饲粮蛋白质水平对肥育猪肌肉嫩度及背最长肌钙调磷酸酶-活化T细胞核因子信号途径的影响

本试验旨在研究饲粮理想蛋白质水平对背最长肌嫩度及钙调磷酸酶-活化T细胞核因子(CaN-NFAT)信号途径相关蛋白和钙蛋白酶抑制蛋白(CAST)mRNA表达量的影响.选择初始重约50kg的杜洛克×长白×大白三元杂交猪90头,随机分配到3个处理,每个处理3个重复,每个重复10头,公母各占1/2.3个处理分别采用12％、16...     

日粮不同蛋白质水平对猪骨骼肌钙蛋白酶抑制蛋白和钙蛋白酶基因表达及嫩度的影响

为研究饲料不同蛋白质含量对calpastatin和μ-calpain mRNA在骨骼肌中的表达量,选用54头约50 kgLY(长×大)二元杂交去势公猪.随机分为3个处理,每个处理3个重复,每个重复3头猪,分别饲喂蛋白质水平为10%、18%和26%的日粮,各日粮能量及氨基酸模式保持一致,饲养76 d后屠宰取样,用荧光相对定量PcR测定猪背最长肌中calpastatin和μ-calpain mRNA在骨骼肌中的表达量,及其对剪切力的影响.结果表明,日粮不同蛋白质水平对calloastatin和μ-calpain mRNA在骨骼肌中的表达量有显著影响(P<0.01).calpastatin mRNA在骨骼肌中的表达量随日粮蛋白质水平的升高而升高.μ-calpain mRNA在骨骼肌中的表达量随日粮蛋白质水平的升高而下降.骨骼肌剪切力与calpastatin表达量显著正相关,骨骼肌中calpastatin mRNA的表达量越高,骨骼肌剪切力值越高(P<0.01),相关系数为0.859.骨骼肌剪切力与μ-calpain显著负相关,骨骼肌中μ-calpain mRNA的表达量越高,骨骼肌剪切力值越低(P<0.05),相关系数为-0.748.骨骼肌中calpastatin mRNA的表达量与μ- calpain mRNA的表达量显著负相关,calpastatin mRNA表达量越高,μ-calpain mRNA的表达量越低(P<0.01),相关系数为-0.875.即日粮不同蛋白质水平对calpastatin和μ-calpain mRNA在骨骼肌中的表达量有显著影响.     

饲粮蛋白质水平对猪背最长肌calpainl含量、嫩度及血液激素水平的影响

为研究饲粮蛋白质水平对猪背最长肌calpain1表达的影响及其与肌肉嫩度的关系,选用54头约50kg的LY(长×大)二元杂交去势公猪,随机分为3个处理,每个处理3个重复,每个重复6头猪,分别饲喂10%、18%、26%3种蛋白质水平的饲粮,各饲粮能量及氨基酸模式保持一致,饲养76 d后屠宰取样,测定猪背最长肌中calpain1的相对含量、背最长肌的嫩度及血浆中的主要激素水平.结果表明,calpain1的相对含量和剪切力值均随蛋白质水平的升高而升高,但两者之间相关性不显著(P>0.05).血浆中皮质醇、甲状腺素(T<,4>)的含量随蛋白质水平的升高而减少(P=0.211,P=0.039),胰岛素的含量随蛋白质水平的升高而增加(P=0.103).Calpain1可能参与了血液中主要激素对蛋白质降解的调控过程.     

不同饲喂方式对生长猪背最长肌中钙蛋白酶抑制蛋白表达量以及肉嫩度的影响

为研究不同饲喂方式对猪背最长肌钙蛋白酶抑制蛋白(calpastatin)表达量以及肉嫩度的影响,选用54头约60kg的三元杂交生长肥育猪,随机分为3个处理,每个处理3个重复,每个重复6头猪,分别按照自由采食组(对照)、限饲组(30%)、补偿生长组(前20d限饲30%后20d自由采食)进行不同的饲养。试验结果表明:自由组、补偿生长组、限饲组的肌纤维剪切力和钙蛋白酶抑制蛋白表达量依次显著升高,且随着钙蛋白酶抑制蛋白表达量的增多,剪切力值有上升的趋势。     

钙蛋白酶抑制蛋白对猪肉品质的影响

钙蛋白酶蛋白系统是影响肌肉生长和宰后肉嫩化的一个重要因素,主要由钙蛋白酶(μ-calpain和m-calpain)、钙蛋白酶抑制蛋白(calpastatin,CAST)及骨骼肌特异性钙蛋白酶组成,钙蛋白酶抑制蛋白是一种内源性专一抑制钙蛋白酶活性的蛋白,参与了调控肌原纤维蛋白的降解并在其中发挥了关键作用。本文概述了钙蛋白酶抑制蛋白的结构、功能及其对肌肉蛋白质的增加、提高肉嫩度的作用。     

