柑橘杂种胚挽救及早期鉴定

柑橘的多胚现象是柑橘杂交育种工作中面临的主要问题,胚挽救技术是解决多胚问题的有效方法。介绍了胚挽救技术中胚分离时间、培养基和培养温度等对合子胚发育的影响,并详细介绍了适合柑橘合子胚早期鉴定的分子标记技术（RAPD、AFLP、SSR和SNP等）及它们在早期鉴定中的优势和不足。     

宽皮柑橘资源评价·利用与研究进展

着重概述了几种主要宽皮柑橘的特点,以及在种质资源保存、鲜食、加工和旅游观光等方面的用途。介绍了现代生物技术手段,如分子标记技术(RFLP、RAPD、AFLP、RAMP、REMAP等)、基因工程技术及细胞工程技术在宽皮柑橘中的研究进展。     

柑橘果实粒化研究进展

柑橘是世界第一大水果,粒化现象严重影响了柑橘的商品价值。对柑橘类果实粒化发生过程中汁胞的解剖结构和相关生理生化指标的变化,以及导致粒化发生的各种因素及控制措施的研究进展进行了综述,展望了从分子育种的角度彻底解决柑橘汁胞粒化的可能性。     

柑橘抗寒研究进展与展望

柑橘是一种经济价值极高但又常受冻害影响的亚热带果树,该文从柑橘抗寒生理生化和柑橘抗寒分子机理研究两方面总结了国内外在柑橘抗寒研究中取得的成果,并由此提出了柑橘抗寒在生物技术方面的研究展望。     

柑橘产业中病害问题及解决途径

综述了柑橘产业中主要病害问题,并提出了通过常规手段和生物技术手段(基因工程、分子标记、细胞工程等)加以解决的措施。     

番茄抗溃疡病品种的转育与SSR鉴定

番茄溃疡病是危害番茄生产的主要病害之一,抗病育种是解决该病害的最佳途径。以感病番茄98-1为母本、茄科茄属龙葵为父本进行杂交育种,经过四代回交和一代自交,获得了对番茄溃疡病具有抗性的杂交后代群体,并通过SSR鉴定得到了1个与番茄溃疡病抗性相关的SSR标记-CAT01。     

现代分子标记技术及其在柑橘种质资源研究中应用

快速发展的分子标记技术在柑橘种质资源研究与育种实践中得到了广泛应用.本文简要阐述了分子标记的主要类型、原理、特点及其在柑橘种质资源方面的研究,并对当前分子标记存在的问题及以后的发展前景进行了分析.     

柑橘全爪螨微卫星位点鉴定与信息分析

【目的】通过磁珠富集法构建柑橘全爪螨（Panonychus citri）微卫星富集文库,发掘柑橘全爪螨基因组微卫星（gSSR）序列。同时,利用柑橘全爪螨转录组数据库,筛选其功能微卫星（EST-SSR）分子标记,设计柑橘全爪螨微卫星（SSR）引物并验证其适用性。【方法】在提取柑橘全爪螨高质量基因组DNA的基础上,使用链霉亲和素偶联的磁珠与生物素标记的微卫星探针结合,亲和性捕捉由限制性内切酶酶切产生的含SSR的单链基因组DNA目的序列,经PCR扩增为双链后,克隆并构建SSR富集文库,测序筛选SSR序列。另一方面,基于柑橘全爪螨转录组数据,利用msatcommander软件发掘其功能微卫星标记。采用Primer Premier 5软件设计SSR引物,并进行验证。【结果】构建了柑橘全爪螨AC、TC和ATG共3个SSR富集文库,阳性克隆率分别约为30%、28%和25%。对文库的测序结果表明,AC文库的冗余率最高,TC文库次之,而ATG文库未发现相同微卫星位点的克隆。同时,在AC文库中,大部分AC重复类型的SSR为多拷贝微卫星位点,其中有相当一部分SSR的一侧侧翼序列完全相同或高度相似。从3个SSR富集文库中获得了可用于设计引物的gSSR单一序列44条（GenBank登录号为JF776418-JF776461）,共合成了20对SSR引物,其中能够稳定扩增的引物有11对。柑橘全爪螨gSSR中完美型SSR占54.5%,非完美型和复合型SSR分别占27.3%和18.2%。在完美型的gSSR中,两碱基重复SSR的核心重复次数（13-42次）大于三碱基重复SSR（5-9次）。从柑橘全爪螨转录组数据库中共获得8 023个EST-SSR位点,其中2 540个SSR可用于引物设计,共合成了35对引物（GenBank登录号为KT261306-KT261340）,其中能够稳定扩增的引物有8对。柑橘全爪螨EST-SSR的平均分布频率为1/3.55 kb。其中,三碱基为优势核心重复类型,占总数的53.86%;其次为两碱基核心重复类型,占总数的43.36%;而四、五、六碱基重复类型以及复合型的SSR数量均较少,且数量差异不大,共占EST-SSR总数的2.78%。柑橘全爪螨EST-SSR核心重复次数主要集中在5-10次。【结论】采用磁珠富集法,并将酶切、接头连接一步化,可提高个体微小的螨类及微小昆虫SSR的富集效率。柑橘全爪螨gSSR核心重复次数要远多于从转录组数据库获得的EST-SSR。总体而言,gSSR和EST-SSR中的三碱基重复SSR具有更好的优化率。此外,柑橘全爪螨gSSR具有微卫星家族现象。     

