PPARα siRNA干扰对骡鸭原代肝细胞脂质代谢基因表达影响研究

为揭示PPARα基因对骡鸭肝细胞PPAR信号通路中脂质代谢基因的调控作用,试验以16日胚龄的骡鸭为材料,用Ⅳ型胶原酶法分离原代肝细胞,分离的原代肝细胞经形态学观察、糖原染色和白蛋白(ALB)检测鉴定后用于后续试验;构建4对干扰PPARα基因的siRNA,分别转染骡鸭原代肝细胞,转染12 h后用荧光显微镜检测转染效率,转染48 h后用油红O染色检测肝细胞脂质分泌情况,筛选干扰效率最高的siRNA,qRT-PCR检测该siRNA干扰PPARα基因后PPAR信号通路上脂质代谢相关基因的表达情况。结果显示:Ⅳ型胶原酶法分离的骡鸭原代肝细胞活性较好,ALB的分泌量维持在较高水平,糖原染色发现大量细胞存在双核和多核状态,干扰效率最高的PPARα-1344组与对照组相比脂质分泌量减少,原代肝细胞中LPL、FABP、FAS和ACBP基因表达量极显著下调(P0.01),SCD基因表达量显著下调(P0.05),APO-A1、CYP7A1和CPT1基因表达量差异不显著(P0.05)。研究表明:分离的骡鸭原代肝细胞纯度好、活性高,PPARα基因可能促进脂肪在肝脏中沉积,与骡鸭的肥肝形成密切相关。     

三碘甲状腺原氨酸注射对鸭早期生长发育影响的研究

为研究甲状腺激素对鸭早期生长发育的影响,试验通过在鸭种蛋蛋清中分别注射100μL含0(对照组)、0.25μg三碘甲状腺原氨酸(T3组)的生理盐水,检测鸭胚胎期至出雏后14日龄时,体重、体长、不同组织器官重的变化规律。结果显示,25日胚龄,T3组脑重显著高于对照组(P0.05);27日胚龄,T3组的各组织器官重均出现升高趋势,其中体重、胸肌重显著高于对照组(P0.05)。通过生长分析首次发现T3减缓胚胎发育后期胸肌的负生长现象。出雏后7日龄,体长、脑重和肝脏重在T3组显著高于对照组(P0.05),14日龄,各组织器官重均出现下降趋势,其中,T3组体重、体长和腿肌重显著低于对照组(P0.05)。研究表明种蛋内注射T3可以促进鸭胚生长发育,抑制雏鸭生长;T3对鸭组织器官重的影响具有时间依赖性。     

铁水平和孵育时间对原代培养肉鸡鸡胚肝细胞中铁含量及含铁酶活性、基因表达和蛋白表达的影响

本试验旨在研究铁水平和孵育时间对原代培养肉鸡鸡胚肝细胞中铁含量及含铁酶活性、基因表达和蛋白表达的影响。采用5×3两因子完全随机设计,铁水平分别为0、0.25、0.50、0.75、1.00 mmol/L,孵育时间分别为24、48和72 h,共形成15个组,每组6个重复。结果表明:1)铁水平、孵育时间及两者的互作对肝细胞铁含量有显著影响(P0.05)。24、48和72 h时,0.25、0.50、0.75、1.00 mmol/L铁水平组肝细胞中铁含量均显著高于0 mmol/L铁水平组(P0.05)。2)铁水平和孵育时间对肝细胞中胞琥珀酸脱氢酶(SDH)和细胞色素c氧化酶(COX)活性有显著影响(P0.05)。与0 mmol/L铁水平组相比,0.25、0.50、0.75和1.00 mmol/L铁水平组肝细胞中SDH活性显著降低(P0.05);24 h肝细胞中SDH活性显著高于48 h(P0.05),而72 h又显著高于24和48 h(P0.05)。与0 mmol/L铁水平组相比,0.75和1.00 mmol/L铁水平组肝细胞中COX活性显著提高(P0.05);24和48 h肝细胞中COX活性显著高于72 h(P0.05)。3)铁水平、孵育时间及两者的互作对肝细胞中SDH、过氧化氢酶(CAT)、COX7A2L和铁蛋白重链1(FTH1)的mRNA表达水平有显著影响(P0.05),铁水平及铁水平与孵育时间的互作对肝细胞中COX1的mRNA表达水平有显著影响(P0.05)。4)铁水平和孵育时间对肝细胞中COX1的蛋白表达水平有显著影响(P0.05),铁水平及铁水平与孵育时间的互作对肝细胞中FTH1的蛋白表达水平表达有显著影响(P0.05)。24和72 h肝细胞中COX1的蛋白表达水平显著高于48 h(P0.05),1.00 mmol/L铁水平组肝细胞中COX1的蛋白表达水平显著高于其他铁水平组(P0.05)。由此可见,铁水平和孵育时间可影响原代培养肉鸡鸡胚肝细胞中铁含量,SDH、CAT和COX的活性、基因表达,以及FTH1的基因表达。综合考虑以上指标,适宜铁的水平应为0.50 mmol/L,孵育时间为24 h。     

