链格孢属小孢子种总DNA提取方法的比较

本研究采用液氮研磨法和石英砂研磨法对链格孢属小孢子种总DNA进行提取,并通过超微量分光光度计检测DNA的纯度和浓度及通过琼脂糖凝胶电泳和PCR检测DNA的质量,以期筛选出适合链格孢属小孢子种总DNA提取的方法。结果表明,两种方法均可得到链格孢属小孢子种的DNA,并且两种方法提取基因组DNA的效果无明显的区别。其中,液氮研磨法需要较多的菌丝体、所需时间长、成本高、获取液氮不易,而石英砂研磨法简单快速、时间短、成本低、研磨充分,损失少、可以避免使用液氮等优点。因此,石英砂研磨法是链格孢属小孢子种用于病原种类研究所需总DNA提取的较为理想的方法。     

高山被孢霉DNA提取方法的比较与改进

利用CTAB法、SDS裂解法、氯化苄法和溶菌酶消化法提取高山被孢霉菌团的DNA.结果表明,CTAB法提取的DNA收率与纯度均较高,收率在700μg·g-1菌团以上,蛋白质污染少;SDS裂解法提取的DNA收率和纯度均较低,蛋白质污染严重;氯化苄法提取的DNA纯度较高,且无需苯酚纯化,但其易降解成DNA片段,质量稳定性较差;溶菌酶消化法无需采用液氮研磨,提取的DNA能达到分子生物学分析的要求,但收率较低,且步骤烦琐,成本较高.用改进的CTAB法可得到高纯度、高收率的被孢霉DNA,并可用于酶切或PCR扩增.     

鸡血藤DNA提取方法的研究

[目的]筛选一种适合鸡血藤DNA的提取方法。[方法]以鸡血藤嫩叶为材料,分别采用液氮-CTAB法、石英砂-CTAB法以及石英砂-SDS法提取基因组DNA,利用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测提取的DNA样品,对提取方法进行比较筛选。[结果]电泳检测中,石英砂-CTAB法所提DNA条带亮度最高,质量较好。紫外检测中,石英砂-CTAB法提取的DNA A260/A280值大于1.8,比其他两种方法提取的DNA蛋白质污染小,其提取的DNA纯度和得率均最高,液氮-CTAB法提取DNA得率居中,石英砂-SDS法提取DNA得率较低。[结论]该研究结果表明石英砂比液氮更能简便快速地将叶片研碎,CTAB提取缓冲液比SDS提取缓冲液可更有效地去除杂质,使细胞裂解、DNA析出。因此,石英砂-CTAB法更适合鸡血藤DNA的提取。     

简便烘干在水稻叶片DNA大量提取中的应用

为探索烘干法替代液氮冷冻法研磨水稻叶片提取DNA的可行性,首先比较50℃低温烘干法与液氮冷冻法研磨水稻叶片提取DNA的扩增效果,然后进一步分析不同温度(50、60、70、80、90℃)烘干水稻叶片研磨提取DNA的扩增效果,筛选最佳的烘干温度。结果表明,水稻叶片在50～70℃下烘干磨碎所提取的DNA均能进行有效扩增,以50℃效果最佳,其与液氮冷冻法研磨叶片提取DNA的扩增效果无明显差异。水稻叶片烘干法具有操作简单、费用低廉及实用性强等诸多优点,在DNA大量提取中可较好地替代液氮冷冻法对叶片进行制备,具有一定的推广应用价值。     

