丝瓜多酚氧化酶的酶学特性初步研究

以邻苯二酚为底物,应用分光光度法对丝瓜多酚氧化酶（PPO）的酶学特性进行研究。结果表明,丝瓜多酚氧化酶的最适反应温度是20 ℃,最适pH值是6.8。反应体系在15～25 ℃、pH值6.4～7.2之间有较高的活性。丝瓜多酚氧化酶的热稳定性试验表明,在沸水中处理3 min,残留的酶活性仅为处理前的4.81 %,而在60 ℃处理3 min,残留的酶活性还有38.08 %。动力学研究结果表明,以邻苯二酚为底物时,米氏方程K_m=0.067 56 mol·L^-1,V_max=0.238 5 A₄₁₀·min^-1。单一的抑制剂VC和硫代硫酸钠对丝瓜多酚氧化酶活性有抑制作用,但有效抑制浓度不同,VC的有效抑制浓度最低,为50.0 mg·L^-1,其次是硫代硫酸钠,为100 mg·L^-1,柠檬酸的抑制效果最弱。     

蜜柚多酚氧化酶的酶学特性与活性测定研究

以邻苯二酚为底物,采用分光光度法在420nm处测定蜜柚多酚氧化酶(PPO)的活性,研究底物浓度、pH、温度及酶液浓度对PPO活性的影响,并建立了酶促褐变反应动力学方程。结果表明:蜜柚多酚氧化酶的酶促反应符合米氏方程所描述的单底物酶促反应动力学,以邻苯二酚为底物的最大反应速度为:Vmax=22.452U/min,Km=128.2mmol/L。蜜柚多酚氧化酶作用的最适pH6.4,最适温度为10℃。不同时间的蜜柚多酚氧化酶的平均活性呈逐渐下降的趋势。     

红芝组成型漆酶酶学性质的研究

研究了温度、pH值、金属离子和抑制剂对红芝漆酶活性和稳定性的影响,测定该漆酶的Km值和Vmax。结果表明:红芝漆酶最适反应温度为60℃,低于50℃时较稳定;最适pH值为3.0,在pH 2.5~4.0的范围表现出较强的稳定性;Cu2+、Mn2+、Mg2+对酶活有促进作用,而Cr3+、Hg2+、Fe2+和抑制剂EDTA、DMSO、SDS对酶活有抑制作用;以愈创木酚为底物时Km值为0.13 mmol/L,最大反应速率Vmax为234 nmol.mL-1.min-1。     

香菇漆酶同工酶的部分酶学性质的研究

通过丙酮分级沉淀、DEAE-纤维素离子柱层析和Sephadex G100柱层析得到两种香菇漆酶同工酶,分别命名为lac1和lac2,并对其理化性质进行了研究.考察了香菇漆酶同工酶最适反应温度和pH值、热稳定性和pH值稳定性、反应动力学常数以及金属离子对酶活的影响.试验结果表明:Lac1、lac2最适作用温度都为30℃,在不高于40℃的条件下保存30 min,lac1残余酶活在60%以上,lac2在不高于60℃有较高热稳定性,残余酶活在80%以上.最适pH值,lac1为3.6,lac2为4.0.pH值3.0～4.8,lac1有较强稳定性,在pH值4.0～4.6,lac2有较强的稳定性.以邻联甲苯胺为底物lac1和lac2的Km分别为0.964 mmol/L和1.38 mmol/L.金属离子Cl-对lacl有激活作用,Ag 、Mn2 对lac1有抑制作用.金属离子Ba2 和Cu2 对lac2有激活作用,Fe3 、Cl-、Ca2 、Zn2 、Ag 、Mn2 对lac2有抑制作用.     

