以铕离子为荧光探针测定痕量环丙沙星

本文研究了环丙沙星( CIP)同铕离子形成的配合物体系的荧光光谱特性及实验条件对荧光强度的影响.在pH值为8.02的Tris-HCl条件下,Eu3+和环丙沙星(CIP)能形成配合物发生分子内能量转移,发射铕离子的特征荧光,其最大激发和发射波长为265nm和615nm.加入阴离子表面活性剂十二烷基硫酸钠(SDS)后,可极大地增强体系的荧光强度,据此建立了一种以铕离子为荧光探针分析痕量环丙沙星含量的新方法,方法的线性范围为2.46×10-7mol· dm-3～9.84×10-5 mol·dm-3,相关系数r=0.9965,检出限为1.92×10-7mo 1·dmn-3.该法用于环丙沙星片剂和针剂的测定,回收率在98％～103％之间,结果令人满意.     

近红外荧光探针在免疫分析中的应用研究进展

近红外荧光探针主要有有机荧光分子、量子点以及稀土配合物和单壁碳纳米管等,具 有较强的信噪比以及组织穿透力。本文主要是以有机荧光分子作为侧重点,分析近红外荧光标 记探针的性质以及相关的性能,并从国内外相关文献的结论和近红外荧光探针的应用出发,探 究免疫分析中近红外荧光探针的应用现状,特别是在临床诊断标准分子免疫中的应用,并展望 了近红外荧光探针对免疫层析法的作用。     

荧光探针法研究铅离子对小牛胸腺DNA构象的影响

［目的］利用荧光探针法研究铅离子与DNA的作用方式。［方法］采用紫外可见分光光度法检测了DNA的纯度,采用荧光滴定法研究了铅离子对DNA构象的影响。［结果］随着铅离子的加入,DNAEB复合物的荧光强度逐渐降低。在DNAEB体系中加入铅离子后,荧光强度随着铅离子浓度的增加而降低,且荧光峰位略有红移。按生物分子的荧光寿命τ0为10ns计算,DNAEB与铅离子的双分子猝灭常数分别为1.01×1013和4.0×1014L/（mol·s）,二者均大于生物分子的最大动态猝灭常数2.0×1010L/（mol·s）,说明由铅离子引起的DNAEB的荧光猝灭属于静态猝灭。根据斜率和外推截距计算出DNAEB与猝灭剂的解离常数为1.13×10-5mol/L。铅离子与DNAEB的结合位点为5.56,结合常数为1.51×1029。［结论］铅离子容易与DNA结合,引起DNA构象的变化。     

罗丹明—联吡啶基荧光探针乙腈溶液中对汞离子的选择性识别研究

本论文报道了含有罗丹明和2,2’—联吡啶的荧光探针(L)的设计、合成以及对汞离子的选择性识别和荧光性质.当向L的乙腈溶液中加入汞离子时,荧光强度会增强,同时溶液的颜色由无色变为粉红色,因此通过肉眼观察,探针L就可以检测溶液中的汞离子.     

NO荧光探针应用于植物细胞的研究

[目的]探讨一种能够有效地应用于植物细胞的NO荧光探针装载方法。[方法]在相同荧光探针浓度,进行不同装载时间（0、6、12、18h）及不同装载温度（4、25℃）的探针装载,并用荧光显微镜观察荧光强度。[结果]植物细胞的荧光强度随装载时间的延长和温度的降低而增强。[结论]延长装载时间及低温均有利于植物细胞的NO荧光探针装载。     

《量子点生物荧光探针的制备及应用》

量子点的制备方法很多,用于生物荧光探针的量子点通常采用胶体化学法一按所有的原料不同可以分成金属有机溶剂热分解和巯基分子作稳定剂的水相合成两种路线。对用于生物检测的纳米晶体的要求是可溶于水或缓冲溶液,粒径分布均匀,量子产率高,并且稳定。因此制备发光效率高、发光颜色可调性好、对光热稳定性好的量子点,尤其是制备对于生物监测十分重要的受激发能在红外区发光的量子点巳成为近年来的研究热点。     

二氧化硅生物荧光纳米颗粒的制备与应用

以荧光染料(联吡啶钌配合物)为核,二氧化硅为外壳制备了荧光纳米颗粒.电镜检测结果显示,合成的二氧化硅纳米颗粒粒径为(20±3)nm,分布均匀,形态规则.对荧光纳米颗粒进行生物修饰得到荧光探针,以DNA碱基配对原则为基础建立检测DNA的方法,利用激光扫描共聚焦显微镜研究玻片上的荧光信号和荧光强度.结果表明,该方法不仅可定量检测到4.4×10-8 mol/L的目标DNA3,而且可定性检测目标DNA3、单碱基错配DNA4及随机序列DNA5,为发展DNA检测技术提供了新的思路.     