4种高梁基因组DNA快速提取方法的比较

[目的]寻找快速、简单、成本低的高粱基因组DNA提取方法。[方法]首先,分别使用液氮研磨法、缓冲液研磨法、烘干研磨法和直接研磨法这4种方法从高粱叶片中提取基因组DNA,然后,通过凝胶电泳、SSR分析和SRAP分析检测所提DNA的浓度和纯度。[结果]采用4种方法提取高粱基因组DNA时的产量相差不大;采用前2种方法提取的DNA降解少、纯度高,可进行有效的SRAP-PCR和SSR-PCR,但缓冲液研磨法的SRAP-PCR结果稍差;而采用后2种方法提取的DNA降解严重、纯度低,但可进行有效的SSR-PCR。[结论]采用4种方法均可在短时间内提取到足够几十次PCR反应的高粱基因组DNA,液氮研磨法和缓冲液研磨法所提取的DNA应用范围更大,而烘干研磨法和直接研磨法所提取的DNA只能用于对片段较小的目的DNA进行特异性PCR。     

4种高粱基因组DNA快速提取方法的比较

[目的]寻找快速、简单、成本低的高粱基因组DNA提取方法。[方法]首先,分别使用液氮研磨法、缓冲液研磨法、烘干研磨法和直接研磨法这4种方法从高粱叶片中提取基因组DNA,然后,通过凝胶电泳、SSR分析和SRAP分析检测所提DNA的浓度和纯度。[结果]采用4种方法提取高粱基因组DNA时的产量相差不大;采用前2种方法提取的DNA降解少,纯度高,可进行有效的SRAP-PCR和SSR-PCR,但缓冲液研磨法的SRAP-PCR结果稍差;而采用后两种方法提取的DNA降解严重,纯度低,但可进行有效的SSR-PCR。[结论]采用4种方法均可在短时间内提取到足够几十次PCR反应的高粱基因组DNA,液氮研磨法和缓冲液研磨法所提取的DNA应用范围更大,而烘干研磨法和直接研磨法所提取的DNA只能用于对片段较小的目的DNA进行特异性PCR。     

东北山葡萄酵母菌基因组DNA提取方法的比较研究

利用液氮研磨法、蜗牛酶法和玻璃珠法提取东北山葡萄分离的酵母菌株S60基因组DNA,采用琼脂糖凝胶电泳、微量核酸蛋白测定仪和PCR方法检测基因组DNA的纯度和浓度。结果显示,蜗牛酶法提取的酵母菌基因组DNA纯度最好、浓度最高;液氮研磨法提取的基因组DNA浓度虽然较高,但含有较多的蛋白等杂质;玻璃珠法提取的酵母菌基因组DNA纯度和浓度均最低。     

玉米叶片硝酸还原酶活性测定方法的优化

以玉米(Zea mays L.)自交系许178为材料,通过考察研磨方法、NADH用量、温度、pH、反应时间、显色时间对玉米叶片硝酸还原酶活性的影响获得最优试验条件。结果表明,石英砂研磨比液氮研磨测得的酶活性高;反应温度35℃、pH 7.5为较适反应条件;反应时间和显色时间均为10 min时测得的硝酸还原酶活性与标准方法相比无显著差异;还原剂NADH用量减少至一半测得的硝酸还原酶活性与标准方法无显著差异。综上所述,玉米叶片硝酸还原酶活性测定的优化处理方案为用石英砂研磨,加入0.15 m L NADH,在35℃、pH 7.5的条件下反应10 min,显色10 min。     

用于PCR检测的扩展青霉基因组DNA提取方法比较

为寻找一种经济、简便、高效的基因组DNA提取方法,进一步开展扩展青霉的分子生物学研究,采用氯化苄法、玻璃珠法、玻璃珠+氯化苄法、试剂盒法4种方法提取扩展青霉的基因组DNA,并测定DNA质量浓度以及进行PCR和电泳分析,比较不同提取方法的效果。结果表明,4种方法均可提取到基因组DNA,其抽提质量优劣依次为试剂盒法、玻璃珠+氯化苄法、玻璃珠法、氯化苄法。其中玻璃珠+氯化苄法提取效率接近试剂盒法,效果良好,并且此法成本低廉、操作简单、结果稳定,可代替昂贵的试剂盒法用于扩展青霉基因组DNA的提取。     

植物总DNA提取方法的改进

[目的]改进植物总DNA的提取方法.[方法]采用2种研磨方式进行植物DNA提取效果的比较.[结果]2种研磨方式所得DNA质量都较高,可用于后续分子生物学研究;采用研磨缓冲液提取的DNA得率高于液氮研磨.[结论]该方法降低了DNA的提取成本,是一种经济实用的DNA提取方法.     

