白鹭鼠伤寒沙门氏菌的分离与鉴定

从湘南某动物园送检的2只病死白鹭中分离到1株细菌,经鉴定均为鼠伤寒沙门氏菌,其抗原模式为1,4,5,12:i:1,2。在血琼脂平板上可形成溶血环,且对多种抗生素有抗药性。选取敏感药物控制了疫情。     

肉桂醛体外对鼠伤寒沙门氏菌的抑菌机制

【目的】探究肉桂醛体外对鼠伤寒沙门氏菌的抑制效果及作用机制。【方法】通过微量倍比稀释法测定肉桂醛对鼠伤寒沙门氏菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC);通过生长曲线探究肉桂醛对沙门氏菌增殖的影响;通过SDS-PAGE观察肉桂醛对菌体蛋白质的影响;通过扫描电镜观察肉桂醛对菌体形态的影响;测定电导率和DNA渗出量,观察肉桂醛对细菌细胞膜和细胞壁通透性的影响。【结果】肉桂醛具有一定的抑菌作用,MIC为128μg/mL,MBC为512μg/mL,MIC及以下浓度的药物对细菌增殖无明显影响,但可抑制菌体蛋白质代谢,破坏菌体正常形态,增加细胞膜和细胞壁通透性。【结论】肉桂醛对沙门氏菌具有一定的抑菌效果,可作用于菌体细胞膜和细胞壁,抑制菌体蛋白质代谢。     

鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白FliC的原核表达及纯化

对鼠伤寒沙门氏菌的鞭毛蛋白FliC的基因进行克隆、鉴定和原核表达,为鞭毛蛋白佐剂作用的研究奠定基础。以鼠伤寒沙门氏菌8014菌株基因组DNA为模板,PCR扩增Flic基因,产物与T载体连接,经测序鉴定正确后与表达载体pQE30(+)连接构建重组表达质粒Flic-pQE30,将此重组质粒转化入表达宿主E.coli XL1-Blue菌株内抽提质粒,酶切鉴定正确后对转化菌株以IPTG进行诱导后,表达产物经镍离子亲和层析柱纯化后,进行SDS-PAGE和Western blot分析。测序结果显示,FliC为完整的编码区基因1 485 bp,编码495个氨基酸残基,蛋白相对分子质量约为56 kDa。经SDS-PAGE分析表明,以37℃、1 mM的IPTG诱导5 h,表达效果最好,诱导产物是与理论值相符的56 kDa的融合蛋白。经western-blotting检测,表达的重组蛋白FliC可与小鼠抗鼠伤寒沙门氏菌全菌体多抗血清反应得到清晰的目的条带,表明表达的重组蛋白具有良好的反应原性。成功进行了鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白Flic基因的克隆表达,为进一步研究其免疫佐剂作用奠定了基础。     

表达绿色荧光蛋白重组减毒鼠伤寒沙门氏菌的构建

应用DNA重组技术构建了表达绿色荧光蛋白 (GFP)的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌。用EcoRⅠ和NcoⅠ将pEGFP质粒中的绿色荧光蛋白基因EGFP切下 ,克隆进表达载体质粒pYA3334的EcoRⅠ和NcoⅠ位点之间 ,构建成重组表达质粒pYAGFP ,然后转化大肠杆菌X6 2 12、中间宿主X3730、终末宿主X45 5 0。X45 5 0于LB培养基上呈绿色 ,在荧光显微镜下观察 ,整个菌体发绿色荧光。构建的表达GFP的重组鼠伤寒沙门氏菌为减毒沙门氏菌活载体基因工程疫苗的研制提供一个良好模型。     