不同蛋白水平饲粮对肉兔骨骼肌发育及相关因子表达的影响

体况相近的断奶伊拉肉兔30只,随机分为3组:高蛋白饲粮组(HPD)、中蛋白饲粮组(MPD)和低蛋白饲粮组(LPD),每组10个重复,每个重复1只兔。结果显示:随着饲粮中蛋白含量的增加,家兔的体质量、胴体质量、前腿质量、后腿质量、前腿质量/体质量和后腿质量/体质量显著增加(P0.05);与MPD比,HPD显著增加血浆中总蛋白、尿素和胰岛素的含量(P0.05);与MPD和LPD相比,HPD组家兔显著增加了骨骼肌中胰岛素样生长因子1(IGF1)、IGF1R、肌原性决定因子(MYOD)、肌原因子5(MYF5)、肌生成抑制蛋白(MSTN)、MYF5和包WW包含体E3泛素蛋白酶体连接酶1(WWP)的mRNA水平(P0.05)。从整体上看,饲粮中蛋白水平能显著影响家兔骨骼肌发育。高蛋白饲粮促进骨骼肌发育可能与IGF1、MYOD和MYF5基因有关;低蛋白饲粮抑制骨骼肌发育可能与IGF1的低表达有关。     

不同饲喂方式对猪背最长肌钙蛋白酶抑制蛋白和钙蛋白酶基因表达及剪切力的影响

为研究不同饲喂方式对猪背最长肌钙蛋白酶抑制蛋白(calpastatin)和μ-钙蛋白酶(μ-calpain)mRNA丰度,以及对肌肉剪切力的影响,54头约60 kg的杜×长×大三元杂交去势公猪被随机分为3个组,每组3个重复,每个重复6头猪.第1组为对照组,自由采食;第2组为补偿生长组,前20 d限饲30%,后20 d自由采食;第3组为限饲组,全期限饲30%.所有猪饲养40 d后屠宰取样,用实时定量PCR测定猪背最长肌中calpastatin和μ-calpain mRNA相对丰度.结果表明,背最长肌calpastatin和μ-calpain mRNA相对丰度在自由采食组和补偿生长组间差异不显著(P>0.05);在补偿生长组和限饲组问差异显著(P<0.05);在自由采食组和限饲组间差异极显著(P<0.01).背最长肌剪切力与calpastatin表达量显著正相关,相关系数为0.505 9.背最长肌剪切力与μ-calpain相对丰度显著负相关,相关系数为-0.475 7.背最长肌中calpastatin mRNA相对丰度与μ-calpain mRNA相对丰度负相关,相关系数为-0.055 9.结果表明补偿生长和限饲均可以增强calpastatin和μ-calpain基因在转录水平的调控.     

猪核转录因子C-Rel亚基的克隆及PRV体外感染PK-15细胞对C-Rel转录时相的影响

核转录因子κB是普遍存在于真核细胞中的转录调节因子,其信号通路在细菌、病毒感染宿主致病过程中起关键作用,直接调控宿主先天性免疫反应及细胞增殖、分化和凋亡,它的异常活化可能是PRV感染导致免疫抑制的重要原因。为进一步了解NF-κB C-Rel亚基序列特征及PRV对C-Rel mRNA转录时相的影响,本试验采用RT-PCR从猪外周血淋巴细胞中扩增NF-κB C-Rel ORF,获得阳性质粒后测序,进行相关生物信息学分析;运用实时荧光定量PCR技术对PRV感染PK-15细胞后不同时期C-Rel mRNA的转录水平进行定量分析。序列分析结果表明:所扩增猪C-Rel亚基ORF长1 773bp,编码590aa;猪C-Rel核苷酸序列与不同动物的C-Rel核苷酸序列相似性较高;大部分位于细胞核内(76.0%),无信号肽及跨膜区。荧光定量结果表明:与对照组相比,感染后0⁴h,C-Rel转录水平下调,2和4h差异显著(P<0.05);44h,C-Rel转录水平下调,2和4h差异显著(P<0.05);4¹2h,快速上调,12h达到转录高峰(P<0.01);12h后逐渐下降,2412h,快速上调,12h达到转录高峰(P<0.01);12h后逐渐下降,24¹20h,维持在较低水平,其中36h差异极显著(P<0.01),48、72和120h差异显著(P<0.05)。本研究推断PRV感染早期较弱的先天性免疫应答可能与C-Rel活化水平低下有关。     