用RAPD分析鉴定葡萄属远缘杂种

用随机扩增多态型ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）技术，在幼苗期鉴定了圆叶葡萄和真葡萄亚属杂交的杂种。结果表明，以两个杂交组合后代及其亲本ＤＮＡ作模板，用随机引物ＵＢＣ２５０－ＵＢＣ－２６６和ＵＢＣ－２７２可以分别扩增出１４００，１４００，３５０６ ５００ｂｐ的多态性片段，作为来自无核亲本的分子标记。     

甘蓝一代杂种纯度SSR鉴定与田间鉴定的一致性研究

【目的】分析甘蓝杂交种纯度的SSR分子标记鉴定结果与田间形态学鉴定结果的一致性,寻找一种快速、准确鉴定甘蓝杂交种纯度的方法。【方法】选用SSR分子标记,筛选杂交种具有父母本互补带型的引物,用其鉴定“秦甘50”杂交种的纯度,并与田间常规鉴定结果的一致性进行比较。【结果】300对SSR分子标记引物中,有1对引物SQ1019对“秦甘50”杂交种表现为父母本互补带型;利用引物SQ1019标记鉴定“秦甘50”大田杂交种的纯度为96.3%;“秦甘50”大田杂交种经田间鉴定纯度为96.0%,2种鉴定结果的一致性高达99.7%。【结论】SQ1019是SSR分子标记“秦甘50”杂交种的特异引物,SSR分子标记是一种快速、准确鉴定“秦甘50”杂交种纯度的方法,其结果与田间常规鉴定结果相一致。     

3个红掌品种杂交后代的部分植物学性状及分子鉴定

为了鉴定红掌杂交种的真实性,以红掌情人红、阿拉巴马和阿里桑娜为材料,进行杂交育种,并对其中的两个杂交后代进行分子鉴定。结果表明：以情人红为母本,阿里桑娜为父本,杂交得到一个叶型似母本,苞片似父本的杂种B;以阿拉巴马为母本,以情人红和阿里桑娜的混合花粉为父本,杂交后得到一个叶片似母本,苞片似父本阿里桑娜的杂种E。利用ISSR分子标记对杂种后代进行鉴定,杂种B的鉴定中,子代在3个引物中均出现父本的特征带,说明杂B是情人红和阿里桑娜的真正杂种。杂种E的鉴定中,子代在3个引物中均出现父本阿里桑娜的特征带,说明杂种E是阿拉巴马和阿里桑娜的真正杂种。     

柑橘炭疽病病原菌分子鉴定的研究进展

对应用各种分子手段检测和鉴定柑橘(Citrus spp.)炭疽病原菌(Colletotrichum spp.)的研究进展进行了综述,并对这些分子技术与常规方法相比较的优势及在该病病原菌鉴定上的重要作用进行了阐述,最后对今后柑橘炭疽病病原菌鉴定的研究方向进行了展望.     

湖南宽皮柑橘EST-SSR反应体系研究

首次以EST-SSR 技术应用于湖南宽皮柑橘的研究中,进行了引物的设计与筛选,建立了湖南宽皮柑橘的EST-SSR 的反应体系。共筛选了20对引物,其中12对引物扩增多态性较高,研究确定在25 uL的反应体系中, Mg2+浓度在2.5 mmol?L-1, dNTP 0.2 mmol?L-1,上下引物各为0.2umol?L-1, Taq酶浓度为1.0 U效果好 , 最佳PCR程序为94℃预变性１ min,然后94 ℃,1 min;52 ℃,1min;73 ℃,1min,45个循环,最后73 ℃延伸3 min,利用优化后的反应体系成功构建湖南宽皮柑橘EST-SSR的指纹图谱.     