高邮鸭和金定鸭胸肌早期发育及MyoD1基因表达分析

 
采用qPCR分析生肌调节因子MyoD1基因在高邮鸭和金定鸭胚胎期及初生早期(13、17、21、25、27胚龄和出雏后7日龄)胸肌发育中的表达模式以及与胚胎和胸肌发育的相关性。结果表明,MyoD1 mRNA在两个品种鸭胸肌早期发育中表现出一致的表达规律,均呈“波浪形”,在13胚龄时表达量相对较高,17胚龄时下降,21胚龄时上升到最高,随后下降,出雏后又维持较高水平;品种间比较结果显示除了在25胚龄时金定鸭胸肌中MyoD1 mRNA表达量稍低于高邮鸭,在其他所检测的胚龄/日龄中,金定鸭胸肌中MyoD1 mRNA表达量均高于高邮鸭胸肌中的表达量(P>0.05);高邮鸭胸肌MyoD1 mRNA表达与胚胎和胸肌发育无显著相关性,而金定鸭胸肌中MyoD1 mRNA的表达与其胚胎和胸肌发育呈强负相关(P胚重=0.048;P胸肌重=0.006)。MyoD1基因参与鸭胚胎期及出雏早期胸肌的发育,胸肌中MyoD1基因表达分析研究为进一步深入研究MyoD1基因在胚胎期胸肌发生过程及其调控机理中的功能提供一定的理论依据     

鸭发育早期骨骼肌NFATc3 mRNA差异表达及其与生长性状的相关性研究

为研究不同品种鸭胚胎期和出雏早期骨骼肌中NFATc3基因mRNA表达规律及其与生长发育的相关性,运用荧光绝对定量PCR技术检测了生长速度差异较大的高邮鸭和金定鸭13、17、21、25、27胚龄和7日龄胸肌和腿肌中NFATc3 mRNA的表达水平。结果表明胸肌和腿肌NFATc3 mRNA在两鸭品种中均具有相似的表达模式,不存在品种效应,胸肌和腿肌NFATc3 mRNA的表达均是13胚龄时表达量最高,显著高于其它各胚龄或日龄(P0.05);相关性分析结果表明两个品种鸭骨骼肌NFATc3 mRNA表达量与其组织重、体重均呈极显著负相关(P0.01),而与肌肉组织中IGF-Ⅰm RNA的表达量呈极显著正相关(P0.01)。鸭骨骼肌中NFATc3主要在早期的肌纤维生成中起作用,与IGF-Ⅰ可能共同参与了对骨骼肌生长发育的调节。     

ATGL在鸡胚出壳前后肝脏中的表达变化及延迟喂食的影响

研究旨在探索鸡胚出壳前后ATGL m RNA在肝脏中的表达变化及延迟喂食对刚出壳雏鸡ATGL m RNA表达的影响。Ross肉鸡受精蛋120个,分别于孵化的第15(E15)、18(E18)、21胚龄(E21)和出壳后24、48、72、96和120 h,收集鸡胚或雏鸡,采集肝脏,采用RT-PCR方法,检测鸡胚出壳前后ATGL在肝脏中的表达。出壳后剩余的雏鸡随机分为两组,一组正常饲养作对照,另一组饥饿72 h(正常饮水),然后开始喂食,分别在饥饿的0、24、48、72 h(F0、F24、F48、F72)和开始喂食的4、8、12、24、48 h(SF4、SF8、SF12、SF24、SF48)取6只雏鸡,采集肝脏,采用RT-PCR方法检测延迟喂食对雏鸡肝脏ATGL表达的影响。从E15~E18,肝脏中ATGL m RNA的表达量随着胚龄的增加迅速增加,E18达到最高,为2.52±1.06(P0.05);到E21出壳时,ATGL m RNA的表达量仅为E18的36.11%。鸡胚出壳后肝脏中ATGL m RNA的表达量持续下降,到出壳后24 h达到最低,为0.11±0.02(P0.05);出壳后48 h的表达量稍高于出壳时水平,而后逐渐接近于出壳水平并趋向稳定。延迟喂食24 h,肝脏ATGL m RNA的表达量显著高于对照组(P0.05)。而开始喂食12 h后,肝脏ATGL的表达量显著低于对照组(P0.05),继续喂食,ATGL m RNA的表达量上升。肝脏中ATGL m RNA的表达量随鸡胚和雏鸡的发育而发生变化,而且短时间的喂食变化对肝脏脂肪代谢有较大影响。     