香炉山鸡源沙门氏菌的分离鉴定及耐药性研究

为了掌握凯里市及周边地区香炉山鸡源沙门氏菌的流行情况和耐药情况,通过细菌分离、形态学观察、生化试验、药敏试验等方法对凯里市及周边地区饲养的香炉山鸡进行了调查研究。结果表明:从调查的香炉山鸡中共分离鉴定出12株鸡源沙门氏菌,而12株沙门氏菌都具有多重耐药性。其中,对阿莫西林(AMO)、青霉素(PEN)的耐药率达100%;其次,对庆大霉素(GEN)、甲硝唑(MTR)、链霉素(STR)、四环素(TET)、苯唑西林(OXA)、复方阿莫西林(AMC)的耐药率也相对较高,分别为91.7%、83.3%、83.3%、75.0%、75.0%和66.7%;对头孢唑林(CEF)、头孢噻吩(CFT)、卡拉霉素(KAN)、多西环素(DOT)、氧氟沙星(OFL)、大观霉素(SPE)的耐药率分别为41.7%、33.3%、25.0%、25.0%、16.7%和16.7%,但对安普霉素(CMP)和复方新诺明(TSU)敏感,耐受菌株均为0株。这说明香炉山鸡鸡白痢沙门氏菌的感染率较高,且具有不同程度的耐药性。     

表达PRRSV GP3蛋白减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗株的构建

构建表达猪PRRSV GP3蛋白的口服重组减毒鼠伤寒沙门氏菌活载体疫苗株。将去信号肽序列的PRRSV ORF3基因插入到表达载体pYA3341(Asd+)中,构建重组质粒pYA3341-ORF3。将重组质粒电转入鼠伤寒沙门氏菌疫苗株X4550(Asd-、Cya-、Crp-),获得重组疫苗菌株X4550(pYA3341-ORF3)。体外鉴定重组菌表达的GP3蛋白、重组菌特性并进行小鼠免疫试验。酶切鉴定和序列测定证实重组质粒构建成功,SDS-PAGE电泳及Western blot检测有GP3特异性蛋白条带,小鼠免疫后可检测到GP3蛋白抗体。成功构建能稳定表达PRRSV GP3蛋白的口服减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗株。     

表达绿色荧光蛋白重组减毒鼠伤寒沙门氏菌的构建

应用DNA重组技术构建了表达绿色荧光蛋白（GFP）的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌。用EcorⅠ和NcoⅠ将pEGFP质粒中的绿色荧光蛋白基因EGFP切下，克隆进表达载体质粒pYA3334的EcorⅠ和NcoⅠ位点之间，构建成重组表达质粒pYAGFP，然后转化大肠杆菌X6212、中间宿主X3730、终末宿主X4550。X4550于LB培养基上呈绿色，在荧光显微镜下观察，整个菌体发绿色荧光。构建的表达GFP的重组鼠伤寒沙门氏菌为减毒沙门氏菌活载体基因工程疫苗的研制提供一个良好模型。     

消毒剂胁迫鼠伤寒沙门氏菌ATCC 14028s的抗性及耐药性测定

为探索消毒剂胁迫后的鼠伤寒沙门氏菌ATCC14028s的抗性及对抗生素的耐药性,本研究选取次氯酸钠、氯已定(97％)、苯扎氯铵(80％)和十六烷基氯化吡啶(≥98％)分别胁迫鼠伤寒沙门氏菌ATCC14028s,胁迫后菌株经消毒剂抗性测定及抗生素耐药性测定.结果表明,胁迫后的沙门氏菌,对4种消毒剂的抗性几乎不变,而对部分...     

离子束辐照对鼠伤寒沙门氏菌（LT_2）生物存活和营养缺陷突变的影响

本文研究了离子束辐照对鼠伤寒沙门氏菌（ＬＴ２）生物存活和营养缺陷突变的影响，并和６０Ｃｏ─ｒ射线进行比较。结果表明：在平均致死率相近的情况下，离子束辐照相对于６０Ｃｏ—ｒ射线具有损伤轻、诱变效率高的特点。     

