宁夏地区犊牛腹泻型产ESBLs大肠埃希氏菌的筛选及相关基因型分析

旨在明确宁夏地区犊牛腹泻型产ESBLs大肠埃希氏菌的阳性率及相关基因型的携带情况。采集犊牛腹泻样本180份,采用麦康凯培养基和伊红美蓝培养基进行筛选,疑似大肠埃希氏菌的菌株进行PCR鉴定,用ESBLs表型检测方法进行产ESBLs菌株的筛选,用PCR进行相关基因的检测。结果显示,共鉴定出大肠埃希氏菌74份,51株为产ESBLs菌株,检出率为68.92%(51/74),其中bla-TEM、bla-CTX、bla-CTX-M-9基因阳性率均为100%,bla-OXA基因阳性率为50.98%,bla-SHV基因阳性率为23.53%。分离株携带CTX+CTX-M-1+CTX-M-9+TEM基因的菌株占比最高,为21.57%。结果表明,优势基因型为bla-TEM、bla-CTX和bla-CTX-M-9。     

羔羊源产ESBLs与非产ESBLs大肠埃希氏菌耐药性差异比较及基因型分析

为了明确宁夏地区羔羊源大肠埃希氏菌产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)与非产ESBLs大肠埃希氏菌的耐药性差异和相关基因携带情况差异,对实验室分离保存的87株羔羊源大肠埃希氏菌,采用ESBLs表型检测方法筛选产ESBLs的菌株和K-B纸片法进行药物敏感性试验,采用PCR法对分离株进行相关基因的检测。结果显示,87株大肠埃希氏菌中5株为产ESBLs菌株,检出率为5.75%。产ESBLs株对多数试验药物呈耐药性;而非产ESBLs菌株对多数试验药物敏感,仅对恩诺沙星、复方新诺明和红霉素耐药率超过50%。20种药物中,产ESBLs株大肠埃希氏菌对18种药物的耐药率极显著高于非产ESBLs菌株(P<0.01)。产ESBLs菌株携带blaCTX的阳性率极显著高于非产ESBLs菌株(P<0.01),产ESBLs菌株中的blaTEM和blaOXA基因的阳性率均高于非产ESBLs菌株,但差异不显著(P>0.05)。结果表明宁夏地区羔羊源大肠埃希氏菌产ESBLs菌株流行率低,产ESBLs菌株耐药性严重,且宁夏地区羔羊源ESBLs菌株优势基因型为blaCTX和blaTEM。     

宁夏地区腹泻犊牛产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希氏菌的药敏试验及脉冲场凝胶电泳分型

为了解宁夏地区规模化牛场犊牛腹泻源产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希氏菌耐药和遗传变异情况，对分离得到的17株产ESBLs大肠埃希氏菌，采用K-B纸片法进行药物敏感性试验，采用脉冲场凝胶电泳进行分型研究。结果显示，17株分离株对试验药物多数呈耐药状态，对头孢拉定、四环素、阿莫西林3种药物完全耐药，其他药物的耐药性为70.24%～94.12%,只对阿米卡星、诺氟沙星敏感性较高。分离菌株可分为17个PFGE型，菌株间的相似度为67.5%～85.7%,无优势带型。宁夏地区犊牛腹泻源产ESBLs大肠埃希氏菌耐药性严重，遗传差异较大，但不同菌株存在着不同程度的亲缘关系。     

上海地区猪鸡源大肠埃希菌AmpC酶基因型研究

为了解AmpC酶基因型在上海地区猪鸡源大肠埃希菌中的流行情况,收集2016-2017年上海地区12个养殖场950份健康猪鸡粪便,采用传统细菌学方法分离鉴定大肠埃希菌,采用药敏试验进行大肠埃希菌AmpC酶表型筛选以及PCR方法对常见的3种AmpC酶基因型(DHA-1、CMY-2、ACT)进行检测。共计分离出762株猪鸡源大肠埃希菌,药敏试验结果显示:头孢西丁MIC≥32 μg/mL且阿莫西林/克拉维酸MIC≥32/16 μg/mL的菌株共计86株,占比11.3%(86/762)。PCR结果显示:AmpC酶基因型 CMY-2阳性率为64.0%(55/86),DHA -1阳性率为4.7%(4/86),未检出 ACT 型。上海地区分离的大肠埃希菌AmpC酶基因主要以CMY-2型为主。     

