经用 ELISA 检测和有限稀释法克隆化,筛选出3株对 NDV 特异的单克隆抗体(McAb)杂交瘤细胞。其产生的 McAb 仅与 NDV 发生特异性反应。3个 McAb 分别属 IgG_1和 IgG_3,所有McAb 均不具有沉淀反应特性. 相似文献
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<正>新城疫(Newcastle disease,ND)是由新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)引起的禽类的一种高度接触性、烈性传染病,给世界养禽业造成严重的经济损失和危害。以往文献报道水禽为NDV的自然贮存宿主,可以感染但不发病[1]。然而, 相似文献
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新城疫病毒融合蛋白单克隆抗体的研制 总被引:5,自引:0,他引:5
以纯化的新城疫病毒(NDV)R8E9免疫BALB/C小鼠,最后1次免疫后3d取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)融合。以纯化的NDV和表达NDV融合蛋白(F)的重组鸡痘病毒(rFPV)分别建立了间接酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫荧光(IIF)方法,并用于单抗筛选的第一、二检测系统。经反复筛选并3次亚克隆后共获得7株针对F蛋白的单克隆抗体,它们的生物学特性和在不同反应系统中的敏感性各有不同。用这7株单抗对国内外不同时期分离的:NDV毒株进行排谱发现,单抗几乎可以与所有毒株反应,表明所得的单抗都是针对NDVF蛋白的抗原保守区。 相似文献
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根据1株 ND 单抗与 NDV 分离物在 IIF 试验中的反应性,将8株 NDV 分离物划分为 a、b、c、d、e、f6个不同反应谱组,此反应谱与对照株(F_(48)E_8、NM、I 系、I 系和 La Sota株,)和11株 ND 单抗之反应谱各不相同。HI 试验表明,8株 NDV 分离物的 HA 活性都能被鸡新城疫阳性血清所抑制:大部分 NDV 分离物的 HA 活性能被ND 单抗 F_(2(?)-5-8-4)、L_(2-3-1)、Lc_(24-11)、L_(15-(5))、LE_(22-3)和 M_(10)所抑制;部分 NDV 分离物的 HA 活性能被 ND 单抗LD_(2-3-(7))和 L_(10-4)所抑制;8株 NDV 分离物的 HA 活性均不能被 ND 单抗 FHY_(33-29-3)所抑制。以上结果表明,8株 NDV 分离物之间以及与 NDV 对照株间存在抗原性差异。 相似文献
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江苏农学院预防兽医学教研室家畜传染病学课程组,应用淋巴细胞杂交瘤技术成功地建立了能分泌对鸡新城疫病毒特异的单克隆抗体的杂交瘤细胞系4个,分别命名为NDV—Hy—23—12,NDV—Hy—23—14,NDV—Hy—33—17和 NDV-Hy—33—19。 相似文献
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为制备外源病毒检验用抗鸡新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)的特异性血清,对300只3~4周龄的SPF鸡进行了基础免疫和加强免疫。最后一次免疫后21 d采血并分离血清,血清经混合、分装、冷冻真空干燥后,对其进行无菌检验、外源病毒检验、剩余水分测定、中和效价测定和特异性检验。结果表明,制备的抗NDV特异性血清无菌检验、外源病毒检验和剩余水分测定均符合现行《中华人民共和国兽药典》规定;血清中和效价为1∶2 089,与NDVLa Sota株毒种中和指数为108.2,与其它禽类病毒的中和指数均不大于10,通过AGP、ELISA、HI等试验确定血清中不含其他禽源外源病毒抗体。该研究为鸡新城疫活疫苗或毒种的外源病毒检验提供了具有良好特异性和高效价的中和用血清。 相似文献
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鸡新城疫是危害我国养禽业的一种严重的烈性传染病。经过多年的综合防制 ,已经基本控制了该病的爆发 ,典型新城疫的发生已逐渐减少。但是 ,1999年 10月以来 ,一些地区相继发生一种以呼吸道、消化道黏膜出血为典型症状并致部分鸡死亡的急性传染病 ,严重影响了该地区养鸡业的发展 ,给养鸡户造成很大的经济损失。为了尽快查明病因 ,以便制定有效的防制措施来控制该病的流行 ,我们对该地区采集的病料进行了病原分离鉴定 ,并对分离毒株的生物学特性进行了测定 ,现将试验方法和结果报道如下。1 材料和方法1.1 材料SPF鸡胚 ;1日龄SPF雏鸡 (自… 相似文献
