叶用莴苣NAC基因家族的鉴定与热胁迫表达分析

NAC基因家族是植物特有的一类转录因子家族,在植物响应高温等非生物逆境胁迫中发挥重要作用。本研究通过对叶用莴苣基因组数据库进行查询鉴定,共有99个LsNAC基因,编码NAC蛋白161个。LsNAC基因在1号到9号染色体上均有分布,2个LsNAC基因未能定位在染色体上,其中6号染色体上编码的基因最多,8号染色体上编码的基因最少。叶用莴苣NAC蛋白有着相似的motif组成,分析表明,NAC总共有9个保守的motif,前8个motif分布在保守的N端,只有第9个motif位于序列不保守的C端,而且第9个motif仅存在于9个Ls NAC蛋白中。LsNAC基因的重复性鉴定分析表明,7对为片段重复基因,6对为串联重复基因。系统进化分析表明Ls NACs可以分为6个亚家族,通过对叶用莴苣热胁迫下的转录组数据进行分析,鉴定出13个对热胁迫响应的LsNAC基因,这些LsNAC基因在除第六亚家族之外,在其他五个家族中均有分布,其中第三个亚家族含有的热响应基因最多(4个LsNAC基因),RT-qPCR实时荧光定量分析进一步验证表明10个NAC基因在耐热材料中上调表达,3个下调表达。本研究为今后LsNAC基因在叶用莴苣中的耐热机理研究和相关抗逆育种提供了重要的理论基础。     

叶用莴苣组织培养再生体系的建立

为了满足市场需求,通过组织培养技术可以使叶用莴苣不受季节气候所牵制。随时可以工厂化大量生产,以达到百姓日食之需。本研究以PS11叶用莴苣为试材,从种子开始培育无菌苗,MS培养基为基础培养基,附加不同浓度的6-BA和NAA激素配比,再经愈伤组织诱导、芽分化、生根3个步骤的离体培养,建立叶用莴苣快速高效的再生体系。研究表明：该品种最佳诱导愈伤组织分化的培养基为MS+0.2mg/L6-BA+0.4mg/LNAA,出愈率达到100%,出芽率达到71.6%。     

黄瓜AFLP反应体系的建立

以24个不同类型的黄瓜高代自交系为试材,通过对扩增长度多态性(AFLP)反应体系中的几个关键参数进行优化,建立了适合于黄瓜的AFLP反应体系。结果表明,用于酶切的基因组DNA以300ng为宜,预扩增产物的稀释倍数以30倍为宜,选择性扩增引物的选择性碱基的数目以“2 3”组合为宜。采用优化好的体系,引物组合P12M12在供试材料中共扩增出稳定清晰的带纹35条,其中多态性带4条。     

红花SCoT-PCR反应体系的建立与优化

为构建红花最佳扩增体系,为以后研究红花遗传多样性和目的基因标记提供了科学依据。本研究采用L₁₆(4⁵)正交试验和单因素试验相结合的方法对红花SCoT-PCR反应体系中的引物,DNA、dNTPs、PCR Buffer (含Mg²⁺)、Taq DNA聚合酶进行优化,每个因素都设为四水平。结果表明,五个影响因素中dNTPs的影响最大,红花最佳反应体系为引物0.6 mmol/L,DNA 60 ng,dNTPs 0.25 mmol/L,Taq DNA聚合酶1.5 U,PCR Buffer (含Mg²⁺) 2μL,ddH₂O补足至20μL。选用引物S15对八种红花资源对扩增体系进行验证,结果显示扩增条带清晰,多态性好,表明该体系适合红花分子标记研究。     

叶用莴苣叶片蛋白质双向电泳技术体系的建立

为建立适用于生菜的(Lactuca sative L.)蛋白质组研究的双向电泳技术(2-DE),以叶用莴苣S24为材料, 采用TCA/丙酮沉淀法提取叶片蛋白,比较了两种标准曲线对蛋白浓度测定的影响,同时探讨了蛋白裂解、等电聚焦(IEF)条件以及其他一些关键技术,结果显示：与传统标准曲线相比,采用改良后标准曲线测定的蛋白浓度更准确,得到了背景清晰、重复性好、蛋白点分辨率较高的双向电泳图谱。初步建立了叶用莴苣叶片蛋白质的双向电泳技术(2-DE)体系。     

万寿菊雄性不育系SRAP-PCR体系建立与优化

本研究以万寿菊雄性不育系2-2基因组DNA为试验材料,采用单因素和L16(45)正交设计对SRAPPCR反应体系的Mg2+、d NTPs、Taq酶、引物和模板DNA浓度进行优化,以得到最佳的SRAP-PCR反应体系。结果表明最佳反应体系为:20μL体系中Mg2+2.0 mmol/L、d NTPs 0.3 mmol/L、Taq酶0.75 U、引物0.2μmol/L、模板DNA 80 ng。应用建立的反应体系对退火温度进行优化,得到两步退火温度分别为35℃和50.2℃。最后用9个万寿菊雄性不育两用系材料组对所得PCR体系进行验证,证明该体系具有较高的稳定性和重复性,可为筛选与万寿菊雄性不育基因连锁的特异性标记奠定基础。     