宠物源大肠埃希菌的分离鉴定和耐药性研究

为调查长春地区宠物源大肠埃希菌耐药流行情况,从2家宠物医院采集135份宠物肛拭子样品,分离和鉴定大肠埃希菌并进行多重PCR分群。测定大肠埃希菌分离株对19种抗菌药物的耐药性,并鉴定超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)表型。共分离鉴定获得95株宠物源大肠埃希菌,它们对氨苄西林和哌拉西林的耐药率最高(78.9%和76.8%);其次是四环素(61.6%);对头孢唑林、头孢噻肟、头孢吡肟、庆大霉素、复方新诺明、环丙沙星和左氧氟沙星的耐药率均超过了50%;所有分离株均对亚胺培南和美罗培南敏感。其中15个分离株对受试的抗菌药物全部敏感(15.8%),63株呈多重耐药表型(66.3%)。ESBLs型菌株占53.7%。本研究探明了长春地区宠物源大肠埃希菌的耐药流行情况,对宠物临床上用药具有指导价值。     

石河子地区奶牛乳房炎大肠埃希菌的分离鉴定及耐药性分析

为了解引起新疆石河子地区规模化牛场奶牛乳房炎大肠埃希菌的流行情况及其耐药性,对石河子地区部分奶牛场采集85份临床型或隐性乳房炎奶样进行大肠埃希菌的分离、鉴定及耐药性试验。结果表明,从85份奶样中分离到127株细菌,其中大肠埃希菌27株,占21.26%。耐药性试验结果显示,27株大肠埃希菌全部对杆菌肽耐药,66%以上对青霉素、复方新诺明、红霉素耐药,80%以上对丁胺卡那霉素、恩诺沙星、氟苯尼考、头孢曲松、头孢哌酮5种药物敏感。调查结果为本地区奶牛乳房炎的防控提供了参考依据。     

鸡源大肠埃希菌的耐药性与分子分型研究

为了解规模化养殖厂鸡源大肠埃希菌的耐药性以及分子流行规律和特征,为该菌的分子溯源及风险评估提供依据,本研究收集2013-2014年上海地区养殖场分离的鸡源大肠埃希菌共计741株,采用微量稀释肉汤法分别对常用的9类13种抗菌药物进行药物敏感性测定,以了解大肠埃希菌的耐药表型。在筛选出多重耐药严重的菌株后,同时采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型方法及核糖体(RP)分型方法进行分子分型分析。结果显示,2013-2014年所分离的鸡源大肠埃希菌对氨苄西林、阿莫西林/克拉维酸、大观霉素、四环素、多西环素、氟苯尼考、磺胺异噁唑、复方新诺明、氧氟沙星和恩诺沙星的耐药率较高,在50%以上,且主要为多重耐药菌株。用XbaⅠ酶切后进行PFGE分析,结果表明,29株鸡源大肠埃希菌可分为22个带型;EcoRⅠ酶切后的RP聚类分析结果表明,鸡源大肠埃希菌分为14个带型。鸡源大肠埃希菌耐药率较高,同一分型菌株的耐药谱型并非完全一致,菌株基因型呈多态性。     