香蕉皮多酚氧化酶特性研究

研究了香蕉皮中多酚氧化酶(PPO)的特性。结果表明,香蕉皮PPO的最适温度为35℃,最适p H值为6.5,75℃以上水浴5min、100℃水浴20s可以完全钝化香蕉皮PPO的活性,香蕉皮PPO存在同工酶。香蕉皮PPO的最适反应底物浓度为0.125mol/L。动力学研究结果表明,香蕉皮PPO的Km=0.087922mol/L,Vmax=0.00924OD404/min。考查了柠檬酸、亚硫酸氢钠、抗坏血酸、EDTA-2Na对PPO的褐变抑制效果和PPO酶液4℃保存时间与其活性的关系。     

香菇漆酶的纯化及部分性质研究

对香菇漆酶进行了丙酮分级沉降、半透膜透析、DEAE一纤维素及Sephadex G100柱层析纯化,并研究了漆酶的产酶曲线及酶作用最适条件.,结果表明:在该培养条件下,香菇第10天达产酶高峰,峰值酶活为216 U/mL,酶作用的最适pH值为3.6,在pH值3.6～4.6有较强的稳定性.最适酶解温度为30℃,Ba2 、Cu2 对香菇漆酶有激活作用,而Ag 、Fe3 则能明显抑制漆酶活性,其它离子影响相对较小.以邻联甲苯胺为底物的表观Km值为1.68 mmol/L.     

锦橙叶片POD动力学研究

以锦橙成熟春梢叶片提取过氧化物酶 (POD) ,分别测定了该酶的最适pH、最适温度及酶促动力学参数Km值和Vmax值 ,比较分析了常见几种POD抑制剂的作用程度。结果表明 :以邻甲氧基酚为底物 ,叶片POD的最适pH为 5 .0 ,最适温度为 32℃ ,Km值为 2 8.0 4mmol/L ,Vmax值为 147.83unit/s·gFW。在所测的 6种抑制剂 (K+、Pb2 +、CN-、Vc、硫脲及L 半胱氨酸 )中 ,CN-,Pb2 +,硫脲和L 半胱氨酸对POD表现出较强的抑制作用 ,K+对POD活性起促进作用。在一定浓度范围内 ,各种抑制剂的作用程度与其浓度具有极显著的相关性     

花椰菜最适ISSR反应体系的建立及优化

以花椰菜9901A×9908杂交种为材料,用高盐低pH值法提取的基因组DNA为模板,对ISSR-PCR反应体系中的镁离子浓度、dNTP浓度、Taq DNA聚合酶量、引物用量以及最适退火温度等影响因子进行了优化和筛选,建立了适合花椰菜的ISSR反应体系:20 μL PCR反应体系,含10×PCR反应缓冲液2 μL,2.0 mmol/L MgCl2,4×dNTP混合物0.2 mmol/L,引物0.5 μmol/L,Taq酶1.5 U,基因组DNA约30 ng,最适退火温度为52.8℃.     

金针菇多酚氧化酶动力学特性的研究

以金针菇为原料,研究了温度、pH以及底物浓度对多酚氧化酶(polyphenol oxidase,PPO)活性的影响。建立了金针菇酶促褐变反应的动力学方程,结果表明:金针菇PPO最适温度为50℃,最适pH5.0。采用Michaelis—Menten机理描述得金针菇PPO相应的动力学参数KM=0.075mol/L,Vmax=5.744U/min。同时,考察金针菇不同部位PPO活性,结果表明:菌柄上PPO活性>菌盖>菌柄中>菌柄下。     

苹果梨中多酚氧化酶酶学特性的研究

 以苹果梨中的多酚氧化酶为研究对象, 对其酶的活性变化及其特性的研究表明, 苹果梨中的多酚氧化酶的最适pH 值是4. 6 , 最适温度是40 ℃; 亚硫酸氢钠、维生素C、柠檬酸对苹果梨中多酚氧化酶的抑制作用依次减弱, 硫酸钠几乎无抑制作用。不同底物和同底物不同浓度影响多酚氧化酶特性。     

蘑菇多酚氧化酶酶学特性初步研究

对蘑菇多酚氧化酶活性的研究,确定了蘑菇多酚氧化酶的最适反应温度为50℃、最适反应pH4.5~5.5,并通过底物浓度对多酚氧化酶活性影响的研究,建立了酶促褐变反应动力学方程:υ=0.315/(2.58 [S]),同时考察了几种褐变抑制剂与激活剂对多酚氧化酶活力的影响。     