毛白杨ISSR反应体系的建立及优化

为应用ISSR技术开展毛白杨遗传变异分析、辅助育种、品种鉴定、系统进化等研究,以(GTG)6为引物,通过单因子实验分别研究了退火温度、引物浓度、dNTP浓度、Mg2+浓度、Taq DNA聚合酶用量对毛白杨ISSR-PCR反应的影响,建立并优化了适宜于毛白杨ISSR分析的扩增体系: 20 μL PCR反应体系,1×Taq DNA酶缓冲液(10 mmol/L Tris-HCl, 50 mmol/L KCl, 0.1% Trion X100, pH 9.0),1.5 mmol/L MgCl2,1.0 U Taq酶,10 ng模板DNA,0.2 μmol/L引物,0.2 mmol/L dNTP. 引物(GTG)6的最适退火温度为61℃.      

一种适用于PCR的环境友好型植物DNA提取方法(英文)

改进DNA提取方法,利用含2%CTAB、1%SDS、2%PVP、100mmol/LTris-Cl(pH8.0)、20mmol/LEDTA(pH8.0)和1.4mol/LNaCl的DNA提取缓冲液,提取了不同种属12种植物的DNA,并对其进行了PCR检测.结果显示,所提取的DNA符合PCR试验要求,用真核生物ITS4/ITS5通用引物均能扩增出清晰的条带.该方法无需酚仿抽提,简单、高效、环保,特别适合大规模植物DNA的提取.     

一种高效提取棉花细胞核的技术

[目的]研究一种高效提取棉花细胞核的技术,为棉花大片段基因组文库的构建和全基因组测序提供技术。支持。[方法]采用“刀切法”,在含有Triton X-100和PVP40的冰冷细胞核提取缓冲液中,用锋利刀片切割发育1周的棉花黄化子叶以释放细胞核,并经过100、50、和30μm的膜过滤后离心收集细胞核,同时选取棉花幼嫩叶片和黄化处理时间不同的子叶分别用研磨法和刀切法作对照。[结果]刀切法所得细胞核干净完整杂质少,不需要研磨和巯基乙醇等处理,方便快捷无毒害,成功率达100％。[结论]建立了一种简单、高效快捷、无毒害的棉花细胞核提取技术。     

一种高效提取棉花细胞核的技术

1材料与方法1．1材料二倍体亚洲棉品种石系亚1号,来自中国农业科学院棉花研究所。试剂HEPES购自Amresco公司,DTY购自BioBasicInc．,TritonX-100、PVP40购自Sigma公司,DAPI购自Roche公司,其他试剂均为国产分析纯。     

提取地衣真菌总DNA的简便方法

利用液氮破碎地衣体的上下表皮层及藻层，再用氯化苄在弱碱条件下破坏真菌细胞壁，从而获得地衣真菌总ＤＮＡ．此方法简便、省时、价廉，获得的总ＤＮＡ蛋白质污染少，产量高，可进一步进行ＰＣＲ扩增．     

硝态氮浓度对冬小麦幼苗根系活力及根际pH值的影响(英文)

[Objective] The aim was to research the effect of concentration of NO-3-N on root vigor and rhizosphere pH of winter wheat seedlings under water culture.[Method]By selecting Hoagland’s nutritional solution as cultural medium and winter wheat as material of experiment,on the basis,testing root vigor,nutrient solution NO-3 and change of pH values under the different level of disposal,such as high(containing NO-3-N 15 mmol/L),medium(containing NO-3-N 7.5 mmol/L)and lower(containing NO-3-N 2.5 mmol/L).[Result]The results of this research showed that the effect of different nitrogen level on the wastage of nutrient solution NO-3,the changes of pH values and root vigor is obvious under the hydroponics condition.[Conclusion]Though NO-3 is a safe nitrogen sources when it was supplied to plants too more,it would restrain assimilation on nitrate nitrogen farther,but when it was supplied to plants too little,it would lead to deficiency of NO-3 that plants uptake and decrease of root activity,so it isn’t useful to wheat young seedling to absorb nitrogen nutrition.     