狐狸源大肠埃希菌TEM1型耐药基因检测和耐药质粒消除研究

研究大肠埃希菌耐药性和耐药基因和十二烷基硫酸钠(SDS)对大肠埃希菌耐药质粒消除作用。以大肠埃希菌临床分离株为试验菌株,采用K-B药敏纸片法对6种抗菌药物进行药物敏感性检测,并对大肠埃希菌耐药质粒TEM1型耐药基因进行PCR检测,采用SDS消除大肠埃希菌临床分离菌株的耐药质粒,采用琼脂糖凝胶电泳检测质粒条带,药敏试验检测大肠埃希菌耐药质粒消除前后的药物敏感性。结果表明,大肠埃希菌对庆大霉素敏感,对大观霉素中敏,对氨苄西林、阿莫西林、头孢拉定、环丙沙星耐药;大肠埃希菌耐药质粒检测出TEM1型耐药基因;试验菌株经7.5g/L的SDS处理至第3代时,质粒条带有明显的减少,TEM1型耐药基因消失,并且恢复了对β内酰胺类抗生素的敏感性,说明耐药质粒已经成功消除。     

腹泻仔猪肠道致病性大肠埃希氏菌和沙门氏菌的分离鉴定与耐药性研究

为探明仔猪细菌性腹泻肠道致病性大肠埃希氏菌和沙门氏菌流行的血清型、耐药表型及耐药基因型,本试验采集了贵州省5个地（州）市7个规模化养猪场的128份腹泻仔猪肠道样本,并对采集的样本进行了大肠埃希氏菌和沙门氏菌分离与鉴定,通过动物试验鉴定菌株的致病性,利用血清学方法鉴定其血清型,并通过药敏纸片法对主要致病菌进行耐药性研究,采用PCR技术检测各致病菌株耐药相关基因,分析细菌耐药表型和耐药基因型相关性。结果显示,本研究共分离鉴定到78株致病性大肠埃希氏菌与21株沙门氏菌,致病性大肠埃希氏菌血清型以O138、O87为主,沙门氏菌血清型以鼠伤寒沙门氏菌、肠炎沙门氏菌居多;药敏试验结果表明,本试验分离到的78株致病性大肠埃希氏菌对β-内酰胺类药物耐药率达80%以上,对其他种类的抗菌药耐药率均超过40%,分离鉴定的21株沙门氏菌对氨基糖苷类药物耐药率达50%以上,对其他种类的抗菌药耐药率均达20%以上;本试验分离鉴定的致病性大肠埃希氏菌共检出12种耐药相关基因,沙门氏菌共检出10种耐药相关基因,两种细菌耐药基因型与耐药表型符合率均达60%以上,且均为多重耐药。本研究为仔猪腹泻的综合防控提供了理论依据。     

宁夏地区羊源大肠埃希氏菌的分离鉴定及耐药性检测

为了解宁夏地区羊源大肠埃希氏菌的流行情况及对常用抗生素的耐药性,对采集于宁夏地区的108份病料进行大肠埃希氏菌的分离鉴定,采用微量肉汤稀释法测定16种抗菌药物对分离株的最小抑菌浓度(MIC).结果表明,在108份病料中共分离到58株大肠埃希氏菌,分离率达53.7％;分离菌株中耐药株共34株(58.6％),其中15株(4...     

鹤源大肠杆菌ESBLs基因型检测及其耐药性分析

采用K-B法检测40株鹤源大肠杆菌对17种抗菌药物的耐药性。根据耐药表型和超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的基因型流行情况,指导临床合理用药。结果表明:15株大肠杆菌为产ESBLs株。扩增出了与预期片段大小相符的TEM型、SHV型、CTX-M型、OXA型基因。产酶大肠杆菌耐药性明显比非产酶大肠杆菌严重。     

苏太仔猪FUT1基因M307位点多态性与F18大肠杆菌抗病相关性的体外鉴定

采用PCR-RFLP方法检测了江苏苏太断奶仔猪FUT1基因M307位点等位基因多态性分布,在所检的49头仔猪中,GG基因型个体16头,AG基因型19头,AA基因型14头。在此基础上,制备上述不同基因型个体仔猪小肠上皮细胞,分别与表达F18ab菌毛的野生型大肠杆菌、表达F18ac菌毛含fed操纵子全基因的重组大肠杆菌和V型系统表面分泌表达F18abFedF亚单位的重组大肠杆菌进行体外黏附试验和黏附抑制试验。研究结果表明:FUT1基因M307位点中GG型和AG型仔猪小肠上皮细胞均能黏附上述3种大肠杆菌,而AA型个体小肠上皮细胞则不能黏附。将上述3种大肠杆菌分别与抗F18ab菌毛高免血清、F18ac菌毛高免血清及抗F18abFedF亚单位单因子血清作用后,则失去黏附仔猪肠上皮细胞能力。上述结果对苏太猪从体外试验上证明了FUT1基因M307位点多态性与断奶仔猪腹泻和水肿病存在着直接的相关性。     

