牛结节性皮肤病病毒TaqMan实时荧光定量PCR方法的建立与应用

牛结节性皮肤病(lumpy skin disease, LSD)是近年来我国新出现的一种牛传染性疾病。本研究根据LSD病毒(LSDV)的LSD022基因保守区域,设计出引物和探针,经过反应条件优化,建立了TaqMan实时荧光定量PCR检测方法,测试了其敏感性、特异性和重复性。结果发现,本方法敏感性达到15 copies/μL,不与其他牛病病毒和山羊痘弱毒疫苗AV41发生反应,变异系数均小于3%。用本方法和OIE推荐的普通PCR方法检测发病牛场94份临床样品,LSDV检出率分别为62%和37%,其中阳性样品2种方法检测符合率为96.7%,说明本方法敏感性、特异性和重复性较好,可用于LSDV检测。     

华南地区牛结节性皮肤病病毒全基因组测序及分析

为了对2020年我国华南地区牛结节性皮肤病(lumpy skin disease, LSD)疫情进行溯源调查，本研究采用商品化检测试剂盒和透射电镜对2份华南地区疑似感染的牛皮肤结节组织样本进行鉴定，利用高通量测序技术进行病毒全基因组测序，并对其进行序列比对、遗传进化和病毒重组分析。qPCR检测结果显示2份样本均为牛结节性皮肤病病毒(lumpy skin disease virus, LSDV)阳性，电镜观察到典型LSDV病毒粒子形态，将其命名为China/GD02/2020株和China/GX01/2020株，获得全基因组序列上传GenBank获得登录号分别为OM803091和OM803092。对病毒全基因组序列比对及遗传进化分析显示GD02和GX01株的核苷酸相似性达到99.99%,并与2020年中国台湾、中国香港和越南的LSDV分离株处于进化树的同一小分支，且均归属为重组病毒。病毒重组分析表明2株病毒的主要亲本为南非疫苗株(Neethling vaccine LW 1959),次要亲本为摩洛哥从牛分离的田间株(LSD/KSGP 0240/Morocco/2017)和南非野毒株(Ne...     

一起境外输入性牛结节性皮肤病疫情

2020年11月，山东滨州市、东营市引进牛皮肤出现自限性皮肤结节、损伤以及结痂等症状，疑似发生牛结节性皮肤病（lumpy skin disease，LSD）。为确诊两地疫情及了解病原的遗传演化关系，利用荧光定量PCR方法进行诊断，以PCR方法扩增GCPR基因并进行核苷酸比对分析和遗传演化分析。检测结果显示，采集的样品中检测到牛结节性皮肤病病毒（lumpy skin disease virus，LSDV），两地疫情确诊为LSD疫情。GCPR基因核苷酸比对结果显示，China/SDBinzhou/2020、China/SDDongying/2020 GCPR基因存在12个核苷酸的插入，与疫苗毒株Neethling vaccine LW 1959株、Neethling-LSD vaccine-OBP株以及俄罗斯发现的疫苗样毒株Saratov株在GCPR基因的核苷酸插入序列相同，具备疫苗样毒株的特征。系统发育分析结果表明，China/SDBinzhou/2020、China/SDDongying/2020 GCPR基因与我国新疆发现的LSDV毒株GCPR基因处同一小分支中，亲缘关系较近。同时，我国LSDV毒株与Neethling vaccine LW 1959株、Neethling-LSD vaccine-OBP株以及Saratov株等共处于一大分支中。综上，确诊滨州市、东营市两地疫情为LSD疫情，这是山东省首次确诊输入性LSD疫情。     

疑似牛结节性皮肤病防治的浅析与体会

牛结节性皮肤病(Lumpy skin disease,LSD)是由羊痘病毒属牛结节性皮肤病病毒(LSDV)引发的一种急性、热性传染病.2019年8月在我国新疆伊梨州首次发现,其临床特征表现为全身皮肤出现结节、肿块,所以又称为牛疙瘩皮肤病,我国暂列为二类动物疫病.     