荧光探针法研究茶多酚与DNA的相互作用

利 用荧光探 针 Ｅ Ｂ（溴 化乙啶）研 究茶多酚 （ Ｔ Ｐ）与 Ｄ Ｎ Ａ 的相 互作用 及顺 铂（ Ｃ Ｄ Ｄ Ｐ）对其 的影响,结果表明：在 Ｅ Ｂ Ｄ Ｎ Ａ 体系中加 入 Ｔ Ｐ 后,荧光光谱 形状和峰位几乎 无变化,而荧光强度 明显下降; Ｔ Ｐ 压低 Ｅ Ｂ Ｄ Ｎ Ａ 荧 光强度的效率 Ｄ 与其浓度成正相关,高浓度 Ｔ Ｐ 可以完全抑制 Ｅ Ｂ Ｄ Ｎ Ａ 荧光强度⒚ Ｔ Ｐ与 Ｃ Ｄ Ｄ Ｐ 对 Ｅ Ｂ Ｄ Ｎ Ａ 荧光压低作用存在叠加现象,表明 Ｔ Ｐ 可增强 Ｃ Ｄ Ｄ Ｐ 的药用效果,又 可降低其副作用⒚ Ｔ Ｐ使 Ｅ Ｂ Ｄ Ｎ Ａ 体系的荧 光偏振度 Ｐ增加,而荧光寿命 τ缩短,这表明 Ｔ Ｐ 与 Ｄ Ｎ Ａ 作用的机理可能是 Ｔ Ｐ 插 入了 Ｄ Ｎ Ａ 分子碱 基对平 面中,影 响了 Ｄ Ｎ Ａ 分子双 链的有 序度,并 使从 Ｄ Ｎ Ａ 分子中 向 Ｅ Ｂ 分子传递的能量减少⒚     

基于磁性纳米探针的莠去津残留荧光检测方法

[目的]本文旨在构建磁性纳米探针并将其应用于莠去津残留的荧光检测。[方法]通过共沉淀法合成磁性纳米材料;合成莠去津适配体及荧光素标记DNA单链形成的非完全互补DNA双链,并将其修饰于磁性材料之上,构建特异性检测莠去津残留的功能化荧光磁性探针;利用紫外、透射电镜等技术对探针进行表征分析;利用凝胶电泳技术,分析目标物莠去津与探针负载的适配体特异性结合后,释放荧光素标记DNA单链、解除材料对荧光淬灭从而恢复荧光的机制;运用荧光光谱技术,构建基于荧光信号强度变化的莠去津残留灵敏定量方法。[结果]本研究开发的荧光检测莠去津残留方法在0.01～20μg·mL^-1具有良好的线性关系,相关系数(R²)可达0.998,检测限为8.17μg·L^-1,相比于其他农药,探针对莠去津具有较高的特异选择性及抗离子干扰能力。在稻田水添加浓度范围中,莠去津的平均添加回收率为95.48%～102.03%,相对标准偏差(RSD)为2.17%～3.14%;稻田土中莠去津的加标回收率为94.79%～100.66%,RSD为3.40%～4.72%。[结论]本研究...     

