秋水仙碱处理油菜离体小孢子的染色体加倍效应

用秋水仙碱对52份甘蓝型油菜品系（种）和它们的杂种离体小孢子的单倍体二倍化技术进行了研究。从花药中分离出的单核晚期小孢子接种在含10－800mg/L秋水仙碱的NLN液体培养基中处理16－90h后转入无秋水仙碱的相同培养基诱导胚状体。结果表明，用10mg/L秋水仙碱处理小孢子48h，10份材料的双单倍体植株变幅为37.10%-90.12%，平均为65.44%。50mg/L处理48h的8份材料是48.72%-97.81%，平均88.86%。100－800mg/L处理16－48h的试验，多数加倍率在90％－100％之间。但该处理药用量大，费用高，而且对小孢子毒性大，胚状体再生率低。试验还表明，秋水仙碱处理小孢子诱导的二倍体植株所产生的花一般均能结籽，带有不孕花的嵌合植株极少。用秋水碱处理水孢子再生的植株的根或芽所产生的二倍体植株多是可孕和不孕花共生的嵌合植株，自交后产生的单株种子很少，难以达到遗传和育种所需的群体量。     

甘蓝型油菜小孢子加倍培养技术

利用小孢子加倍培养技术可以培育基因纯合、稳定的遗传材料,掌握该技术对加速育种进度有重要意义。从选取花蕾、游离小孢子分离、小孢子加倍培养、胚诱导培养、胚状体培养、再生苗培养、再生植株倍性鉴定等方面总结了甘蓝型油菜小孢子加倍培养技术。     

甘蓝型油菜小孢子培养的胚诱导和加倍效率的研究

以大田甘蓝型油菜为材料，对小孢子培养不同取样时间和不同开花时期接种的胚状体诱导频率和不同加倍方法的加倍效率进行了研究，结果表明：大田甘蓝型油菜小孢子培养最佳取样时间是上午7：00时，此时取样出胚率达4．31枚／蕾；接种最佳开花时期是单株开第一朵花后6～20d的2周时间，此开花时期接种出胚率为4．08～4．34枚／蕾。在不同加倍方法中，以50mg／L秋水仙碱处理游离小孢子48h为最佳，并且能够获得76．47％最高加倍效率。     

甘蓝型油菜小孢子植株加倍方法及对植株农艺性状的影响研究

以甘蓝型油菜９５Ｚ１９２的组培小孢子植株为供试材料,以移栽前在试管培养过程中加倍、移栽时浸根中倍、移栽后花期滴腋中倍共３种方法的１４个处理进行油菜小孢子植株 另倍试验。结果显示：移霜时浸根加倍效果最好,植株成活率和加倍率最高。其中０．０５％秋水仙碱＋１．５％二甲基亚砚液浸根４ｄ的处理植成活率９１．３０％、加倍率９３．６５％,效果最好;浸根２ｄ的处理植株成活率９５．４５％,加倍率８０．９５％,效果闪     

甘蓝型油菜F1代小孢子的培养方法

游离小孢子具有单倍体核、单细胞和较高同步性等特点,小孢子培养已成为从甘蓝型油菜获得大量单倍体的主要途径。游离小孢子经离体培养和染色体加倍后,能获得纯和的双单倍体植株,小孢子离体培养是加快育种进程的有效方法。本文对游离小孢子离体培养进行了研究,以期对我院油菜育种起到一定的促进作用。     

甘蓝型油菜小孢子培养技术优化

为了优化甘蓝型油菜小孢子培养技术,提高胚诱导率及成苗率,以油菜N14009为试验材料进行小孢子培养,研究变温预处理、活性炭浓度、培养基类型和琼脂浓度及秋水仙碱浓度对小孢子培养的影响。结果表明：4℃、32.5℃变温预处理各1 d的处理效果较好,胚诱导率为4.23胚/蕾;活性炭质量浓度为0.5 g/L时,胚诱导率达到4.23胚/蕾,效果最好; MS、B5培养基中琼脂质量浓度为12 g/L时,成苗率均最高,分别达51.16%、46.67%;把再生植株转到含有不同质量浓度秋水碱的MS培养基上培养,质量浓度为80 mg/L时,N14009的加倍率最高,为43.47%,并且成苗率达到76.67%。     

春性甘蓝型油菜小孢子培养技术初探

通过小孢子培养，获得了了青油３３１的单位体植株。对甘蓝型油菜小孢子培养的初步研究表明，不同材料间小孢子的产胚量存在显著差异，春性材料的产胚量高于冬性材料。     

甘蓝型油菜小孢子胚状体诱导的主要影响因素研究

对基因型、小孢子发育时期、高温起始培养、培养基等甘蓝型油菜游离小孢子培养诱导胚状体的主要影响因素,研究表明：基因型和小孢子发育时期起决定性的作用,不同品种间甚至同一品种内的个体间,诱导频率差异显著;适宜培养的小孢子发育时期为单核晚期;培养基中加入活性炭可提高胚状体诱导频率;起始培养高温热击促进胚状体诱导。成熟胚状体在无激素Ｂ５培养基中,直接再生出植株或经次生胚继代培养再生植株。     