叶用莴苣无缝克隆构建LsE3基因过表达载体和新RNAi载体及遗传转化体系优化

研究旨在应用新技术和新载体构建过表达和沉默载体,优化遗传转化体系,验证生菜LsE3基因功能,探究高温抽薹机制.以pCAMBIA1304和pFGC5941载体为材料,通过无缝克隆构建叶用莴苣转基因载体,并通过筛选培养基配方优化遗传转化体系.试验成功地以pCAMBIA1304为基础,插入源自pFGC5941的dsRNA表达...     

蚕豆SRAP标记的建立及遗传多样性分析

本研究从Mg2+、dNTPs、TaqDNA聚合酶、引物、模板5种因素对蚕豆序列相关扩增多态性(sequence-related amplified polymorphism,SRAP)体系进行了优化.结果表明,蚕豆最佳PCR反应体系(25 μL)为:1.0 mmol/L dNTPs,0.5 mmol//L Mg2+,0...     

铜胁迫对油麦菜生长和土壤酶活性的影响

在室内进行土培盆栽实验,通过对油麦菜幼苗植株生长、生物量和土壤酶活测定,研究了不同浓度铜胁迫（50,300,500,800,1200,2000 mg/kg干土）对油麦菜幼苗生长和土壤酶 (脲酶、转化酶、酸性磷酸酶、过氧化氢酶) 活性的影响。结果表明：与对照相比,随着铜浓度的增加,油麦菜的叶片受伤率增加,成活率下降,油麦菜鲜重、株高、平均根长亦随 Cu 浓度升高而递减;土壤酶活性随着铜胁迫程度的增加而显著降低,其中脲酶、酸性磷酸酶活性降低最明显。相关分析结果表明,脲酶、转化酶、酸性磷酸酶、过氧化氢酶活性,油麦菜的平均根长、鲜重、株高与土壤铜含量存在着显著或极显著的负相关关系,酶活性与油麦菜的生理指标呈显著或极显著的正相关。可见土壤酶活性可作为检测土壤中重金属污染程度的参考指标之一。     

不同外包装方式对油麦菜贮藏品质和生理变化的影响

为探究不同外包装方式对油麦菜保鲜效果的影响,以油麦菜为试材,经过挑选后装入包装袋并分别置于纸箱、泡沫箱和温控箱中于4℃冷库贮藏,分析不同外包装方式对油麦菜的外观品质、营养品质、生理指标和相关酶活性的影响。结果表明:温控箱箱体内部温度波动范围在0.1℃以内,与纸箱组相比,温控箱的外包装处理能够有效地抑制色差值ΔE的变化,更好地维持可溶性固形物、VC和叶绿素含量的下降,有效地抑制呼吸强度和乙烯生成速率,延缓相对电导率和丙二醛含量的增加,维持过氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性,抑制多酚氧化酶(PPO)活性的升高。因此,温控箱包装方式下贮藏品质最好,可有效地维持油麦菜的营养品质和商品特性。     

叶用莴苣2个Hsp70基因与其抽薹的相关性分析

为探究叶用莴苣2个Hsp70基因LsHsp70-2711和LsHsp70-3711与叶用莴苣的抽薹是否相关,采用实时荧光定量PCR技术(RT-PCR),以2个品种的叶片为试材,分析这2个基因在耐热型品种G-S59和热敏型品种P-S11 2个叶用莴苣品种抽薹前后的相对表达量。研究结果表明：首先,这2个Hsp70基因在抽薹前后的表达量表现出显著差异,所以推测与叶用莴苣的抽薹性具有一定关联;其次,LsHsp70-2711基因在2个叶用莴苣品种中的表达趋势均为抽薹前显著高于抽薹后,且在相同处理下G-S59中的表达量又明显高于P-S11中的表达量,LsHsp70-3711基因与LsHsp70-2711基因在2个品种中的表达情况相反。叶用莴苣热激蛋白基因LsHsp70-2711和LsHsp70-3711除与叶用莴苣的耐热性相关外,还与其抽薹性具有一定相关性。     

结球莴苣耐热性鉴定方法的研究

以6个结球莴苣品种为试验材料,从生长发育、经济性状和生理生化等方面研究耐热性的鉴定方法。结果表明,抽薹时间是理想的耐热性鉴定指标。POD和SOD活性、可溶性蛋白和可溶性糖含量、脯氨酸含量及丙二醛含量等生理生化指标与抽薹时间显著相关,因而可作为结球莴苣耐热性鉴定的辅助指标。     

