紫菜中金黄色葡萄球菌的检测

笔者在对紫菜中致病菌污染现状分析的基础上,对金黄色葡萄球菌的检测方法进行了比较,结果表明快速检测因其方便省时可靠性高而值得推广应用。     

冻鸡肉中金黄色葡萄球菌LAMP快速检测方法的建立

[目的]建立冻鸡肉中金黄色葡萄球菌的LAMP检测方法。[方法]根据金黄色葡萄球菌特异性耐热核酸酶基因序列设计2对引物,建立LAMP检测方法,并用于检测采购自贵阳市各大超市的冻鸡肉样品。[结果]设计合成的2对引物和建立的LAMP方法检测金黄色葡萄球菌具有良好的特异性,反应体系的灵敏度为65 CFU/m L。检测采购自贵阳市各大超市和经人为污染的264份冻鸡肉样品分别用LAMP方法检测,并用国标方法检测验证,其特异性为95.2%,准确度为97.3%。[结论]该研究建立的方法为实现在冻鸡肉中金黄色葡萄球菌的快速检测奠定了良好的基础。     

快速检测食品中金黄色葡萄球菌及其肠毒素型的研究进展

综述了食品中金黄色葡萄球菌各种快速检测方法,包括Petrifilm RSA检测法、Baird-Parker+RPF Agar检测法、胶体金免疫层析方法及聚合酶链反应(PCR),其中聚合酶链反应大多是用来检测金黄色葡萄球菌的肠毒素型。     

屠宰场待宰生猪及其屠宰过程中金黄色葡萄球菌的污染检测与分析

通过陕西省和河北省部分地区屠宰场的待宰生猪、屠宰环节胴体及环境采集样本,对金黄色葡萄球菌进行分离鉴定与流行分析。取样地点分别在陕西咸阳某屠宰场和河北保定某屠宰场,3次共采集样品745份。分别采用国家标准GB 4789.10—2016的分离鉴定方法及显色培养基筛选、16S rRNA基因序列分析等方法进行了生猪从待宰到屠宰环节中的金黄色葡萄球菌污染检测,并进行了耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)筛查。检测结果显示,从745份样品中共分离出金黄色葡萄球菌98株,总分离率为13.2%;其中,在屠宰场1a、屠宰场1b和屠宰场2样本中的检出率分别为15.6%、10.4%和13.8%,3次检测结果无明显相关性(P0.05);从采样部位看,猪鼻腔拭子样本中金葡菌阳性率最高,平均为20.5%,明显高于体表拭子样本检出率平均5.5%(P0.01),这说明待宰生猪及宰后猪鼻腔为金黄色葡萄球菌的主要污染部位;在屠宰场地面、空气及器具样本中均检出了金黄色葡萄球菌,说明屠宰场环境中存在金葡菌污染,其中以屠宰场2较为严重。进一步筛查与分析结果显示,上述98个金黄色葡萄球菌分离株中有12个为MRSA菌株(12.2%),且其中11株来自屠宰场2。对seb等10个特异性肠毒素基因的检测结果表明,携带肠毒素基因的菌株在3批(屠宰场1a、1b和2)金葡菌分离株中分别占比42.9%、29.6%和44.4%;肠毒素基因的总体检出率为10.6%,其中以sem、sei、sen、seg、sek的检出频次较高;大部分金葡菌分离株携带肠毒素基因数≤3个,但来自屠宰场2的2个MRSA菌株均携带≥5个肠毒素基因,这提示了毒力基因与MRSA菌株高致病性的关联性。研究结果表明,金黄色葡萄球菌等食源性病原菌在生猪养殖到屠宰等各个环节中都存在着不同程度的污染与传播,不同屠宰场食源性致病菌的污染传播存在一定差异。高度耐药的超级致病株MRSA在待宰生猪、屠宰环节甚至在屠宰场环境中的检出提示其对于肉食品安全的严重风险。     

速冻蔬菜中金黄色葡萄球菌检测方法研究进展

金黄色葡萄球菌是食品安全检测中非常重要的强制性检测指标,本文在对速冻蔬菜中金黄色葡萄球菌污染现状分析的基础上,对其多种检测方法的原理、特点和应用范围予以论述。     

食品中金黄色葡萄球菌的快速检测及其评估

[目的]分析食品样品中金黄色葡萄球菌的含量,评估金黄色葡萄球菌快检试剂盒的可操作性和准确性.[方法]分别购买市售苹果脆片和真空包装水果玉米,采用国标GB 4789.10-2006和快检试剂盒测定其金黄色葡萄球菌含量,并以金黄色葡萄球菌为目标菌,采用人工污染样品,根据《食品快速检测方法评价技术规范》评估其快检试剂盒的相关...     