供体材料和培养基成份对甘蓝型油菜小孢子胚状体产量的影响？

以甘蓝型油菜品种（系）和杂种Ｆ１代为材料，研究了供试材料和培养基成分对小孢子胚产量的影响。不同材料胚产量有显著差异，变化范围为０－１２．８６。通常，杂种Ｆ１代胚产量较品种（系）高。同一材料不同单株间胚产量亦有差异。     

基因枪转化甘蓝型油菜小孢子体系的建立

以甘蓝型油菜花油3号、湘油15号为材料,优化了甘蓝型油菜小孢子再生胚状体的条件,建立起甘蓝型油菜小孢子的高效再生体系。在主花序第1朵花开后第4d从主花序上取4．0-4．5mm花蕾,每mL NLN培养基接种1个花蕾的小孢子,在32℃起始热激培养36h,胚状体产生频率最高,花油3号达24．80个胚状体／花蕾,湘油15号达16．50个胚状体／花蕾。用基因枪转化甘蓝型油菜花油3号和湘油15号的小孢子,PCR-Southem检测证明获得了转基因植株。在小孢子培养前进行基因枪轰击及在胚状体诱导培养时进行筛选,转化频率较高,花油3号可达2．1株转基因植株／花蕾,湘油15号可达1．2株转基因植株／花蕾。     

春性甘蓝型油菜小孢子培养技术研究

对一批春性甘蓝型油菜(Brassica napus)杂种F1及其亲本进行小孢子培养的结果表明,不同组合(基因型)出胚率差异比较大,2006年22份材料(基因型)中有21份出胚,其中40.91%的材料每蕾出胚数在5个以上,31.82%的材料每蕾出胚数在10个以上;杂交组合的出胚率大部分高于其亲本,主枝的产胚率绝大部分都高于其分枝;秋水仙碱不同处理中以0.6 g/L浓度处理5.0 h和3.4 g/L浓度处理1.5 h,植株成活率和加倍率最高;经秋水仙碱加倍后可育的植株大部分花粉活力较高,结实指数较高;而半可育的植株花粉活力低,并有50%的植株结实指数低于1。     

不同基因型亚麻花粉小孢子离体培养研究

[目的]研究不同基因型亚麻花粉小孢子离体培养,建立亚麻花粉小孢子离体培养再生体系,以期加快亚麻单倍体育种进程。[方法]以5种不同基因型亚麻的花粉小孢子为外植体,研究不同基因型亚麻愈伤组织诱导率、绿苗的分化率的差异,筛选适宜亚麻花粉小孢子培养基。[结果]不同基因型的亚麻花粉愈伤组织的诱导率、绿苗分化率差异显著,9601和9605愈伤组织的诱导率较高,分别为30.8%和28.6%;9601组合的花粉绿苗分化频率最高为14.5%。其次为9718和9712,分化率分别为11.5%和8.0%;筛选出亚麻花粉小孢子适宜的愈伤组织诱导培养基HF1、绿苗分化培养基HF2。[结论]初步建立了亚麻花粉小孢子离体培养再生体系,为亚麻单倍体育种、突变体筛选、转基因等研究奠定了基础。     

柿品种禅寺丸的花粉染色体加倍研究

 以柿品种禅寺丸的雄花芽为试材 ,在了解花粉母细胞减数分裂进程基础上 ,对影响花粉染色体加倍的因素进行了研究。结果表明 ,(1)秋水仙素溶液处理浓度以 0 .3%～ 0 .5 %为宜 ;(2 )合适的处理时期为前期I的双线期至终变期 ,巨大花粉比例可达 4 0 .6 % ;(3)综合考虑巨大花粉比例和处理后雄花收集率 ,注射次数以 3次为佳 ;(4)细胞学观测巨大花粉主要由二分体形成 ,并结合花粉细胞核体积观测 ,可判定巨大花粉即为染色体加倍的 2n花粉。     