犊牛腹泻大肠杆菌的分离鉴定和耐药性检测

为了分析南京地区奶牛场犊牛腹泻的原因,对犊牛腹泻病料进行细菌分离培养,获得了27株细菌。本试验对这些细菌进行了培养特性、染色特性、生化特性、血清型鉴定、药敏试验和TEM、SHV、CTX-M-1、CTX-M-9型超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）基因的检测。结果显示27株细菌均为大肠杆菌,只有1株细菌对头孢噻吩、头孢唑啉和头孢呋辛耐药,且此菌株检测出CTX-M-1型超广谱β-内酰胺酶基因。试验结果表明犊牛腹泻是由大肠杆菌引起的,犊牛腹泻大肠杆菌能产生CTX-M-1型超广谱β-内酰胺酶,导致对头孢类抗生素耐药性的发生。     

虎源大肠杆菌ESBLs基因型的检测

为检测虎源大肠杆菌的耐药性,根据超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)基因型的流行情况指导临床合理使用抗菌药物,有效控制产ESBLs菌株的流行和感染。实验采用K-B法检测了30株虎源大肠杆菌对20种药物的耐药性,同时用PCR方法对确证的产ESBLs大肠杆菌进行TEM、CTX-M、OXA和SHV基因型检测。结果显示:21株虎源大肠杆菌为产ESBLs株,阳性率为70%。PCR扩增出了片段大小与预期相符的CTX-M型、OXA型、SHV型和TEM型基因。4个基因型的阳性率分别为50%、20%、6. 67%、80%。可见,东北虎林园中产ESBLs的虎源大肠杆菌的检出率较高,TEM型为主要流行基因型。另外,发现产酶大肠杆菌比非产酶大肠杆菌的耐药性更高。     

鸡源大肠杆菌超广谱β-内酰胺酶的检测及耐药性分析

为探明泰州地区鸡源大肠杆菌产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)情况及耐药情况,对13株分离自泰州地区的鸡源大肠杆菌进行ESBLs检测,并采用微量肉汤稀释法测定不同药物对产ESBLs菌和非产ESBLs菌的最小抑菌浓度(MIC).结果显示,13株分离菌中有5株被确定为产ESBLs菌株,阳性率为38.5%.产ESBLs菌对β-内酰胺类抗菌药的耐药性极其严重,耐药率明显高于非产ESBLs菌,二者对氨苄西林的耐药率分别为100%和62.5%,对头孢噻呋的耐药率分别为100%和12.5%,对头孢曲松的耐药率分别为80%和20%,产ESBLs菌对其他抗菌药物的耐药率也明显高于非产ESBLs菌.氨苄西林与舒巴坦(2:1)联用与单用氨苄西林相比,对产ESBLs菌的MIC值降低至单用氨苄西林时的1/16~1/8,但对非产ESBLs菌的MIC值没有明显变化.氨苄西林与阿米卡星(1:1)联用与单用两者中的任何一种相比,对产ESBLs菌和非产ESBLs菌的MIC值均降低至单药时的1/16~1/2.结果表明,临床可选择β-内酰胺酶类抗生素与β-内酰胺酶抑制剂的混合制剂来治疗产ESBLs鸡大肠杆菌的感染,也可尝试将不同种类、不同作用机理药物联合应用来治疗鸡大肠杆菌感染,尤其是耐药性鸡大肠杆菌感染.     