饲粮营养水平对猪背最长肌IMF含量及部分相关因子的影响

试验选用84头体重接近10 kg的杜洛克×长白×大约克三元杂交(DLY)阉公猪,随机分成2组,每组6个重复,每个重复7头猪。研究在NRC(1998)标(准对照组)和荣昌猪饲养标(准试验组)2种饲粮条件下,营养水平对DLY生长肥育期血液胰岛素、背最长肌IMFc、AMPI、R含量及ACC mRNA表达量的影响。结果表明:①荣昌猪饲养标准下,各阶段试验组背最长肌肌内脂肪含量均高于对照组,50kg时达到了显著水平(P<0.05)。②试验组背最长肌cAMP水平50kg时低于对照组(P<0.01);IR含量80kg时显著低于对照组(P<0.05)。     

猪非典型瘟病毒云南株Mut蛋白的特征分析及其对宿主细胞NF-κB转录活化的影响

猪非典型瘟病毒(APPV)是近年来新发现的猪病毒性病原,给养猪业健康发展带来了严重的威胁。课题组前期研究发现了APPV云南株(APPV-YN)导致感染猪临床症状非典型化的关键基因Mut,为探讨APPV-YN Mut的生物学特征及其对宿主细胞NF-κB信号通路转录活化的影响,揭示APPV非典型化的机制。利用SnapGene、ProtParam、PredictProtein、TMHMM、SignaIP 4、ProtScale等在线软件对APPV-YN Mut基因表达蛋白的理化性质、亚细胞定位、磷酸化位点等进行分析预测;将重组载体pCMV-Mut转染至HEK-293细胞,确定蛋白稳定表达后利用TNF-α刺激NF-κB信号通路使其活化,分析APPV-YN Mut对NF-κB转录活性及其对NF-κB P65核质转运的影响。生物信息学分析结果显示,Mut蛋白为亲水性的稳定蛋白,无跨膜结构和信号肽,可能主要定位于细胞质,二级结构主要以无规则卷曲为主,三级结构稳定,可能作用于PKC、P38MAPK、PKA、EGFR、CDK5等相关激酶及蛋白受体;Mut蛋白在HEK-293细胞成功表达,大小约为15 k...     

不同蛋白质水平饲粮对生长育肥猪生长性能、免疫机能及臀中肌中μ-calpain表达量的影响

本试验探讨了不同蛋白质水平饲粮对生长育肥猪生产性能、免疫机能及臀中肌中μ-calpain表达量的影响.选用54头平均体重53 kg的长白×约克二元杂交去势公猪,采用随机区组设计,随机分为3个处理,分别为低蛋白质组(10%)、中蛋白质组(18%)和高蛋白质组(26%).每个处理3个重复,每个重复6头猪.结果表明,随着蛋白质水平的提高.生长育肥猪生产性能有提高趋势,血清免疫球蛋白和补体含量有增加趋势,肌肉中μ-calpain的表达量显著提高.     

饲粮营养水平对猪血液生化指标、背最长肌IMF含量及LPL mRNA表达量的影响

试验选用84头体重接近10kg杜洛克×长白×大约克(DLY)三元杂交阉公猪,随机分成2组,组内设6个重复,每个重复7头猪.研究在NRC(1998)标准(对照组)、荣昌猪(GB 7223-1987)饲养标准(试验组)两种饲粮条件下,营养水平对DLY生长肥育猪血液生化指标、背最长肌肌内脂肪(IMF)含量及LPLmRNA表达量的影响.结果表明(1)对照组及试验组生长肥育猪血清中高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量、背最长肌肌内脂肪及LPL mRNA表达量含量随体重增加均呈上升趋势,35～80kg阶段血清游离脂肪酸(FFA)呈上升趋势,而后下降,而低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)与高密度脂蛋白胆固醇比值(LDL-C/HDL-C)呈下降趋势;(2)各阶段试验组背最长肌肌内脂肪含量均高于对照组,体重50kg时达到显著水平(P＜0.05);体重110kg时,试验组背最长肌LPL mRNA表达量高于对照组(P＞0.05);降低饲粮营养水平可降低35～110kg阶段血清胆固醇(TC)、HDL-C和FFA含量,降低了50～80kg阶段血清甘油三酯(TG)、LDL-C和极低密度脂蛋白胆固醇(VLDL-C)含量(P＞0.05).