SSR分子标记在花生杂种鉴定中的应用

以24份花生材料为亲本,配制22个杂交组合,并利用40对SSR引物对24份亲本材料进行多态性筛选,运用多态性引物鉴定92个F1代杂种的真伪.结果表明,不同组合亲本间多态性差异较大,差异最大的两亲本(GT-C20-D和Tamrun OL07)的多态性引物比例为65%.SSR标记法鉴定出49个单株为真杂种;而田间表型鉴定出62个单株为真杂种,与标记鉴定结果差异较大.本研究证实利用分子标记鉴定真假杂种非常必要,且准确可行.同时,本试验证明40对SSR引物具有较高的多态性,可直接用于花生遗传多样性、杂种鉴定以及遗传图谱构建等的研究.     

天麻杂种F_1微卫星DNA分子标记鉴定

[目的]为天麻种质资源保护和育种选择提供科学技术资料。[方法]以天麻杂交种F1方1号及其亲本为材料,建立微卫星DNA分子标记鉴定天麻杂交种纯度的标准和技术方法。应用特异引物对方1号及其亲本进行微卫星DNA分子标记分析。[结果]F1杂种表现为父母本互补带型,与其亲本材料得到了很好的区分。[结论]微卫星DNA分子标记技术适用于天麻杂交种的纯度鉴定,能准确、快速、经济地为天麻种质资源的保护和选育提供科学参考。     

用RAPD分析鉴定葡萄属远缘杂种

用随机扩增多态型ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）技术，在幼苗期鉴定了圆叶葡萄和真葡萄亚属杂交的杂种。结果表明，以两个杂交组合后代及其亲本ＤＮＡ作模板，用随机引物ＵＢＣ－２５０，ＵＢＣ－２６６和ＵＢＣ－２７２可以分别扩增出１４００，１４４０，３５０和５００ｂｐ的多态性片段，作为来自无核亲本的分子标记     

福州地区柑橘种质资源的ISSR分析

研究利用ISSR(inter-simple sequence repeat)分子标记技术对21份福州地区柑橘种质资源进行遗传多样性分析,以期为福州地区柑橘的品种鉴定及育种提供理论依据和技术支持。试验从27条ISSR引物中筛选出多态性好、条带清晰的14条引物,对供试材料进行遗传多态性分析。获得162条总条带,其中多态性条带129条,多态位点百分率为79.63%;聚类结果显示21份资源可分为5个组,13份福橘被聚为同一组,进而可划分为4个亚组。ISSR标记能较好地区分福州地区柑橘资源,且福州柑橘地方资源遗传多样性丰富。     

柑橘砧木材料对根结线虫的抗性鉴定

为明确各柑橘砧木对根结线虫的抗性水平,为生产上柑橘线虫防控提供有效措施,采用病土接种方法对供试14份柑橘砧木材料进行根结线虫抗性鉴定,并采用人工接种2龄幼虫的方法测定分析防御酶POD(过氧化物酶)、PAL(苯丙氨酸解氨酶)、PPO(多酚氧化酶)的活性变化,探讨抗性材料的抗性机制。抗性测定结果显示:接种后土苦柚根结指数为36.37,根内平均雌虫数为每克根7头,平均卵囊数每克根1.3个,对根结线虫有抗性;酸橘次之,其余砧木均感病。防御酶活性测定结果显示:接种根结2龄幼虫后酶的活性在抗、感材料间差异明显,接种后5～35d,抗性材料土苦柚根部的POD、PAL、PPO活性均高于感病材料,表明抗病材料防御酶反应快,积累量大,能及时阻止线虫的侵染,但酶积累及变化有差异。试验结果说明土苦柚对柑橘根结线虫具有较强的抗性,是比较好的抗性砧木。     

1种柑橘大实蝇寄生蜂鉴定及生物学研究

介绍在我国首次发现的柑橘大实蝇寄生蜂,对其进行形态、分子鉴定及相关生物学研究。该寄生蜂胸、腹部大部分黑色,前翅脉m-cu后端开叉,触角为63～67节,整个前足橙黄色,中足胫节和跗节橙黄色,后足黑色,中胸背板有明显的盾纵沟。进一步对COI基因和28sRNA基因构建NJ进化树分析,发现该寄生蜂与全裂茧蜂属中的长尾潜蝇茧蜂Diachasmimorpha longicaudata、Diachasmimorpha kraussii、Diachasmimorpha tryoni三者亲缘关系最近。在自然条件下寄生蜂的羽化历期要明显长于柑橘大实蝇,且羽化寄生蜂的雌性比例随着温度的升高而增加。结合其形态特征,命名为柑橘大实蝇茧蜂(Diachasmimorpha feijeni)。