双分子荧光互补技术（BiFC）分析玉米 MAPK5与 bZIP72蛋白的相互作用

[目的]分析玉米MAPK5与b ZIP72蛋白之间的相互作用。[方法]构建双分子荧光互补表达载体p N-MAPK5和p C-b ZIP72,应用基因枪轰击洋葱表皮细胞瞬时表达,在激光共聚焦显微镜下观察MAPK5与b ZIP72蛋白相互作用产生的荧光信号。[结果]ZmMAPK5与Zmb ZIP72的Bi FC融合载体同时轰击洋葱表皮细胞,细胞核中能发出黄色荧光。[结论]Zm MAPK5与Zmb ZIP72在植物细胞核内相互作用。     

柽柳转录因子基因ThbZIP1的原核表达及重组蛋白纯化

柽柳是重要的抗逆植物,提取柽柳总RNA,克隆了柽柳的16.5 k D b ZIP转录因子基因Thb ZIP1,构建原核表达载体p GEX-Thb ZIP1,导入宿主菌获得重组菌株BL21-Thb ZIP1,用异丙基-β-D-硫代半乳糖(IPTG)进行重组蛋白r Thb ZIP1诱导表达。试验结果表明:IPTG浓度为1.0 mmol/L,诱导温度为37℃条件下,诱导4 h,大肠杆菌提取液提取50 min时,所获得重组蛋白r Thb ZIP1表达量最大,占总蛋白的76.42%;经过10%SDS-PAGE电泳检测,发现重组蛋白r Thb ZIP1主要以包涵体的形式存在;并利用电纯化法成功获得纯化的目的蛋白。     

灵芝转录因子同源蛋白生物信息学分析及转录表达特性研究

[目的]本文旨在对灵芝中主要的转录因子家族同源蛋白进行筛选,分析其序列特性和乙酸处理下的转录水平变化,为深入研究灵芝的基因表达及产物代谢调控提供理论基础.[方法]运用生物信息学方法,分析灵芝蛋白数据库,将其与公共数据库中的19种真菌常见转录因子家族进行比较,从中筛选出灵芝转录因子家族同源蛋白.对bZIP转录因子家族进行...     

银杏MYB转录因子的鉴定及特征分析

[目的]MYB蛋白是真核生物中一类重要的转录因子,在植物形态建成、生长发育、初生和次级代谢产物合成等生命过程中起重要调控作用。银杏作为植物中的"活化石",其提取物中含有的活性成分次生代谢物类黄酮等对人体有益。在类黄酮的生物合成中,MYB转录因子扮演着重要角色。本研究从转录组水平详细鉴定和分析了银杏GbMYB转录因子,为今后GbMYB的功能研究奠定基础,也为其他物种MYB转录因子的分析提供方法。[方法]本文首先利用BlASTp和PlantTFbcat等生物信息学工具对银杏的MYB蛋白序列进行筛选和鉴定;其次运用MEME和MEGA 7.0软件分别对GbMYB蛋白进行基序和系统进化分析;最后使用MeV对GbMYB在银杏各组织中的表达水平进行聚类分析。[结果]从41151个银杏蛋白中共鉴定出60个MYB转录因子,根据MYB保守域的特点将其分为R1-MYB、R2R3-MYB和R1R2R3-MYB三大类。系统进化树分析发现60个GbMYB可分为16个亚家族且具有相似功能的蛋白序列通常聚在一个家族。在银杏GbMYB蛋白中共检测到21种不同的保守基序。表达谱数据分析表明,一些GbMYB基因的表达具有组织特异性。[结论]本研究利用生物信息学方法,在银杏转录组水平上共鉴定出参与调控银杏各个组织发育的60个GbMYB转录因子;结合拟南芥AtMYB家族分类法将GbMYB分为16个亚家族;保守基序分析显示GbMYB在功能上具有多样性。研究结果为全面解析银杏MYB基因结构与生物学功能提供了新信息,也为进一步研究银杏GbMYB转录因子在次生代谢产物中的调控功能奠定了基础。     

大麦黄矮病毒运动蛋白在烟草中的瞬时表达

[目的]快速鉴定运动蛋白基因在烟草中的瞬时表达,进一步研究该外源基因的功能。[方法]将大麦黄矮病毒的运动蛋白基因定向克隆到马铃薯X病毒载体上,得到重组的马铃薯X病毒,电击转化农杆菌后,利用农杆菌渗透注射技术注射到本生烟草的叶片中,观察病毒对烟草的侵染状况。[结果]渗透注射后第7天观察,重组病毒载体侵染的烟草系统叶有病毒侵染症状,而对照组未有此现象。对2组试验进行逐日跟踪观察,重组病毒载体侵染的烟草有较严重的病毒侵染症状和叶片卷曲现象,后期引起注射叶及系统叶坏死。而空病毒载体侵染的烟草只有轻微的病毒侵染症状,并能够恢复健康。对侵染的烟草进行RT-PCR检测,结果表明外源基因BYDV-MP在烟草体内进行了正常的转录和表达。[结论]BYDV-MP蛋白促进了PVX的系统侵染速度,加重了系统侵染的病毒症状,是病毒病症的决定因子;利用PVX表达载体表达异源MP的方法是可行的。     