食品中金黄色葡萄球菌的快速检测

本文介绍一种检测食品中金黄色葡萄球菌的快速方法,甲胶乳颗粒与人血浆制成试剂(PS胶乳),分别与BP和MSEY培养基中分离培养的菌落作平板凝集反应。在BP培养基中的金黄色葡萄球菌,98.1％为PS胶乳凝集阳性;在MSEY培养基中95.9％为PS胶乳凝集阳性。用BP培养基和PS胶乳组合,其检出率和特异性均高于其他组合,并可在数分钟内直接检出平板上的金黄色葡萄球菌,且与凝固酶试验具有很高的一致性。     

鸡源金黄色葡萄球菌耐药性分析

采用药敏纸片扩散法,测定48株鸡源金黄色葡萄球菌对常用的19种抗菌药物的耐药性,检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA).结果表明:所有菌株除对万古霉素、头孢西丁和头孢唑啉100%敏感以外,对其他16种药物均产生不同程度的耐药性,其中耐药率较高的有四环素、强力霉素、环丙沙星、氧氟沙星、诺氟沙星及克林霉素,耐药率最低的为头孢噻肟、阿米卡星、复方新诺明及利福平.100%的菌株呈多重耐药,分离菌株最少耐受4种药物,最多耐受12种药物,未检测出耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌.     

金黄色葡萄球菌肠毒素基因分布的研究

为了研究g型肠毒素基因(SEg)i、型肠毒素基因(SEi)在金黄色葡萄球菌菌株中的分布状况,本试验以分离自人化脓组织、生牛乳等8种不同来源的371株金黄色葡萄球菌菌株作为研究对象,利用PCR技术对肠毒素基因的分布进行检测。结果表明:267株金黄色葡萄球菌检出含有肠毒素基因,总检出率为71.97%。其中SEg基因的总检出率为67.93%,SEi基因的总检出率为57.68%。各来源间金黄色葡萄球菌肠毒素的检出率不同,且同一来源的菌株其SEg和SEi的检出率也不同,表明不同来源以及不同肠毒素的基因型在金黄色葡萄球菌中的分布存在差异。     

动物性食品污染金黄色葡萄球菌的检测

从市售的烧鸡中分离并纯化病原菌,经培养特性观察、血浆凝固酶试验和生化试验等确定该病原菌为金黄色葡萄球菌。药敏试验结果显示,该菌对环丙沙星、新生霉素和庆大霉素敏感;对青霉素G、头孢氨苄、磺胺嘧啶钠有耐药性。动物试验结果表明,该菌对小白鼠有致病力。     

PCR检测乳品中金黄色葡萄球菌

【目的】利用PCR技术,无需增菌，直接检测乳品中的金黄色葡萄球菌。【方法】通过溶剂提取的方法从人工样品中提取模板，以金黄色葡萄球菌耐热核酸酶基因（nuc）为靶基因，经过PCR扩增得到279 bp的产物。经过DNA测序证实该产物为目的扩增产物。采用PCR方法实际检测了乳品中的金黄色葡萄球菌，同时，与国标GB 4789.10-94方法及两种快速检测致病性金黄色葡萄球菌测试片Petrifilm RSA.Count Plate 及Baird-parker+RPF Agar进行了比较。【结果】PCR方法的灵敏度高，全脂乳和脱脂乳检测的检出限为10 CFU/ml，奶酪检测的检出限为55 CFU/g，可在6 h内完成对乳品中金黄色葡萄球菌的检测，比目前普遍采用的先增菌再进行PCR检测的方法缩短了12～24 h。与国标方法相比，PCR方法的符合率为94.3％，敏感性为100％。【结论】采用溶剂提取制备模板的方法可有效的用于PCR直接检测(无需增菌)乳及乳制品中的金黄色葡萄球菌。     

食品中金黄色葡萄球菌定量检测方法比较研究

[目的]探求一种适应食品微生物实验室检验要求的快速准确的方法.[方法]比较研究Baird-Parker平板法、MPN法、科玛嘉金黄色葡萄球菌显色培养基法和PettifilmTM测试片法这4种定量方法对金黄色葡萄球菌的选择性、灵敏度和在食品中的应用.[结果]试验显示,4种方法检测金黄色葡萄球菌选择性良好;MPN法、显色培养基法和纸片法灵敏度比Baird-Parker平板法稍高;4种方法应用在食品检测中,金黄色葡萄球菌检出率无显著差异.因此可选择显色培养基和PetrifilmTM测试纸片法作为日常检验的辅助手段,以提高检测灵敏度、缩短检验周期.[结论]研究可为食品检测方法的研究及应用积累一定的经验,为今后金黄色葡萄球菌的检测工作提供一定参考.     