苏氨酸对体外培养感染伪狂犬病毒猪空肠上皮细胞免疫相关基因表达的影响

本研究旨在探讨苏氨酸对体外培养感染伪狂犬病毒(PRV)猪空肠上皮细胞免疫相关基因表达的影响.试验选用IPEC-J2细胞为细胞模型,分为4个处理,对照组为未经PRV感染、苏氨酸浓度53.45 mg/L,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组为试验组,均经PRV感染,苏氨酸浓度分别为53.45、106.90、160.35 mg/L,每组3个重复,每个重复4孔.37℃、5％ CO2培养后1、6、12、24 h每组取1个重复采集细胞,用实时荧光定量PCR方法检测白介素1β(IL-1β)、白介素6(IL-6)、白介素15(IL-15)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)及转化生长因子β1( TGF-β1) mRNA表达量.结果表明:1)PRV感染极显著降低了IL-1β mRNA表达量(P =0.001),苏氨酸水平(P=0.830)、时间与苏氨酸水平交互作用(P =0.249)的影响均不显著;2)PRV感染对IL-6mRNA表达量影响不显著(P =0.162),随苏氨酸水平升高,IL-6 mRNA表达量极显著地先升高后降低(P=0.002),时间与苏氨酸水平交互作用的影响显著(P =0.012);3)PRV感染极显著提高了IL-15 mRNA表达量(P =0.000),提高苏氨酸水平极显著提高了IL-15 mRNA表达量(P=0.000),时间与苏氨酸水平交互作用的影响亦极显著(P =0.000);4) PRV感染极显著提高了TNF-α mRNA表达量(P=0.000),苏氨酸水平(P =0.113)、时间与苏氨酸水平交互作用(P =0.195)的影响均不显著;5)PRV感染极显著提高了TGF-β1 mRNA表达量(P=0.000),时间与苏氨酸水平交互作用的影响显著(P =0.015),苏氨酸水平的影响不显著(P=0.055).结果提示,补充苏氨酸对感染PRV的IPEC-J2细胞先天性免疫功能具有分子表达水平的调控作用,总体上能够抑制IL-1β、TNF-α、TGF-β1基因表达,加强IL-6、IL-15基因表达,但影响具有时间效应.     

硒和碘营养对蛋鸡不同组织抗氧化酶活性的影响

本试验旨在探讨饲粮中添加不同剂量的硒和碘对蛋鸡心脏、肝脏、脾脏和甲状腺中几种抗氧化酶活性的影响。288只33周龄的新罗曼蛋鸡,饲喂添加不同剂量硒和碘(0,0;0.2,0:0,0.2:0.2,0.2mgkg)的日粮12周,试验结果如下:硒缺乏时,心脏和肝脏中的GSHPx活性下降(P=0.073);碘缺乏时,心脏和肝脏中的CAT活性下降(P=0.055,P=0.097),肝脏中的GSHPx活性降低(P=0.093);硒碘互作对心脏(P<0.01)和肝脏(P<0.05)中的TSOD和CAT活性影响显著,对脾脏中的TSOD(CAT+GSHPx)值影响极显著(P<0.01)。结果表明:碘能够影响肝脏中含硒酶的活性,硒碘的互作能够影响心脏、肝脏和脾脏的抗氧化酶活性。     