桑叶多酚氧化酶活性研究

以新鲜桑叶为材料,考察不同温度、p H值、底物浓度、激活剂、抑制剂对桑叶PPO活性的影响。结果表明:桑叶PPO酶活性的最适温度为40℃,最适p H值为6.0,最适底物浓度为0.02mo L/L的焦性没食子酸;高温(70℃)短时间(2min)处理能明显抑制酶的活性;蔗糖、硫酸铝和硼酸溶液对桑叶PPO活性有一定激活作用,在0.1mo L/L时激活率分别达到75%、73%、88%;抗坏血酸、柠檬酸、亚硫酸钠对桑叶PPO活性有一定抑制作用,亚硫酸钠、柠檬酸在0.1mo L/L时抑制率分别达到80%、87%,抗坏血酸的浓度在0.6mo L/L时抑制率达到了86%。为深入研究桑叶PPO的酶学特性及应用研究奠定了基础。     

云芝漆酶的分离纯化和理化性质及抗增殖活性

采用DEAE-cellulose, CM-cellulose和 Q-Sepharose离子交换层析和Superdex 75 凝胶过滤层析,从云芝(Coriolus versicolor)发酵液中纯化得到了一种漆酶, SDS-PAGE 电泳检测其为单一蛋白,分子量为67 kDa,N-端部分氨基酸序列为GIGPVADLTITNAAV.该酶可以催化氧化多种底物,其中对ABTS[ 2,2,-azinobis-(3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonate)]的催化作用最强.最适反应条件为40 ℃, pH 5.0,其活性可以被Cu2+ 激活,被Fe3+、Hg2+、Fe2+抑制.该酶对HIV-1逆转录酶、乳腺癌MCF7细胞和肝癌HepG2细胞均具有抑制作用,其IC50 分别为 1.5 μmol/L、 2.3 μmol/L 和 4.4 μmol/L.     

外源H_2O_2对枳生长和根系碳水化合物含量的影响

以盆栽枳实生幼苗为试材,采用不同浓度(0~1.25μmol/L)过氧化氢(H_2O_2)进行灌根处理,12周后观测株高、叶片数、根系形态、侧根数量及根系葡萄糖、果糖和蔗糖含量。结果表明,与清水对照相比,只有外源0.25μmol/L H_2O_2显著提高了株高和叶片数,0.05和0.25μmol/L H_2O_2显著提高了根系鲜重,0.05、0.25和1.25μmol/L H_2O_2均显著提高了根系干重、一级侧根数、二级侧根数、三级侧根数、根系果糖含量和根系葡萄糖含量。其中,0.25μmol/L H_2O_2促进枳生长的效果最好。     

白灵侧耳菌渣中漆酶的分离纯化与酶学性质

依次采用离子交换层析(DEAE-Sepharose、CM-Sepharose和SP-Sepharose)和凝胶过滤层析(Superdex 75 HR10/300)从白灵侧耳(Pleurotus tuoliensis)菌渣中分离纯化得到一种漆酶,该酶比活力为176.1 U/mg,纯化倍数为90.7;采用EDMAN降解法和HPLC-LTQ-Orbitrap测序得到该漆酶的N端和3条肽段序列分别为LHGTHAAIGP和PGVLVQGNKGDN、ISMSCDPNFTFS、DSIQIFAGQRYSFVLNAN;对该漆酶的理化性质进行研究,结果表明:该酶相对分子质量为7.0×10~4,最适反应温度为50℃,最适反应pH为4.0,具有较好的酸耐受性,在pH 2～4孵育1 h后能保持90%以上的活性。Cd~(2+)、Pb~(2+)、Hg~(2+)、Zn~(2+)、Fe~(3+)、Cu~(2+)和Fe~(2+)在1.25～10 mmol/L浓度下对该酶活性具有抑制作用。     