茶树TRAP反应体系的建立及正交设计优化

TRAP标记技术因操作简单、重复性好、效率高等特点得到广泛应用,但该技术在茶树中的研究报道较少,且茶树TRAP-PCR体系优化尚未见报道。笔者采用正交设计的方法,对茶树TRAP-PCR反应中Mg2+、Taq酶、dNTP、固定引物、随机引物5个因素进行了优化研究,建立了茶树TRAP-PCR最佳反应体系。该20 μL反应体系含有2 μL 10×PCR Buffer (Mg2+ free),50 ng模板DNA,1.75 mmo/L Mg2+,0.50 U Taq酶,0.20 mmol/L dNTP,0.20 mmol/L随机引物和0.20 mmol/L固定引物。根据优化结果,利用最佳反应体系,选用16个茶树品种对TRAP标记多态性进行了初步研究。     

绿肥作物箭筈豌豆种质产量性状综合评价

通过对124份绿肥箭筈豌豆种质资源品种产量性状指标进行主成分分析及聚类分析.结果表明,第3主成分(荚果数)偏高,第1主成分(株高)偏低,第2主成分(分枝数)适中,箭筈豌豆种子产量较高;第1,2主成分偏高,第3主成分偏低,即株高高,分枝数多的材料,干草产量高,可作为绿肥和饲用作物材料.聚类分析可综合评价箭筈豌豆的表现,发掘产量性状突出的材料,对于箭筈豌豆的育种具有重要的现实意义.     

叶用莴苣幼苗幼叶总蛋白SDS-PAGE和Western-blot方法的优化

为建立一套适合叶用莴苣(Lactuca sative L.)热激蛋白研究的SDS-PAGE和Western-blot方法。以叶用莴苣W7为材料,采用改进的TCA/Acetone法提取叶片蛋白,比较了两种电压下SDS凝胶分离蛋白质的效果,使用4℃保存两周的抗体稀释液并且得到了较清晰的热激蛋白70和内参蛋白Rubisco条带,初步确定了叶用莴苣叶片热激蛋白的western-blot实验条件。     

Research on the inheritance of fasciation in lettuce (Lactuca sativa L.)

Summary Inheritance of fasciation was investigated in reciprocal crosses between two lettuce varieties: Suzan (non-fasciated) and Noran (fasciated). In glasshouses parental plants, F₁, F₂, and F₃ populations were assessed for fasciation according to a scale from 0 (non-fasciated)-9 (extremely fasciated).The observed environmental variation for fasciation of the homozygous parents was very low or absent, but the environmental variation for the F₁ populations was large. On the basis of this large variation of the heterozygous F₁ plants we supposed that such a variation also occurred in F₂ and F₃ populations.Considerable mortality was observed in all generations, which supposedly occurred at random in parents and F₁ but was non-random in the segregating F₂ and F₃ populations. So, means and variances of F₂ populations will be biased and therefore they were not used for genetical analyses of fasciation.From F₁ and F₃ populations and from some F₂ populations it appeared that no differences occurred between reciprocals. The differences for fasciation between reciprocal F₂ populations in the 1977 A experiment may result from non-random plant survival. A regression of F₃-means on the values for fasciation of parental F₂ plants, adjusted for their inbreeding, resulted in a realized h²-narrow of 0.4. This indicates that in the surviving plants of the F₂ populations still additive genetic variation was present to select successfully for non-fasciated plants.     

紫花苜蓿愈伤组织诱导和分化研究

以紫花苜蓿SANDITI无菌苗下胚轴、茎、叶3种不同外植体,在附加不同激素浓度的MS培养基上诱导愈伤组织。结果表明,SANDIT最佳外植体为下胚轴,最佳下胚轴愈伤组织诱导培养基为MS+2,4-D 2.0 mg/L+6-BA 0.5mg/L。15 d继代1次,或适当降低2,4-D浓度,提高6-BA或KT浓度,可以降低愈伤组织褐化率。愈伤组织在6-BA0.5 mg/L,NAA 0.1 mg/L,GA31.0 mg/L,YE 250 mg/L,CH 250 mg/L的MS培养基上,可获得较高的分化率。     

栽培稻的基因型差异程度和分类

本文利用来自一个籼/粳交(圭630/02428)的双单倍体(DH)系和由多种类型的籼、粳品种(系)组成的对照组,从分子水平上研究亚洲栽培稻的基因型差异。结果表明,栽培稻中存在两种主要的差异类型,即质的差异和量的差异。前者主要存在于籼、粳分化程度比较高的对照组中,85%以上的有关位点已经发生了籼或粳的分化趋向;后者主要存