不同生物素水平对3T3-L1脂肪细胞脂肪分解及相关基因表达的影响

为研究不同生物素水平对3T3-L1脂肪细胞脂肪分解及相关基因表达的影响,本试验利用三联诱导法将3T3-L1细胞经诱导分化为3T3-L1脂肪细胞。当3T3-L1脂肪细胞密集后分别采用0(对照组)、0.2、0.5、1.0μmol/L生物素处理,分别在12、24与48h时检测细胞上清液中甘油释放量、脂肪甘油三酯水解酶(ATGL)、激素敏感性脂肪酶(HSL)、脂滴包被蛋白A(perilipin A)及脂肪分化相关蛋白(ADRP)相对表达量。结果显示,在12h时,1.0μmol/L组甘油释放量、ATGL基因mRNA相对表达量均极显著低于对照组(P0.01),0.5、1.0μmol/L组HSL基因mRNA相对表达量显著低于对照组(P0.05),1.0μmol/L组perilipin A、ADRP基因mRNA相对表达量均极显著高于对照组与0.2μmol/L组(P0.01);在24h时,各试验组甘油释放量、1.0μmol/L组ATGL基因mRNA相对表达量均极显著低于对照组(P0.01),0.5、1.0μmol/L组perilipin A基因mRNA相对表达量极显著高于对照组与0.2μmol/L组(P0.01);1.0μmol/L组ADRP基因mRNA相对表达量极显著高于其他组(P0.01);在48h时,1.0μmol/L组甘油释放量、ATGL基因mRNA相对表达量均极显著或显著低于对照组(P0.01;P0.05),1.0μmol/L组perilipin A基因mRNA相对表达量显著高于对照组与0.2μmol/L组(P0.05),0.5、1.0μmol/L组ADRP基因mRNA相对表达量极显著高于对照组(P0.01)。综上所述,生物素可通过促进perilipin A与ADRP表达,同时抑制ATGL与HSL表达,达到抑制脂肪分解的效果,且浓度为1.0μmol/L时效果最佳。     

乙酸对奶牛乳腺上皮细胞活力及CD36和FABP3基因表达的影响

试验旨在研究在奶牛乳腺上皮细胞培养液中添加不同浓度的乙酸对细胞活力及CD36和FABP3 mRNA相对表达量的影响。将传第三代的乳腺上皮细胞悬液接种于细胞培养板上,每孔加入含10%FBS的DMEM/F12培养液,于37℃、5%CO2培养箱培养48 h。将培养48 h的奶牛乳腺上皮细胞培养孔随机分为1个对照组和5个试验组。每组分别加入含0、4、6、8、10、12 mmol/l乙酸的DMEM/F12培养液,并用1 g/l无脂肪酸的BSA替代培养液中的FBS,其中0 mmol/l为对照组。结果表明,细胞相对增殖率随着乙酸浓度的增加呈显著的二次曲线增加(P=0.005),以4~8 mmol/l乙酸处理组的细胞活力较高。随着乙酸添加浓度的增加,CD36的相对表达量呈显著的一次线性(P=0.011)和二次曲线(P=0.000)降低,以8~12 mmol/l乙酸组较低;FABP3的表达量呈显著的一次线性(P=0.001)和二次曲线(P=0.010)增加,以10~12 mmol/l乙酸组较高。乳腺上皮细胞活力与乙酸浓度呈显著的剂量依赖关系,低浓度的乙酸可促进奶牛乳腺上皮细胞活力,而高浓度则表现出抑制作用。不同浓度的乙酸处理组均下调了CD36 mRNA相对表达量,上调了FABP3 mRNA表达量。     

糖皮质激素对鸡胚肝细胞脂肪和胆汁酸代谢相关基因表达的影响

为揭示应激导致家禽肝脏代谢异常的机理,本研究探查了糖皮质激素——地塞米松(DEX)对鸡胚肝细胞脂肪和胆汁酸代谢相关基因表达的影响。选取19胚龄的无特定病原体(SPF)鸡蛋,原代培养鸡胚肝细胞(37℃、5%CO2),用0(对照)、200、500、1 000 nmol/L的地塞米松分别处理24 h。结果表明:与对照组相比,高剂量(500、1 000 nmol/L)地塞米松处理显著降低了脂肪代谢相关基因——脂肪酸转运蛋白1 (FATP-1)、固醇调节元件结合蛋白-1C(SREBP-1C)、载脂蛋白B100(APOB100)、肝脏X受体(LXR)以及胆汁酸摄取相关基因Na+/牛磺胆盐共转运体(NTCP)的mRNA相对表达水平(P0.05),显著提高了胆汁酸排出相关基因——胆盐输出泵(BSEP)的mRNA相对表达水平(P0.05);低剂量(200 nmol/L)地塞米松处理显著提高胆汁酸合成相关基因——胆固醇7-羟化酶(CYP7A1)和法尼酯X受体(FXR)的mRNA相对表达水平(P0.05),同时,SREBP-1C的mRNA相对表达水平显著降低(P 0.05),BSEP的mRNA相对表达水平显著上升(P0.05)。由此得出,高剂量糖皮质激素对鸡胚肝细胞的脂肪合成、转运和胆汁酸的摄取具有抑制作用;低剂量糖皮质激素可以促进胆汁酸的合成和排出,部分反应具有剂量依赖性。     