香菇中γ-谷氨酰转肽酶的分离纯化及其酶学性质研究

通过(NH4)2SO4沉淀、Phenyl Sepharose FF疏水层析分离纯化香菇中的γ-谷氨酰转肽酶(γ-Glutamyltranspeptidase,GGT),纯化后的GGT的比活力到达了19.59 U/mg.SDS-PAGE分析表明,GGT由分子量分别为28 kDa和60 kDa的两个亚基组成.酶学性质试验结果表明,GGT反应的最适温度为37 ℃,最适pH 值为7.6;金属离子Na+、K+和Ca2+对酶有激活作用,而Ag+、Cu2+、Zn2+和Fe3+则有抑制作用;试验范围内,GGT水解γ-glutamyl-p-nitroanilide的米氏动力学参数Km 值为2.601 μmol/mL,Vmax值为0.0287 μmol/min;组成的氨基酸中,Glu和Asp含量较高,Met和Cys含量较低.     

微型薯多酚氧化酶的特性研究

对分离纯化后的微型薯的多酚氧化酶性质进行研究,以邻苯二酚为作用底物,用分光光度计在波长420 nm处测定不同pH值、反应温度、底物条件下微型薯的多酚氧化酶(PP0)活性,以讨论微型薯的褐变机理.结果表明,微型薯的PPO最适pH值约为5.5,最适反应温度为35℃左右.该酶热稳定性差;最适作用底物为绿原酸、原儿茶酸和咖啡酸;FeSO4和抗坏血酸等化合物可以抑制PPO活性,CaCl2和CuS04等则起促进作用.适度高温、强酸性或碱性条件、FeSO4或抗坏血酸等处理都可以抑制该酶活性.     

三色雷蘑核糖核酸酶的分离纯化和理化性质

依次采用离子交换层析(DEAE-Cellulose、CM-Cellulose和SP-Sepharose)和凝胶过滤层析(Superdex 75 HR10/300 GL)从三色雷蘑(Leucopaxillus tricolor)子实体中分离纯化得到一种核糖核酸酶(Ribonuclease,RNase)。该酶比活为1406 U/mg,纯化倍数为154,通过HPLC-LTQ-Orbitrap测序得到4条肽段序列,分别为DMAVSYLSR、IGLSSIPR、ILGRFVVDTYK和SGKANAATPK。该核糖核酸酶的相对分子质量为15000,最适反应pH为 9.0,最适反应温度为40 ℃,热稳定性高,80 ℃孵育1 h后能保持90%以上的活性:Cu^2+、Ca^2+、Mn^2+、Cd^2+和Al^3+在1.25~10 mmol/L浓度下对该酶活性具有抑制作用,且抑制作用随着金属离子浓度的升高而变强;Fe^2+在1.25~5 mmol/L的浓度下,Pb^2+、Zn^2+、Mg^2+、Hg^2+、Fe^3+在1.25~2.5 mmol/L 的浓度下对该酶的活性有促进作用。     

桑黄漆酶的发酵条件研究初报

采用液体深层培养方法通过不同碳源、氮源、pH值、温度等因素对桑黄产酶量的影响,研究桑黄合成漆酶的最适发酵条件。采用L9(34)正交设计法对桑黄合成漆酶发酵培养基进行了优化,初步筛选出了桑黄合成漆酶发酵培养基。结果表明,培养基为玉米粉1%、麦麸1%、葡萄糖2%、蛋白胨0.5%、酵母膏0.5%、磷酸二氢钾0.1%、硫酸镁0.05%、添加Cu2+浓度60μmol.L-1,维生素B1 1 mg.100-1.mL-1,漆酶产量最高,为7 666 U.L-1。     

海藻酸钠明胶联合固定化香菇纤维素酶的技术研究

以海藻酸钠、明胶为载体,戊二醛为交联剂,对香菇纤维素酶进行固定化。研究了海藻酸钠浓度、明胶浓度、氯化钙浓度、给酶量、戊二醛浓度及交联时间对固定化酶的影响,并对固定化酶的最适反应温度、最适pH、温度稳定性等酶学性质进行了测定。结果表明:海藻酸钠和明胶的最佳浓度分别为3.5%和3.0%,戊二醛浓度为1.0%。与游离酶相比,固定化酶最适反应pH向酸性方向移动了0.4,最适反应温度提高了5℃,并且固定化酶具有良好的贮存稳定性。