烟草内生真菌Penicillium janthinellum的代谢表型分析

为了研究烟草内生真菌P. janthinellum的代谢表型特征,本文利用 BIOLOG 细胞表型芯片技术,对烟草内生真菌的 950 种代谢表型进行了测定。结果表明,烟草内生真菌能够代谢101种碳源、304种氮源、8种磷源、1种硫源；能在高达10%氯化钠、6%氯化钾、5% 硫酸钠、20%乙二醇、6%甲酸钠、7%尿素、12% 乳酸钠、200 mmol/L磷酸钠、100 mmol/L硝酸钠、100 mmol/L 硫酸铵中均能较好的生长；其适应 pH 值范围为 5-10； pH为5.2时,20-200 mmol/L的苯甲酸钠中无法生存。     

适于AFLP分析的柿树DNA提取方法研究

对柿基因组DNA的提取方法进行了研究,结果表明,采用提取液中含100mmol/LTris-HCl(pH8 0),20mmol/LEDTA,1 4mol/LNaCl,2%CTAB,1%PVP-40,10mmol/LNa2S2O5及100mmol/Lβ—巯基乙醇(用前加入)的改良CTAB法,可有效去除单宁、酚类、色素等,提取的柿叶片DNA质量和纯度较高,可用于AFLP分析。     

青钱柳ISSR-PCR反应体系的优化

采用改进的SDS法提取青钱柳基因组DNA,测试青钱柳ISSR扩增的最适退火温度,并采用单因素试验,测试了模板DNA、Mg2+、dNTP、BSA、引物\Taq酶6个因素对青钱柳ISSR扩增的影响。结果表明:合适的退火温度为56.3℃;适宜的扩增体系为:10μlPCR反应体积中,1×Taq酶配套缓冲液浓度为(10 mmol/LTris.HCl,pH值9.0,浓度为50 mmol/LKCl,0.1%Triton X-100),12 ng模板DNA,浓度为1.5 mmol/LMgCl2,浓度为1.0 mmol/L4×dNTP,1mg/ml BSA,15 pmol引物,0.75 UTaq酶。     

百子莲胚性愈伤组织玻璃化法超低温保存体系建立及遗传稳定性分析

采用单因素随机区组试验及多因素、多水平正交试验方案建立了百子莲胚性愈伤组织(embryogenic callus,ECs)玻璃化法超低温保存体系。将由花梗诱导的胚性愈伤组织接种至预培养基(MS+0.5mol/L蔗糖+1%琼脂)上,在4℃下预培养2d后,在室温下加入装载液(MS+0.4mol/L蔗糖+2mol/L丙三醇+10mmol/L KNO3)处理60min;利用改良后的PVS 2玻璃化溶液(MS+0.4mol/L蔗糖+30%丙三醇+15%乙二醇+15%DMSO)在0℃下处理40min,将含有ECs的冻存管投入液氮中冻存1h;在40℃水浴中快速解冻90s;用洗涤液(MS+1.2mol/L蔗糖+10mmol/L KNO3)处理30min,每10min换1次新鲜的洗涤液;洗涤后,接种到胚性愈伤组织增殖培养基上恢复培养24h后,相对成活率分别达56.9%(TTC法)和43.3%(Evans blue法)。恢复培养55d的百子莲胚性愈伤组织经过AFLP多态性检测后未发现基因组变异,证明该方法可用于百子莲种质资源的超低温保存。