应激和饲粮能量水平对肉仔鸡肝脏脂肪合成能力的影响

本研究旨在探讨应激和饲粮能量水平对肉仔鸡肝脏脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FAS)活性以及腺苷一磷酸激活的蛋白激酶(AM P-activated protein kinase,AMPK)和固醇调节元件结合蛋白-1(sterol-regulatory element binding proteins-1,SREBP-1)基因mRNA表达量的影响,从而阐明应激造成肉仔鸡脂肪肝的原因,并寻找缓解应激的方法。本研究共有4个试验。前2个试验分别针对3~9日龄和28~34日龄的肉仔鸡,分别给予皮质酮和高、低能量水平饲粮的处理,试验结束后取肝脏,测定FAS活性。第3个试验选取7日龄体重相近的爱拔益加雄性肉鸡108只,随机分为3组:应激组(注射地塞米松)、对照组(注射生理盐水)和配对组(注射生理盐水,采食量与应激组前1 d的相同)。连续注射7 d。14日龄取肝脏,测定肝脏中甘油三酯的含量以及AMPK和SREBP-1 mRNA的表达量。最后1个试验给予3~9日龄肉仔鸡皮质酮和葡萄糖饮水处理,试验结束测定肝脏FAS活性。结果发现:1)皮质酮处理极显著提高了3~9日龄肉仔鸡肝脏FAS的活性(P0.01),对28~34日龄肉仔鸡的影响也有相似的趋势(P=0.0512)。2)与配对组相比,地塞米松处理显著增加了肝脏中甘油三酯的含量(P0.05),显著提高了肝脏中AMPK mRNA的表达量(P0.05);且地塞米松处理使得肝脏中SREBP-1 mRNA的表达量显著高于对照组和配对组(P0.05)。3)给应激组的肉仔鸡饮水中添加葡萄糖能显著降低肝脏FAS活性(P0.05)。结果表明:皮质酮处理会提高肉仔鸡肝脏FAS的活性,地塞米松处理则可显著提高肝脏SREBP-1mRNA的表达量,且能激活AM PK,而葡萄糖具有缓解应激的作用。     

IGFBP-3基因在两个品种鸡组织中的表达及其与生长性状的相关性分析

为研究IGFBP-3基因表达与鸡生长性状的相关性,以生长速度差异较大的花山麻鸡和清远麻鸡两个黄羽肉鸡品种为研究素材,用实时荧光定量PCR法检测胚胎期和出雏后两个品种鸡胸肌和肝脏中IGFBP-3基因的表达规律,并将其与体重、胸肌重和肝脏重进行相关性分析。结果表明,在9胚龄时两个品种鸡胸肌和肝脏中均可检测到IGFBP-3基因表达,同一胚龄或日龄品种内组织间比较,胚胎期两个品种鸡胸肌IGFBP-3 mRNA表达量均高于肝脏,出雏后肝脏IGFBP-3 mRNA表达量迅速上升,胸肌IGFBP-3 mRNA表达量下降,两个品种鸡肝脏IGFBP-3 mRNA表达量均极显著高于胸肌(P0.01);组织中IGFBP-3 mRNA表达量与组织重量和体重相关研究表明,两个品种鸡肝脏IGFBP-3 mRNA表达量与其胸肌重、肝脏重和体重呈显著或极显著正相关(P0.05;P0.01),胸肌IGFBP-3 mRNA表达量与其胸肌重、肝脏重和体重均呈极显著负相关(P0.01)。研究结果揭示,IGFBP-3 mRNA在鸡中的表达具有品种、年龄和组织特异性,出雏前肝脏并不是鸡产生IGFBP-3的主要器官,出雏后鸡IGFBP-3可能主要由肝脏合成,肝脏中IGFBP-3 mRNA水平差异是导致两个品种鸡出雏后体重和胸肌重差异的重要因素。     