PCR法检测水中金黄色葡萄球菌肠毒素A基因

[目的]建立一种快速准确检测水中金黄色葡萄球菌肠毒素A的方法。[方法]将金黄色葡萄球菌模拟污染的水增菌后提取菌体DNA,以沙门氏菌、大肠杆菌DNA和空白作对照,用PCR法扩增金黄色葡萄球菌肠毒素A基因。[结果]金黄色葡萄球菌DNA的检测结果呈阳性,检测底限达100 cfu/L,而大肠杆菌和沙门氏菌及空白对照均未出现特异性片段,整个检测过程只需要24 h。[结论]试验建立的PCR方法可检测水及类似食品中的金黄色葡萄球菌SEA基因,并具有特异性强、灵敏度高、速度快和易操作的特点。     

白杨素对金黄色葡萄球菌肠毒素SEA和SEB表达的影响

为研究白杨素对金黄色葡萄球菌的抗菌活性以及该化合物对金黄色葡萄球菌肠毒素SEA和SEB表达的影响,应用肉汤微量稀释法检测了白杨素对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度,采用TNF-α释放试验、蛋白免疫试验以及荧光定量PCR等方法分别从蛋白表型、蛋白水平和基因水平3个层面上考察了白杨素对金黄色葡萄球菌肠毒素SEA和SEB分泌的影响。结果表明:白杨素几乎无抗金黄色葡萄球菌活性,其MIC1 024μg/m L。低浓度白杨素(2~16μg/m L)即可抑制金黄色葡萄球菌肠毒素SEA和SEB的分泌,且这一抑制作用呈现剂量依赖性。     

食品中金黄色葡萄球菌PCR检测方法的建立

目的:建立快速检测食品中金黄色葡萄球菌的PCR方法。方法:优化金黄色葡萄球菌DNA提取方法并设计基因特异性引物,采用PCR方法扩增金黄色葡萄球菌的耐热核酸酶(nuc)编码基因,验证检测的特异性及灵敏度。结论:所检出的金黄色葡萄球菌在497bp处出现特异片段,该方法具有较高的敏感性和特异性,可作为食品中金黄色葡萄球菌快速检测的手段。     

食品中金黄色葡萄球菌DNA环介导恒温扩增快速检测方法的建立与应用

【目的】金黄色葡萄球菌是一种人畜共患病的重要致病菌,主要经食品传播,引起食物中毒、组织及器官的化脓性炎症,建立快速、准确的检测方法对预防和控制金黄色葡萄球菌的传染具有重要意义。【方法】DNA环介导恒温扩增(loop-mediatedisothermalamplification,LAMP)是一种新颖的快速、高灵敏核酸扩增技术,本研究利用该技术建立金黄色葡萄球菌LAMP检测方法。基于金黄色葡萄球菌高度保守的Sa442基因序列,设计4条特异性LAMP扩增引物,两条外引物F3和B3及两条内引物FIP和BIP,在BstDNAPolymerase作用下,65℃恒温水浴中,对26个种类共45株细菌进行扩增,所试的20株金黄色葡萄球菌均为LAMP阳性,说明所设计的LAMP引物具有高度特异性。【结果】本LAMP方法对纯培养的金黄色葡萄球菌检测灵敏度为25CFU/mL,对污染食品中金黄色葡萄球菌的检测灵敏度为42CFU/g,40—60min内即可完成检测。检验检疫实践证明,利用本LAMP方法对958份肉类、蛋奶及其制品、人工污染样品等进行检测,检出115份LAMP阳性,与国标法(GB)检测结果一致。【结论】本LAMP方法操作简便、特异性强、灵敏度高,具有良好的实用性。     