新疆乌鲁木齐市周边鸡场鸡源沙门氏菌耐药性及耐药基因的检测

为掌握新疆乌鲁木齐市周边鸡场鸡源沙门氏菌对常用抗菌药物的耐药性及耐药基因的携带情况。从新疆乌鲁木齐周边养鸡场共采集950份鸡泄殖腔拭子,从中分离出沙门氏菌80株,采用琼脂稀释法对其进行最小抑菌浓度测定;通过PCR方法对耐药沙门氏菌进行PMQR(qnrA、qnrB、qnrC、qnrD、qnrS、oqxA、oqxB、qepA和aac(6')Ib-cr)、β-内酰胺酶(bla_(TEM)、bla_(CTX-M)、bla_(SHV)、bla_(KPC)、bla_(CMY-2)、bla_(LAP-1)和bla_(OXA))及16S rRNA甲基化酶(armA和rmtB)共18种耐药基因的检测。耐药结果显示:鸡源沙门氏菌对环丙沙星(83.6%)和恩诺沙星(77.5%)呈现高水平耐药;对阿米卡星的耐药率(20.0%)较低。耐药基因检测结果为:(1)qnrS检出率为12.5%,qnrB检出率为13.8%,oqxA检出率为51.3%,oqxB检出率为51.3%,aac(6')-Ib-cr检出率为37.5%,未检出qnrA、qnrC、qnrD和qepA;(2)bla_(CTX-M)检出率为5.0%,bla_(TEM)检出率为67.5%,bla_(SHV)检出率为13.6%,bla_(OXA)检出率为37.5%,未检出bla_(KPC)、bla_(LAP-1)和bla_(CMY-2)。(3)rmtB检出率为7.5%,arm A检出率为1.3%。乌鲁木齐周边鸡场分离的鸡源沙门氏菌对环丙沙星和恩诺沙星耐药严重,对阿米卡星比较敏感。共检出11种耐药基因,基因类型较多,使养鸡场细菌的多药耐药风险加大。     

鸡白痢沙门氏菌的分离鉴定及耐药性分析

采集菏泽地区发病鸡场疑似鸡白痢病鸡的泄殖腔棉拭子,进行细菌分离,并对分离细菌进行生化鉴定、血清型鉴定和药敏试验.结果显示,分离得到32株鸡白痢沙门氏菌,其中16株O9、10株O1、6株O12,分别占50％、31.25％、18.75％;分离株对头孢噻肟、丁胺卡那霉素、多黏菌素B表现出高敏感性,敏感菌株的比率分别为93.8％、90.6％、84.4％,对四环素、磺胺嘧啶、诺氟沙星表现出高的耐受性,耐受菌株的比率分别为100％、78.1％、71.9％.可见,头孢噻肟、丁胺卡那霉素、多黏菌素B可作为菏泽地区养鸡场防治鸡白痢沙门氏菌病的首选药物,其他药物须减少或暂停使用.     

河南省部分地区鸡大肠杆菌的分离鉴定及耐药性研究

为了解河南省鸡场大肠杆菌的流行情况,对采自周口、商丘、安阳等6个地区的腹泻鸡病料进行病原的细菌学检验和药敏试验,经分离培养、形态染色镜检、生化试验、血清学试验和动物试验,共分离鉴定出11株鸡大肠杆菌,有5种血清型,分别为O14、O15、O24、O143、O157。动物试验结果表明,分离鉴定出的这5种血清型大肠杆菌均有致病性,且毒力不同,其中从周口、开封、鹤壁分离的菌株毒力强,死亡率均为100%。药敏试验结果表明,大部分菌株对链霉素、阿莫西林/棒酸敏感,对头孢唑啉、强力霉素、氨苄西林、磷霉素、呋喃妥因均存在不同程度的耐药现象,其中对强力霉素、氨苄西林、头孢唑啉严重耐药。     

泰州地区鸡沙门氏菌的分离鉴定及耐药性调查

沙门氏菌可引起鸡白痢、禽伤寒和禽副伤寒等沙门氏菌病,对我国养鸡业产生了巨大威胁。动物养殖中抗生素的广泛使用导致了沙门氏菌耐药性的出现,这给沙门氏菌病的防治增加了难度。本研究从泰州地区养殖场采集病死鸡病料、健康家禽的泄殖腔样本进行沙门氏菌株的分离鉴定,通过药敏试验了解耐药状况。结果表明,共分离样品339份,活禽检出率为2.3%,病料检出率为8.5%。     