断奶日龄对仔猪肝脏GHR、IGF-Ⅰ、IGF-ⅠR基因表达的影响

为了研究不同断奶日龄对仔猪肝脏中生长激素受体(GHR)、胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)和胰岛素样生长因子Ⅰ受体(IGF-ⅠR)基因mRNA表达的影响,从8窝"杜×长×大"仔猪选取出生日龄相近、初生体重一致的仔猪24头,随机分为4个试验组中,分别于14日龄、21日龄、28日龄和35日龄断奶。所有仔猪在42日龄宰杀取样,用RT-PCR方法检测肝脏中GHR、IGF-Ⅰ和IGF-ⅠR基因mRNA的相对表达量。结果表明:试验期间,个别仔猪偶尔出现腹泻症状。至42日龄试验结束时,各组仔猪体重无显著性差异(P0.05)。14日龄、21日龄和35日龄断奶组仔猪肝脏中GHR mRNA和IGF-ⅠmRNA的相对表达量均无显著性差异(P0.05),但该三组上述基因的表达量均显著低于28日龄断奶组(P0.05);不同断奶日龄组仔猪肝脏中IGF-ⅠR mRNA的相对表达量无明显差异(P0.05)。因此,不同断奶日龄对仔猪肝脏中生长相关基因表达影响的模式不同,对42日龄时仔猪的体重无显著影响。     

谷氨酰胺对过氧化氢诱导氧化应激人结肠癌HT-29细胞损伤和凋亡的影响

本试验旨在通过研究谷氨酰胺对过氧化氢(H_2O_2)诱导氧化应激人结肠癌HT-29细胞损伤和凋亡的影响,阐明谷氨酰胺的抗氧化效果和作用机理。HT-29细胞经不同浓度[0(对照组)、0.5、2.0、10.0 mmol/L]谷氨酰胺和0.35 mmol/L H_2O_2分别处理12、24、32 h后,测定细胞的超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量,并采用荧光定量PCR方法分析谷氨酰胺对H_2O_2诱导的细胞凋亡相关基因的mRNA相对表达量,以及采用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶双染法对HT-29细胞染色,并用流式细胞仪检测细胞的凋亡情况。结果表明:1)处理24 h后,0.5、2.0 mmol/L Gln组SOD活性显著高于对照组(P0.05);处理32 h后,0.5、2.0 mmol/L Gln组SOD活性显著高于对照组(P0.05),MDA含量显著低于对照组(P0.05)。2)处理12 h后,各组天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)和B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bax)mRNA相对表达量无显著差异(P0.05)。与对照组比较,0.5 mmol/L Gln组核转录因子κB(NF-κB)mRNA相对表达量显著降低(P0.05),0.5与2.0 mmol/L Gln组B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)mRNA相对表达量显著提高(P0.05)。处理24 h后,与对照组比较,0.5、2.0和10.0 mmol/L Gln组Caspase-3、NF-κB和Bax mRNA相对表达量均显著降低(P0.05),Bcl-2mRNA相对表达量显著升高(P0.05)。处理32 h后,与对照组比较,2.0 mmol/L Gln组细胞表面诱导凋亡分子(FAS)、Caspase-3、NF-κB、Bax mRNA相对表达量均显著降低(P0.05),Bcl-2mRNA相对表达量显著升高(P0.05);10.0 mmol/L Gln组FAS、Caspase-3、NF-κB、Bax mRNA相对表达量均显著升高(P0.05)。3)处理24 h后,与对照组比较,Gln处理使活细胞数量提高了5.32%~11.97%,坏死细胞数量降低了6.75%~12.66%。处理32 h后,与对照组比较,Gln处理使活细胞数量提高了1.39%~7.63%,坏死细胞数量降低了3.40%~4.57%。由此可见,谷氨酰胺可抑制氧化应激反应,降低H_2O_2诱导的HT-29细胞凋亡。     