猪源大肠杆菌整合子与耐药性的相关性研究

为分析耐药大肠埃希菌中整合子的流行情况和分子特性,用K-B法分析134株耐药大肠杆菌的药敏情况,并应用PCR方法检测其整合酶基因（intI）和整合子基因盒。结果显示：117株（87.3%）菌株为整合子阳性。表明细菌的多重耐药性与整合子携带高度一致。     

奶牛子宫内膜炎源性大肠埃希菌药敏试验与耐药基因检测

为探索奶牛子宫内膜炎源性大肠埃希菌耐药基因及其耐药性之间的关系。采用K-B纸片法对临床分离的54株奶牛子宫内膜炎源性大肠埃希菌进行12种抗菌药物敏感性测定,应用PCR进行这些抗菌药物相关耐药基因的检测。结果显示,54株大肠埃希菌对复方新诺明、恩诺沙星和四环素的耐药率较高,分别为67%、39%和35%。分离的54株大肠埃希菌中有41株至少含有所检测耐药基因中的1种,CyrA、CyrB、ParC和Tet耐药基因较为普遍,其耐药菌基因检出率依次为96%、83%、100%和95%,13株没有检测到相应的耐药基因。奶牛子宫内膜炎源性大肠埃希菌对常见抗菌药物耐药严重,耐药基因普遍存在于耐药菌株中,除氨基糖苷类耐药菌株,其他3种抗菌药物类型耐药表型与耐药基因检测结果有较高一致性。     

引起仔猪当前腹泻难治的病菌分析及药敏试验

采用实验室方法分离鉴定了引起猪腹泻的细菌,并对分离菌进行超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）检测和对24种抗菌药、5种复方药的敏感性测定。结果显示,分离细菌为大肠杆菌、沙门氏菌、志贺氏菌、奇异变形杆菌,有的且产生ESBLs。药敏试验结果表明该菌对兽医临床中常用的β-内酰胺类抗生素、氟喹诺酮类、氯霉素类、氨基糖苷类等均产生耐药;对粘杆菌素、亚胺培南、美罗培南敏感,β-内酰胺类药物与酶抑制剂联用能使药物对细菌的最低抑菌浓度（M ICs）降低,因此复方β-内酰胺类药物是治疗猪腹泻的有效措施之一。     

广东地区动物源性大肠杆菌的分离及药敏分析

由广东多个地区猪及禽类养殖场采集疑似大肠杆菌病病料,分离出猪源及禽源大肠杆菌共71株。血清型鉴定实验确定52株的血清型,其中猪源大肠杆菌28株,优势血清型为O101及O157,这两种血清型分别占25％与17．9％;禽源大肠杆菌24株,优势血清型为O119,占62．4％。选用10种抗生素试纸进行药敏试验（庆大霉素、复方新诺明、氟哌酸、红霉素、羧苄青霉素、头孢氨苄、青霉素G、氯霉素、氨苄青霉素、丁胺卡那霉素）,结果表明实验菌株耐药性程度较高。     

食品动物源产超广谱β-内酰胺酶大肠杆菌的流行状况调查

本研究旨在了解产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠杆菌和CTX-M型耐药基因在食品动物的流行状况。对分离自养殖场的1273株大肠杆菌(健康动物源755株,患病动物源518株),采用双纸片协同试验筛选ESBLs阳性菌,并通过PCR法和基因测序鉴定阳性菌CTX-M型的基因型。1273株食品动物源大肠杆菌中筛选出产ESBLs阳性菌181株,阳性率为14.2%,其中患病动物阳性率比健康动物高,分别为19.9%和10.3%。151株(83.4%)产ESBLs大肠杆菌中检测到CTX-M型基因,占所有食品动物源大肠杆菌的11.8%,其中以CTX-M-9G为主,阳性率为79.5%(120/151),远高于CTX-M-1G的携带率25.8%(39/151),其中8株同时携带了CTX-M-1G和CTX-M-9G。产ESBLs的大肠杆菌在食品源动物中流行普遍,CTX-M是产ESBLs阳性菌中的主要流行基因型。