减毒沙门氏菌作为原核表达宿主菌和真核表达载体的研究

本研究以增强型绿色荧光蛋白(eGFP)为报告基因,探讨了减毒沙门氏菌作为原核表达宿主菌和真核表达载体的可行性.通过多功能分光光度仪测定细菌的OD600和eGFP在大肠杆菌和减毒沙门氏菌中的表达量,结果表明:eGFP在沙门氏菌中的表达量依赖于IPTG的浓度,最佳浓度为0.5 mmol·L-1,增加浓度至0.75 mmol·L-1不能增加eGFP的表达量;而该现象在大肠杆菌中不明显.当IPTG浓度等于或大于0.5 mmol·L-1时,沙门氏菌中eGFP的表达量显著高于大肠杆菌.若以相对荧光度(1个OD600单位的荧光值,即eGFP相对表达量)表示,两种宿主菌的最佳诱导时间均为3 h.Hela细胞侵袭力试验表明该减毒沙门氏菌仍具有侵袭力,同时以脂质体转染为对照,将携带重组质粒pcDNA3-eGFP的减毒沙门氏菌转染Hela细胞,48 h后可观察到绿色荧光,表明了该菌可作为载体将重组质粒携带到细胞内,并使外源基因得到表达.此外,利用基于微孔板的多功能分光光度仪可直接检测荧光强度和OD值,能快速、准确地进行多样本检测,可用于GFP在不同宿主菌或相同宿主菌在不同试验条件下,甚至不同表达载体在相同宿主菌中表达等方面的研究.     

广西猪源沙门菌的分离·鉴定和耐药性研究

[目的]了解广西地区猪源沙门菌的流行情况、耐药现状及致病力情况。[方法]从广西不同地区11个规模猪场采集99份病料,进行细菌的分离、菌体形态特征观察以及生化鉴定,对分离菌进行常用抗生素药物敏感试验,最后对分离株进行小鼠致病性试验。[结果]从99份病料里分离到21株沙门菌,分离率21%。药敏试验表明,分离菌株对阿米卡星、头孢噻肟、氨曲南、左氟沙星具有较高的敏感性,对青霉素G、氨苄西林、阿莫西林、复方新诺明等产生较高的耐药性。致病性试验表明9株分离菌株可导致小白鼠死亡,致死率为43%。[结论]分离菌株存在较严重的耐药现象及较强的致病性。该研究为该地区有效控制沙门菌病的发生以及兽医临床上的合理用药提供可靠的理论依据。     

鸡场饮水中肺炎克雷伯氏菌的分离鉴定及耐药性研究

【目的】研究养殖场鸡饮水中肺炎克雷伯氏菌（Klebsiella pneumoniae）的耐药表型和耐药基因的携带情况,并分析其相关性,为有效预防该病提供参考。【方法】从养殖场鸡饮水系统中分离、鉴定肺炎克雷伯氏菌,采用药敏纸片扩散法检测分离菌株对25种常用抗菌药的耐药性,通过PCR检测菌株携带的常见耐药基因。对其中4株肺炎克雷伯氏菌进行全基因组测序,利用CARD抗性基因数据库预测耐药基因的携带情况。【结果】从养殖场鸡饮水系统中共分离到9株肺炎克雷伯氏菌,药敏试验表明这些菌株呈现出多重耐药,仅对多粘菌素敏感。PCR检测发现,9株肺炎克雷伯氏菌共携带13种常见的耐药基因,其中,β-内酰胺酶类耐药基因CMY-1、BlaSHV和BlaCTX-M,碳青霉烯类耐药基因KPC,喹诺酮类耐药基因QnrB、QnrS和QnrA,氨基糖苷类耐药基因Aph(3’)-Ia,磺胺类耐药基因Sul2等12种耐药基因与其耐药表型表现一致,而Mcr-1基因与其表型相反。全基因组扫描分析结果显示,4株肺炎克雷伯氏菌共携带了59种耐药基因,涉及31类抗生素药物,其中四环素类抗生素的耐药基因最多,其次是大环内酯类抗生素和氟喹诺...     