拉萨市牦牛肉源金黄色葡萄球菌的鉴定及其耐药性分析

[目的]明确西藏拉萨市牦牛肉源金黄色葡萄球菌常见肠毒素(SEs)基因分布特征及其多重耐药性,为牦牛肉源产SEs金黄色葡萄球菌的快速鉴定及其防控提供科学依据.[方法]通过Baird-Parker显色培养筛选及Nuc基因扩增鉴定从拉萨市牦牛肉样品中分离获得金黄色葡萄球菌,利用PCR鉴定分析金黄色葡萄球菌中9种常见SEs基因的分布特征,并采用K-B纸片扩散法对产SEs金黄色葡萄球菌进行多重耐药性分析.[结果]从100份牦牛肉样品中分离获得29株金黄色葡萄球菌,其SEs基因鉴定结果表明,9种SEs基因检测出6种(SEB、SEC、SEE、SEG、SHE和SEI),有3种(SEA、SED和SEJ)未检出.其中,SEG基因检出率79.31%,SEC和SEI基因检出率均为68.97%,SEB基因检出率55.17%,SHE基因检出率51.72%,SEE基因检出率3.45%.29株金黄色葡萄球菌对青霉素(P)、氨苄西林(AMP)、克拉霉素(CLR)、红霉素(E)和磺胺甲恶唑(SMZ)的耐药率较高,分别为79.31%、65.52%、58.62%、51.73%和31.04%;对阿米卡星(AK)、替卡西林(TIM)、苯唑西林(OX)、环丙沙星(CIP)和四环素(TE)的耐药率较低,分别为10.35%、6.90%、3.45%、3.45%和3.45%;对头孢西丁(FOX)、头孢他啶(CAZ)、头孢噻肟(CTX)、庆大霉素(CN)和氯霉素(C)尚未产生耐药性.29株金黄色葡萄球菌共表现出13种耐药谱,多重耐药率高达93.1%(27/29),其优势耐药谱为AMP/P、SMZ/CLR/E和AMP/P/CLR/E.[结论]西藏拉萨市牦牛肉源金黄色葡萄球菌含有SEG、SEC、SEI、SEB、SEH和SEE等多种SEs基因,且对青霉素类、大环内酯类和磺胺类等多种抗菌药物已产生较强的耐药性.     

牛源金黄色葡萄球菌的耐药性及耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的检测

【目的】了解内蒙古地区奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌耐药性和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）感染的情况,为奶牛乳房炎的防治提供理论依据。【方法】采用K-B纸片扩散法,检测分离自内蒙古地区38株金黄色葡萄球菌对17种药物的敏感性,同时用琼脂稀释法检测苯唑西林、万古霉素对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度（MIC）;再用头孢西丁、苯唑西林纸片扩散法、苯唑西林盐琼脂筛选法和PCR方法扩增mecA耐药基因对分离菌株进行全面MRSA检测。【结果】分离菌株对每种抗生素都有不同程度抗性,对氨苄西林、头孢拉丁、青霉素、复方新诺明、新生霉素和链霉素的耐药率都高于45%,而对氧氟沙星、丁胺卡那霉素、万古霉素、环丙沙星、庆大霉素和头孢唑林的敏感性高于90%,2株细菌的万古霉素MIC≥16 μg•mL-1;其中8株细菌的苯唑西林MIC≥8 μg•mL-1,而其它菌株的苯唑西林MIC≤2 μg•mL-1;分离菌株多重耐药情况严重,耐受3种及3种以上药物的菌株占84.21%,其中4株细菌能同时耐受9种不同抗菌药物;16（42.11%）株细菌被检测携带mecA耐药基因,而仅有其中7株的苯唑西林MIC≥4 μg•mL-1;头孢西丁、苯唑西林纸片扩散法和苯唑西林盐琼脂筛选法分别检出7株、10株和7株表型为MRSA的菌株。【结论】分离菌株的耐药性和多重耐药现象较为严重,被调查地区奶牛场中已经存在MRSA和OS-MRSA感染情况,且感染率高。     

基于适配体的金黄色葡萄球菌流式细胞术检测方法

本研究以金黄色葡萄球菌为对象,旨在建立一种基于荧光标记核酸适配体的流式细胞术检测方法。通过优化流式细胞仪检测参数、适配体用量及折叠方式,观察适配体针对不同方式处理细菌的识别效果建立检测方法,并对该方法的特异性和灵敏性进行了验证。结果显示:不经高温变性处理的适配体检测结果最佳,适配体最佳使用浓度为250 nmol/L,对活菌识别效果最强。本实验建立的基于适配体的流式细胞术检测方法特异性强、过程简单,40 min于混合细菌中特异性检测、鉴别靶细菌,为金黄色葡萄球菌的检测提供了一种有效方法。