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为了对目前流行的鸭新城疫进行快速诊断,应用蔗糖密度梯度离心纯化后的鸭新城疫病毒免疫6周龄雌性Balb/c小鼠,取免疫后小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合.采用ELISA方法筛选阳性细胞克隆,经3次亚克隆后获得一株能稳定分泌鸭新城疫病毒特异性单克隆抗体的细胞株2C1.以PEG纯化后的2C1腹水为捕获抗体,辛酸-硫酸铵纯化的兔抗鸭新城疫病毒多克隆抗体为第二抗体,HRP标记的羊抗兔抗体作为酶标抗体,建立了检测鸭新城疫病毒抗原的双抗体夹心ELISA方法.结果表明,当2C1包被量为4μg/孔,鸭新城疫病毒1:10稀释,兔抗鸭新城疫病毒多抗作用量为0.1 μg/孔,HRP标记的羊抗兔二抗1:10 000倍稀释,每次作用时间为1h时,P/N比值最高,且阳性OD值最接近1.0.试验表明,该方法特异性好,不与IBV、ARV、GPV、DPV、DHV尿囊液及H5、H9标准阳性抗原发生反应;可以检测出0.2 μg纯化病毒,比传统的HA试验的敏感性至少高64倍;批间和批内变异系数均小于10%.本研究建立的双抗体夹心ELISA方法为鸭新城疫病毒的快速诊断奠定了基础. 相似文献
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从发病商品肉鸽组织中分离到3株新城疫病毒,对其基因序列和感染力进行测定和分析。用RT-PCR对3株病毒F基因进行了扩增,测序,3株新城疫病毒的F基因同源性比较及进化分析结果表明,3株病毒均属于Ⅵb亚型,且与2011年比利时分离株亲缘关系较近,F蛋白裂解位点符合强毒特征;肉鸽攻毒试验进一步证实了3株新城疫病毒的高致病性,肉鸽感染新城疫病毒后通过呼吸道及消化道途径排毒,具有高度接触传染性。试验结果证明了鸽感染新城疫病毒后的排毒时间及方式,为鸽新城疫的及早发现与防控提供了依据。 相似文献
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新城疫病毒强毒株的分离与鉴定 总被引:33,自引:2,他引:33
从发病率为100%、病死率为97%的鸡群中分离到1株病毒。该病毒凝集鸡红细胞的作用可被新城疫标准阳性血清所抑制,证明所分离的毒株为新城疫病毒。鸡胚半数致死量、最小致死量致死鸡胚的平均时间、1日龄雏鸡脑内致死指数、6周龄雏鸡静脉致死指数、血凝解脱及血凝素热稳定性等试验表明,分离毒为新城疫病毒强毒株,其毒力比标准强毒F48E8株还强。血凝抑制试验和中和试验表明,分离毒的血凝性与F48E8相同,但中和特性与F48E8有较大差异 相似文献
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鸭新城疫病毒山东株的分离鉴定 总被引:9,自引:6,他引:3
笔者从病鸭体内分离到一株病毒,通过试验确定为新城疫病毒。参照世界动物卫生组织(OIE)规定的新城疫毒力判定的标准和方法,测定该分离株的1日龄雏鸡脑内致病指数(ICPI)和6周龄鸡静脉致病指数(IVPI)分别为1.79和2.45。采用已经发表的鸡新城疫病毒序列设计引物,应用RT-PCR技术扩增鸭源新城疫病毒的F基因,并将其克隆至载体上,然后进行了核苷酸序列、氨基酸序列测定,结果表明该分离株为新城疫强毒株。 相似文献
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新城疫病毒山东强毒株的分离鉴定 总被引:14,自引:1,他引:14
从山东流行烈性传染病的鸡群中分离出7株具有血凝活性的病毒,该7株病毒的血凝活性均能被新城疫La Sota株标准阳性血清所抑制,但病毒不能被中和,仍能致死鸡胚。经分离鉴定,分离毒均为新成疫病毒株。通过鸡胚半致死量(ELD50)、最小致死量致鸡胚的平均时间(MDT)、1日龄雏鸡脑内致死指数(ICPI)、6周龄雏鸡静脉致死指数(IVPI)、血凝解脱及血凝素稳定性等试验表明:7株分离病毒均为新城疫病毒强毒性,其毒力与标准强毒株F48E9株相似。 相似文献
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不同基因型新城疫病毒强毒株对鸡的致病性 总被引:3,自引:1,他引:3
就不同基因型新城疫病毒强毒株对鸡的致病性进行了比较。用3种基因型(Ⅵg、Ⅶd亚型、Ⅸ型)新城疫病毒强毒株分别人工感染25日龄雏鸡,结果各株病毒接种鸡均100%发病、100%死亡,表现出嗜内脏型新城疫病毒感染引起的典型的新城疫症状和病理变化。免疫组化检测发现.攻毒鸡多种组织器官中能检测到病毒抗原,在能检测到病毒抗原的器官中,病毒抗原主要定位于淋巴细胞、网状细胞、巨噬细胞、肝细胞及各种上皮细胞的胞浆内;新城疫病毒对肠相关淋巴组织的亲嗜性优先于附近的上皮。本试验结果表明.基因Ⅵg、Ⅶd亚型、Ⅸ型新城疫病毒强毒株对鸡均具有高度致病性。 相似文献
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应用纯化的新城疫病毒(NDV)F48E9株免疫BALB/C小鼠,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经间接ELISA法检测筛选到42株分泌抗NDV单克隆抗体的杂交瘤细胞株。并对各株单克隆抗体的免疫球蛋白亚类、血凝抑制效价(HI)、溶血抑制效价(HLI)、ELISA效价及中和效价加进行了测定,结合单克隆抗体的Westernblot反应结果鉴定出抗NDVHN蛋白11株,抗F蛋白20株 相似文献