鸡腹泻病原菌的分离鉴定及药敏试验研究

为了对来自河南省部分地区的腹泻病(死)鸡进行病原确诊及了解病原对药物的敏感性,恰当采集动物病料进行细菌常规分离鉴定和药敏试验。结果共鉴定出5株鸡白痢沙门氏菌和17株鸡源志贺氏菌。分离的志贺氏菌中,痢疾Ⅰ型5株,痢疾Ⅱ型3株,鲍氏多价1株,福氏多价1株,其余7株尚未定型。每株沙门氏菌和志贺氏菌对试验鸡的致病性不同,沙门氏菌发病率为40%～80%,死亡率为10%～20%;志贺氏菌发病率为30%～100%,死亡率为0～90%。药敏试验结果显示:5株鸡白痢沙门氏菌对阿莫西林、氨苄西林、环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星的耐药率均为80%(4/5),对罗红霉素、甲氧苄啶和四环素的耐药率高达100%(5/5);但对头孢唑啉、头孢曲松、阿奇霉素、庆大霉素、阿米卡星较为敏感,敏感率分别为80%(4/5)、80%(4/5)、80%(4/5)、100%(5/5)、100%(5/5)。多数志贺氏菌对四环素、甲氧苄啶、罗红霉素耐药,耐药率分别为82.35%(14/17)、88.24%(15/17)、100%(17/17);而对头孢唑啉、头孢曲松、阿米卡星较为敏感,敏感率分别为88.24%(15/17)、94.12%(16/17)、94.12%(16/17)。由此可见,在临床上可选取庆大霉素、头孢曲松和阿米卡星作为防治鸡腹泻病的首选药物。     

驴源沙门氏菌的分离鉴定、耐药及毒力分析

沙门氏菌是一种常见的食源性人畜共患肠道致病菌,兼性胞内致病菌。山东省某养驴场频发流产现象且无明显征兆,本研究对驴流产胎儿内脏及头部感染细菌进行分离,并对分离株进行鉴定及耐药、毒力分析。结果表明,获得的7株分离株均为沙门氏菌,分别命名为SL1-SL7,其中SL1、SL2、SL3、SL5、SL6与鼠伤寒沙门氏菌的同源性分别为100%、99.93%、99.93%、99.79%、99.57%;SL4与爱丁堡沙门氏菌、汤姆逊沙门氏菌的同源性均为99.79%;SL7与阿邦尼沙门氏菌、爱丁堡沙门氏菌、汤姆逊沙门氏菌同源性分别为99.72%、99.72%、99.65%;耐药表型结果显示7株沙门氏菌对本试验中所有药物均比较敏感;毒力基因筛选结果显示,除SL1、SL2、SL3、SL7毒力岛SPI-4上的ssb毒力基因未检出外,7株分离菌均具有沙门氏菌典型毒力基因;7株沙门氏菌对小鼠的致病性较弱,小鼠喂食菌液后未出现死亡现象。     

肠炎沙门氏菌对感染鸡部分血液生化指标的影响

[目的]探索肠炎沙门氏菌对感染鸡部分血液生化指标的影响。[方法]以肠炎沙门氏菌感染12日龄的健康三黄肉鸡为材料,在感染后不同时间采集其颈静脉血,分离血清用于生化指标检测。[结果]感染鸡血清AST、ALT、LDH和GLU活性呈先升高后降低的变化趋势。血清ALP活性、ALB和GLO含量总体呈先降低后升高的变化趋势。除TP无显著变化外,感染鸡血清其他7项生化指标都发生显著变化（P〉0．05）。其中ALT、AKP、LDH和GLO活性在感染后显著升高（P〈0．01）,ALB活性显著降低（P〈0．05）。[结论]该研究为揭示肠炎沙门氏茼感染病的发生、发展规律及制定综合防治措施提供了依据。