辛硫磷急性中毒对鸡血清及组织相关酶活性的影响

选择24只11～12月龄的罗曼蛋鸡灌服辛硫磷,剂量分别为:Ⅰ组15.625mg/kg体重(低剂量),Ⅱ组31.25mg/kg体重(中剂量),Ⅲ组对照.在灌药前和灌药后1、3、6、12、24h分别采血,试验结束后采集心脏和肝脏,检测血清和组织中胆碱酯酶(ChE)、超氧化物歧化酶(SOD)活性的动态变化.结果表明,中剂量组和低剂量组分别于灌药后45min和60min出现明显的中毒症状;与对照组相比,两个试验组血清ChE活性显著降低(P＜0.01),呈现先抑制后逐渐恢复的变化趋势,12h时血清ChE活性降至最低,Ⅰ组和Ⅱ组分别为灌药前的19.14%和18.73%;肝脏和心脏ChE活性明显下降,与对照组差异显著(P＜0.05或P＜0.01);血清SOD活性在灌药后3～12 h明显下降(P＜0.05或P＜0.01).提示鸡辛硫磷急性中毒的临床症状与血清ChE活性变化相一致,ChE活性最低时中毒症状最严重,随着ChE活性的恢复中毒症状逐渐减轻,且在中毒过程中机体遭受氧化应激.     

21日龄断奶对仔猪肠道形态、肠道通透性及肠黏膜屏障的影响

本试验旨在研究21日龄断奶对仔猪肠道形态、肠道通透性及肠黏膜屏障的影响。采用2×3双因子完全随机试验设计,组别(哺乳组、断奶组)和日龄(22、24和28日龄)为2个主效应。选取6窝体况相近的健康大白仔猪,每窝选取6头平均体重为(6.1±0.2)kg的仔猪,随机分为2组,分别为断奶组和哺乳组,每组18头,分别于22、24和28日龄时屠宰,测定其生长性能、肠道形态、肠道通透性及肠黏膜屏障。结果表明:1)28日龄时,断奶组仔猪的末重和平均日增重均极显著低于哺乳组(P0.01)。2)组别和日龄对仔猪的空肠隐窝深度和绒毛高度/隐窝深度、回肠绒毛高度有极显著交互作用(P0.01);断奶组的空肠、回肠隐窝深度极显著高于哺乳组(P0.01),空肠、回肠绒毛高度和绒毛高度/隐窝深度极显著低于哺乳组(P0.01);哺乳组28日龄时的空肠绒毛高度/隐窝深度极显著高于22和24日龄时(P0.01),24日龄时的回肠绒毛高度极显著高于22日龄时(P0.01)。3)组别和日龄对仔猪的空肠黏膜二胺氧化酶(DAO)活性有显著交互作用(P0.05),断奶组的空肠、回肠黏膜DAO活性显著低于哺乳组(P0.05)。4)组别和日龄对仔猪空肠黏膜闭锁蛋白(occludin)的mRNA表达量有极显著交互作用(P0.01);空肠黏膜闭锁小带蛋白1(ZO-1)和哺乳组空肠黏膜occludin的mRNA表达量随着日龄的增加先升高后降低(P0.05);与哺乳组相比,断奶组回肠黏膜ZO-1、occludin和24日龄时空肠黏膜occludin的mRNA表达量显著降低(P0.05);24日龄时回肠黏膜ZO-1的mRNA表达量显著高于22日龄时(P0.05)。5)组别和日龄对仔猪空肠黏膜肿瘤坏死因子α(TNF-α)的mRNA表达量有显著交互作用(P0.05);断奶组24和28日龄时空肠黏膜TNF-α的mRNA表达量显著高于哺乳组(P0.05),空肠黏膜白细胞介素10(IL-10)的mRNA表达量显著低于哺乳组(P0.05)。回肠黏膜白细胞介素1β(IL-1β)的mRNA表达量随着日龄的增加而降低(P0.05)。综上所述,哺乳仔猪22~28日龄时肠道发育趋于成熟,而断奶会破坏仔猪肠道上皮细胞的结构和紧密连接蛋白的mRNA表达,引起肠道绒毛变短和脱落、肠道通透性增加和炎症反应,降低平均日增重。     