牛结节性皮肤病的免疫注射

牛结节性皮肤病(Lumpy skin disease,LSD),是由痘病毒科、山羊痘病毒属牛结节性皮肤病病毒( LSDV)引起的一种牛全身感染性疫病.该病源于非洲,2019 年8 月我国新疆伊犁首次出现[1].该病主要通过蚊、蝇、蠓、虻、蜱等吸血虫媒叮咬传播,发病率可达45％,死亡率一般不高于10％ [2].主要症状为...     

基于牛结节性皮肤病病毒ORF61基因荧光定量检测方法的建立

基于国内流行的牛结节性皮肤病病毒(lumpy skin disease virus, LSDV)的基因组序列,建立了靶向ORF61基因的MGB探针荧光定量PCR检测方法。本研究基于LSDV基因序列设计出带有MGB探针的特异性荧光定量PCR引物,并进行特异性和灵敏性筛选验证。最终,筛选得到靶向于LSDV ORF61基因的一对qPCR引物;利用pCAGGS-ORF61真核表达质粒,获得标准曲线y=-3.287 5x+47.87,线性相关系数R²=0.998 6,扩增效率达101%;荧光定量PCR特异性、重复性和灵敏性试验结果表明,该引物的特异性高、重复性良好和灵敏度高等优点;该引物的最低检测限为6.71拷贝·μL^-1,各批次内与批次间重复性结果的变异系数均小于2%。以上结果表明,作者建立特异性LSDV的荧光定量PCR检测方法,为LSD预防和控制提供有效的检测手段。     

牛结节性皮肤病及其检测方法研究进展

2019年8月,我国首次在新疆地区确诊牛结节性皮肤病(lumpy skin disease,LSD)。为加强对LSD的认知,继而及早制定监测与防控措施,本文概述了该病的病原学、临床症状、免疫应答等,分析了近些年该病的检测方法,提出尽早建立标准诊断技术,对防疫人员及养殖者开展培训和宣传,建立疫苗储备等建议,以期为我国防控LSD提供技术支持。     

牛结节性皮肤病的免疫预防及流行形势分析

牛结节性皮肤病(Lumpy skin disease,LSD)是由痘病毒科羊痘病毒属的牛结节性皮肤病毒(LSDV)引起牛的一种病毒性疾病。预防该病具有十分重要的经济意义，因为受感染的牛通常会导致慢性衰弱、产奶量减少、生长不良、不孕、流产，有时甚至导致死亡。2019年8月该病传入中国，并在多省份、多地区暴发造成了巨大的经济损失。本文旨在总结LSD流行病学的最新进展，以帮助采取适当的防控措施，预防该疾病在我国的进一步传播。     

牛结节性皮肤病的流行和综合防控

<正>牛结节性皮肤病（Lumpyskin disease,LSD）是牛类“天花”,是由痘病毒科、脊椎动物痘病毒亚科、山羊痘病毒属的牛结节性皮肤病病毒（Lumpy skin disease virus,LSDV）引起的全身感染性疫病,又称为牛疙瘩皮肤病、牛结节性皮炎或牛结节疹,最显著特征是全身皮肤出现结节病变。LSD能跨国界传播,WHO规定为必须通报的动物疫病,2022年2月我国将其由一类动物疫病调整为二类动物疫病。该病不是人畜共患病,     

牛结节性皮肤病病毒实验室检测方法研究进展

牛结节性皮肤病(LSD)是由牛结节性皮肤病病毒(LSDV)引起的以发热、消瘦、皮肤水肿、局部形成坚硬的结节或溃疡、淋巴结肿大等为主要特征的急性、亚急性传染病.本病目前尚无特效治疗药物,疫苗接种是当前主要的防控措施,但我国目前并没有针对该病的疫苗,因此建立快速准确的检测方法显得尤为重要.本文从该病的病毒分离和鉴定、血清学...