TaqMan探针实时荧光定量PCR诊断犬瘟热病毒方法的建立

根据犬瘟热病毒核蛋白基因的保守序列分别设计一对引物及其相应的Taqman探针建立荧光定量PCR。构建FQ-PCR绝对定量的标准品,并对反应体系进行优化,建立绝对定量的标准曲线。利用十倍稀释法检验方法的灵敏度并与普通RT-PCR法进行比较;特异性检验后进行临床标本的检验。结果显示:实验成功构建了绝对定量的参照质粒,标准曲线相关系数为0.994。犬瘟热病毒FQ-PCR检测反应的灵敏度为10TCID50;5种非犬瘟热病毒病原体检测均为阴性;说明实验建立的FQ-PCR具有快速、灵敏和稳定的特点,适用于临床样品的检验。     

高选择性半胱氨酸荧光探针的合成及其在活细胞中的应用

目的同型半胱氨酸(Hcy)、半胱氨酸(Cys)和谷胱甘肽(GSH)在生理过程中起着关键作用。由于Cys、Hcy和GSH的结构和化学性质的相似性,对它们的识别一直是一个巨大的挑战。旨在合成一种荧光分子用于单一识别Cys。方法基于Cys与丙烯酸酯的共轭加成环化反应,合成用于检测Cys的近红外荧光探针CN-NIR。在磷酸盐缓冲液(PBS pH=7.4,含20%DMF)体系中,以紫外吸收光谱和荧光光谱为研究手段,测试探针CN-NIR对Cys的选择性识别。结果实验结果表明,探针CN-NIR能够高选择性识别Cys,而其他19种氨基酸和6种干扰性金属离子的存在几乎不会干扰其识别过程。当加入Cys后,探针溶液颜色由粉色变为紫色,探针荧光强度显著增强,并且荧光强度与Cys浓度(0～140μM)呈现良好线性关系(R~2=0.991),对Cys的检测限为1.03μM,该值低于细胞中Cys的正常含量(30～200μM)。同时,探针可以在生理pH条件下有效识别Cys。推测探针对Cys的识别过程可能是共轭环加成机制。此外,细胞实验表明,探针在HeLa细胞中具有较低的细胞毒性,并且能够有效地识别HeLa细胞内的Cys。结论在生理条件下,探针CN-NIR能够高选择性、高灵敏地识别Cys,具有较好的生物利用价值。     

水稻稻瘟病菌TaqMan探针实时荧光PCR检测方法的建立

依据GenBank中登录的稻瘟病菌28S rDNA保守区域设计合成了对稻瘟病菌特异的TaqMan探针,并对实时荧光PCR各反应条件进行摸索优化,得出水稻稻瘟病菌实时荧光PCR的最佳反应体系.利用该体系对其他侵染水稻常见的病原菌进行特异性检测,结果表明只有稻瘟病菌能检测到荧光信号的增加,检测的灵敏度为0.328pg/μL DNA样品.说明该方法是一种较常规PCR快速、特异性强的方法,并且可有效的用于稻瘟病菌的检测.     

激光扫描共聚焦显微镜Ca2+荧光探针的选择和应用

钙离子(Ca~(2+))代谢普遍存在于活细胞,它可以反映细胞内代谢的变化。植物细胞生长发育的许多方面都与Ca~(2+)有关,如气孔的开闭、原生质体的流动、酶的激活、蛋白质的磷酸化、激素的调节等。正常细胞内游离钙浓度约为0.1μmol/L左右,胞外钙离子浓度为1.2～1.3mmol/L,相差     

荧光光谱法测定不同品种鳖中微量元素锌的含量

在磷酸盐缓冲液中,当激发波长为230 nm时,苏丹Ⅱ溶液在463 nm处出现一个弱的荧光峰,Zn2+溶液的加入使得该处的峰值增加,其增加值ΔF与Zn2+浓度在0.908 4～45.422μg/mL范围内呈现出良好的线性关系,回归方程为ΔF=15.97C-4.958,相关系数r为0.997 6,检测限为0.597 4μg/mL。基于此建立了微量元素Zn2+浓度测定的新方法,该法可用于鳖不同部位锌含量的测定。     

生物传感器探针在致病菌检测中的研究进展

食源性致病菌是食源性疾病发生的主要病因,成为目前较为突出的公共卫生问题之一,因此食品污染的快速检测具有重要意义。生物传感器为人们提供更加快速、可靠和灵敏的检测平台。该研究综述了近年来几种生物传感器探针在食源性病原微生物检测中的广泛应用,客观地评价了各种探针的优缺点。     

紫外线照射灭卵效果的荧光探针技术检测

以林木害虫舞毒蛾(Lymantria dispar L.)虫卵为试验材料,利用吖啶橙、罗丹明123、Ho33342和碘化丙啶4种荧光探针追踪标记虫卵细胞内部的不同细胞器,研究了紫外线照射对舞毒蛾虫卵的微现影响.研究表明:经过紫外线照射后,吖啶橙标记的虫卵细胞产生红色荧光;罗丹明123标记虫卵细胞荧光强度有所减弱;Ho3...     