蛋内注射rhIGF-IGF-1对高邮鸭骨骼肌发育的影响

胰岛素样生长因子1(IGF-1)是重要的生长因子,参与机体生长发育的多个进程。研究利用蛋内注射技术处理孵化前高邮鸭受精蛋,以揭示外源注射IGF-1对雏鸭发育及骨骼肌生长的影响;同时在细胞水平分析外源重组人类胰岛素样生长因子1(rhIGF-1)对成肌细胞活性影响和内源IGF-1/IGFR mRNA表达影响。结果显示:孵化前蛋清内注射rhIGF-1显著增加育雏期6～21日龄雏鸭体重水平,骨骼肌解剖后称重发现,14日龄处理组胸肌增重显著高于对照组(P0.05);细胞水平试验结果显示,细胞培养体系中添加不同浓度rhIGF-1,随着培养时间的延长,处理组和对照组细胞活性差异不显著(P0.05);但成肌细胞处理组和对照组IGF-1/IGFR mRNA表达水平差异显著(P0.05)。研究结果揭示,孵化前蛋清内注射rhIGF-1增加高邮鸭出壳前后的体重,显著提高育雏中期胸肌增重水平,影响成肌细胞中IGF-1/IGFR mRNA表达。     

P38 MAPK在断奶应激致仔猪肠黏膜屏障损伤中的作用

选用21日龄杜长大仔猪60头,随机分成3组,每组20头.①哺乳组:不断奶继续哺乳;②断奶组;③试验组:断奶前1h腹腔注射P38 MAPK通路抑制剂(SB203580)2 mg/kg,之后隔日同一时间同剂量注射.仔猪21日龄断奶,试验期为7d.分别于21,22,24,28日龄屠宰仔猪取样待测.结果表明,在22和24日龄时,试验组绒毛高度分别高于断奶组12.06％和13.49％,差异显著(P＜0.05);24和28日龄时,试验组隐窝深度分别低于断奶组11.21％和12.12％,差异显著(P＜0.05);22,24,28日龄时,试验组绒毛高度隐窝深度之比显著高于断奶组(P＜0.05).试验组血浆D乳酸含量和DAO活性在22,24,28日龄时均显著低于断奶组(P＜0.05).与断奶组相比,试验组显著降低了22日龄空肠、24日龄和28日龄回肠肠黏膜TNF α的含量(P＜0.05),而与哺乳组相比差异不显著(P＞0.05).试验结果提示:阻断P38MAPK通路可能通过降低肠黏膜TNF-α的产生,缓解断奶仔猪的肠道炎症,保护肠黏膜屏障;P38 MAPK信号通路在断奶应激致小肠黏膜屏障受损过程中起调控作用.     

绵羊卵母细胞3种体外培养方式下外源添加血管内皮生长因子对FLT-1表达的影响

本研究旨在探究外源添加血管内皮生长因子(VEGF)对绵羊卵母细胞体外成熟过程中FLT-1表达的影响。采用3种不同的体外成熟培养方式:裸卵单独培养、颗粒细胞与裸卵共培养以及卵丘-卵母细胞复合体(cumulus-oocytes complexes,COCs)培养,外源添加5ng·mL-1血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)为试验组,不添加为对照组,采用qPCR、Western blot分别检测绵羊卵母细胞及颗粒细胞中FLT-1mRNA和蛋白表达水平。结果表明:1)3种不同培养方式下,无论是否添加VEGF,颗粒细胞与卵母细胞中均能检测到FLT-1mRNA和蛋白表达。添加VEGF能极显著降低共培养试验组12、16和20h以及COCs试验组4、8、12、16和24h颗粒细胞FLT-1mRNA表达(P0.01),能极显著降低共培养试验组12、20和24h以及COCs试验组4、8和12h卵母细胞FLT-1mRNA表达(P0.01),但会极显著增加裸卵试验组4~24h卵母细胞FLT-1mRNA表达(P0.01)。2)添加VEGF能够极显著降低共培养试验组和COCs试验组中颗粒细胞FLT-1蛋白4~12h的表达量(P0.01),共培养试验组和COCs试验组中颗粒细胞FLT-1蛋白表达呈波动性下降趋势。COCs对照组和试验组颗粒细胞中FLT-1蛋白表达量在各时间点均高于同期共培养试验组。3)3种不同培养方式中,除裸卵试验组在20~24h有一个急剧升高外,其余组中卵母细胞FLT-1蛋白表达量总体均呈波动性下降趋势。综上表明,卵母细胞和颗粒细胞中存在FLT-1的自分泌和旁分泌,卵母细胞中FLT-1mRNA的表达与外围颗粒细胞的存在与否、数量多少以及包裹方式息息相关;在体外培养环境下,添加VEGF有效地激活了FLT-1mRNA表达,但同时结合FLT-1蛋白以促进卵母细胞成熟的生物学效应,从而减少了FLT-1蛋白的表达。