甘蓝型油菜与黑芥双倍体减数分裂的原位杂交分析

【目的】探明植物杂种后代减数分裂异常与花粉败育之间的关系。【方法】通过甘蓝型油菜与黑芥种间杂交和基因组加倍,获得芸薹属三基因组双倍体,采用基因组原位杂交方法,观察三基因组双倍体花粉母细胞的减数分裂规律。【结果】与单倍体相比,双倍体花粉育性得到一定恢复,但可育花粉的比例较低,只有10%~20%。基因组原位杂交结果显示,双倍体花粉母细胞减数分裂终变期染色体以形成同源二价体为主,但也有部分染色体形成四价体或六价体。四价体有3种形式:B基因组染色体形成的四价体、AC基因组染色体形成的四价体及B与AC基因组之间形成的异配四价体。减数分裂后期Ⅰ染色体均等分离的细胞占总数的70%左右,在第2次减数分裂期也观察到非正常分裂如非四分孢子、微核等现象。【结论】减数分裂过程中的染色体异常行为可能是导致花粉育性不高的重要原因;虽然不正常的减数分裂导致花粉育性下降,但双亲染色体的异源联会可为双亲遗传物质的交换提供条件。     

Study on Pollen Chromosome Doubling in Zenjimaru Persimmon

The factors influencing pollen chromosome doubling in Zenjimaru persimmon were studied,based on the knowledge of meiosis process of pollen mother cells. The results showed: (1) the suitable concen-tration of colchicine was 0.3 - 0.5%; (2) the best doubling effect could be obtained during the period fromthe dipiotene stage to the diakinasis stage, and the highest proportion was up to 40.6 %; (3) considering giantpollen ratio and proportion of staminate-flower collection, the better treating frequency was 3 times; (4) giantpollen, which formed mainly from dyad and had bigger cell nucleus volume, was unreduced and hexaploid.     

甘蓝型油菜杂交组合的灰色评判

用6个细胞质雄性不育系与5个恢复系配置30个杂交组合,对这些杂交组合的16个农艺性状进行了2 a重复鉴定。应用灰色关联分析法对这30个杂交组合进行综合评价,结果表明,在30个油菜杂交组合中,有8个一等组合,15个二等组合,7个三等组合;在亲本方面,以L451和L89作母本较好,以L161、秦油3号作父本较好,杂交后代均有不同程度的杂交优势,其中L89×L161的杂交优势最高,L161可作为亲和力较高的自交系。     

秋水仙素对当归多倍体愈伤组织诱导的影响因素分析

在添加浓度为１００ｍｇ／Ｌ秋水仙素的继代培养基上，对体积约为０．５ｃｍ３和０．３ｃｍ３的当归愈伤组织分别处理１０ｄ、２０ｄ、２６ｄ和３５ｄ，并在处理结束后的第１ｄ和第１０ｄ取样，观察细胞倍性的变化趋势。结果表明：处理时间对４ｘ细胞比例有极显著的影响；在处理结束后的恢复生长中，二倍体细胞明显增加，八倍体细胞显著减少，四倍体细胞则保持稳定；在长时间的诱导处理中，接种物团块大小对加倍效果无显著影响     

小麦花药诱导产生单倍体植株的染色体加倍技术研究

为了提高小麦花药单倍体植株的加倍效率,以小麦冀5006/9204和核生2号/08004 F1杂交组合为试材,用不同浓度的秋水仙碱分别对小麦花药和植株分蘖节进行了处理,其中花药处理方法为在C17诱导培养基中分别加入浓度0.02‰、0.05‰和0.10‰的秋水仙碱,分蘖节处理方法为分别用浓度0.20‰、0.50‰、0.75‰和1.00‰的秋水仙碱浸泡单倍体再生植株分蘖节各5 h和10 h,研究秋水仙碱不同浓度与处理方法对染色体加倍率的影响。结果表明：在含有秋水仙碱0.02‰的诱导培养基上再生单倍体植株的染色体加倍率最高,冀5006/9204和核生2号/08004 F1代杂交组合的染色体加倍效率分别为52.38%和47.37%;0.75‰秋水仙碱溶液浸泡分蘖节5 h的染色体加倍率最高,为65.06%。尽管我们用秋水仙碱处理花药的加倍率不如处理分蘖节的效果好,但该方法可能比处理分蘖节更经济、简便,可达到快繁与加倍同时进行的目的。     

5种甘蓝型油菜细胞质雄性不育系的细胞学观察

采用石蜡制片方法,对不缺绿ogu、陕3A型、nap、pol、758A细胞质雄性不育系及其保持系的小孢子发生和花粉发育过程进行细胞学观察和比较,以确定这些不育系的败育时期和细胞学特征。结果表明,不缺绿型ogu CMS花药败育受阻于四分体至单核花粉时期,败育特点是四分体时期持续较长,绒毡层延迟退化。陕3A型、nap、Pol CMS花粉败育发生在孢原细胞时期,少数花药会继续发育产生有活力花粉粒,表现微粉现象。758A的败育时期在孢原细胞时期,败育特点为没有造孢细胞和壁细胞的分化,不能形成药室和花粉粒,败育比较彻底。