高效荧光定量PCR探针的筛选及HBV-DNA检测方法的建立

目的:筛选一套灵敏度高、特异性强的引物探针,用于建立检测HBV病毒载量的荧光定量PCR方法.方法:通过PCR方法扩增HBV基因组片段,与T载体连接,制备工作标准品,并运用设计的荧光定量PCR对HBV DNA国家标准品进行检测.结果:以pMD18-T-HBc作为标准品,HBcF和HBcR为上下游引物,HBcP为探针所建立的荧光定量PCR检测HBV病毒载量方法的线性范围为109copies/mL到103copies/mL,批内重复性变异系数为0.20％一1.44％,批间重复性变异系数为3.08％～5.63％,检测国家阴阳性标准品的特异性灵敏度为100％,国家线性标准品的检测值与理论值的线性相关系数R为0.998.结论:成功筛选出一套荧光定量PCR检测HBV DNA的引物探针,并已建立了一种特异性灵敏性均非常高的荧光定量PCR检测HBV DNA的方法.     

马铃薯锌营养特性及锌生物强化技术研究进展

锌是植物和人体必需的微量元素,锌缺乏是全球公共健康问题.在马铃薯主粮化背景下,探讨马铃薯锌营养特性及锌生物强化技术手段对实现马铃薯富锌、改善人体缺锌状况具有重要意义.本文从马铃薯锌营养功能、马铃薯产区土壤锌状况、育种以及农艺强化技术等方面进行了综述和展望,提出锌对马铃薯生长及产量和品质形成具有重要作用,农艺强化是目前马...     

马铃薯锌生物强化研究进展

锌(Zn)是人体必需的微量元素之一,缺锌不但影响人体正常的食欲和视觉,还影响儿童、孕妇及胎儿的健康发育。马铃薯是我国主要的粮食和蔬菜作物,提高马铃薯的锌含量,对于改善人体锌营养水平具有重要的作用。本文以马铃薯锌生物强化为切入点,综述了国内外通过农艺措施、育种手段和基因强化方法提高马铃薯锌含量的研究进展,提出了今后马铃薯锌营养研究的主要方向,为马铃薯锌生物强化的进一步研究奠定了理论基础。     

TaqMan-LNA探针荧光定量PCR快速检测对虾

【目的】建立快速、特异、灵敏检测对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒（IHHNV）的TaqMan-LNA探针荧光定量PCR方法,为IHHNV的临床诊断和疫情监测提供更简便的检测技术。【方法】根据GenBank已发表的IHHNV毒株序列,在IHHNV保守区序列设计特异性引物和TaqMan-LNA探针;对荧光定量PCR反应条件进行优化以缩短检测时间,提高特异性和灵敏度;应用TaqMan-LNA探针荧光定量PCR对广西地区的300份凡纳滨对虾样品进行检测,验证方法的实用性。【结果】TaqMan-LNA探针荧光定量PCR检测IHHNV的灵敏度高,约为10个病毒粒子/反应,定量范围宽,在1.6×101～1.6×108拷贝/μL的范围内具良好的线性关系;与SPF凡纳滨对虾组织、WSSV、副溶血弧菌的DNA和TSV的RNA均无反应,特异性好;组内变异系数为0.53%～1.75%,组间变异系数为0.81%～1.14%,重复性和重现性均较好,结果稳定可靠;临床应用结果表明,300份凡纳滨对虾样品检出193份阳性,阳性率为64.3%,表明广西沿海地区养殖的凡纳滨对虾IHHNV感染率较高。【结论】利用TaqMan-LNA探针建立检测IHHNV的荧光定量PCR方法具有快速、特异、灵敏、重复性好、能定量等优点,可用于对虾IHHNV的检测。