全基因组范围葡萄热休克转录因子的鉴定与分析

[目的]从全基因组范围鉴定葡萄热休克转录因子基因家族,并对其基因结构、蛋白结构、基因启动子、基因在进化中受到的选择压力以及其编码基因在非生物胁迫下的表达变化进行综合分析,并对葡萄热休克转录因子基因家族的密码子使用偏好性进行研究,分析影响葡萄热休克转录因子基因家族密码子使用偏好性的因素。[方法]利用葡萄基因组数据库相关数据建库结合本地BLAST法鉴定序列,利用多重序列比对,进化树构建等生物信息学方法进行分析。[结果]鉴定了20个葡萄热休克转录因子,并将其分为4个亚组。其中9个热休克转录因子基因在冷胁迫1 h下表达上调,2个在冷胁迫4 h下表达上调。在高温胁迫14 d条件下,7个热休克转录因子基因表达量下调。在高温胁迫42 d条件下,8个热休克转录因子基因表达量下调。此外发现,葡萄热休克转录因子家族各成员基因存在密码子使用偏好性。[结论]该研究为深入研究葡萄热休克转录因子的功能提供了有用的信息。     

大豆疫霉中Myb类转录因子的预测与分析

[目的]为阐明大豆疫霉中Myb类转录因子的作用机理提供科学依据。[方法]以从大豆疫霉基因组数据库中筛选的大豆疫霉Myb类转录因子为研究对象,分析其在大豆疫霉中的分布特点和4个重要值较大的Myb因子在大豆疫霉与寄主互作过程中的转录模式,并对Myb因子进行聚类。[结果]大豆疫霉基因组中含50个Myb,其在基因组中的分布不均 50个Myb因子可聚为6类（A、B、C、D、E、F）,其中聚类组E中Myb因子最多,占总数的40%,聚类组B中Myb因子最少,只有4个 Myb因子在疫霉菌丝数据库中出现的频率最高（0.44%）,在侵染数据库中出现的频率最低（0.26%） 4个Myb因子在疫霉侵染寄主过程中均有转录。[结论]该研究为明确大豆疫霉Myb的生理功能及其在疫霉致病过程中的作用提供了参考。     

盐胁迫条件下杨树bZIP转录因子全基因组分析

[目的]杨树是三北地区重要的经济树种与绿化树种,然而其生长发育常受到干旱、盐碱等逆境胁迫的限制。为探明bZIP转录因子在杨树生长发育及抗逆胁迫过程中的分子生物学机制。[方法]本文利用生物信息学分析方法获得杨树bZIP转录因子214条,结合转录组测序数据,对其蛋白分子结构及盐胁迫条件下表达模式进行系统分析。[结果]根据其保守域氨基酸序列将214条杨树bZIP转录因子分为A、B、C、D、E、F、G、H、I、S及其他等11个亚族。盐胁迫处理后,14个杨树bZIP转录因子基因表达量显著上升,5个bZIP转录因子基因表达量显著下调,说明bZIP转录因子在杨树耐盐胁迫应答反应过程中发挥着重要的调节作用。[结论]该研究为以后该转录因子家族功能的深入研究利用提供理论基础。     

旋毛虫钙网蛋白对小鼠巨噬细胞和大鼠PBMC免疫功能的影响

[目的]本文旨在研究旋毛虫钙网蛋白(TsCRT)对宿主免疫系统的影响。[方法]将原核表达纯化的重组旋毛虫钙网蛋白(rTsCRT))进行Western Blot验证;将rTsCRT与小鼠巨噬细胞共孵育,检测该蛋白对小鼠巨噬细胞增殖、NO释放和凋亡的影响;将rTsCRT与大鼠外周血单核细胞(PBMC)共孵育,检测该蛋白对大鼠PBMC转录因子和细胞因子的影响。[结果]Western blot结果显示,rTsCRT可以被感染旋毛虫的大鼠血清所识别;rTsCRT可促进小鼠巨噬细胞的增殖和NO的分泌,抑制小鼠巨噬细胞的凋亡;rTsCRT下调大鼠PBMC转录因子T-bet、Gata-3和PU.1的转录水平,上调Foxp3、Ahr、RORγt和Bcl-6的转录水平;rTsCRT上调大鼠PBMC细胞因子IFN-γ、IL-17、IL-10、TGF-β、Il-9和IL-22的转录水平,下调IL-4和IL-21的转录水平。[结论]旋毛虫钙网蛋白可刺激宿主产生Th1、Th17、Treg、Th9和Th22等多种类型的免疫反应,抑制Th2和Tfh免疫,对宿主免疫调节作用复杂。     

元宝枫MYB转录因子基因的克隆（英文）

[目的]克隆元宝枫转录因子MYB基因,为进一步研究元宝枫MYB基因功能和对其花青苷结构靶基因的调控研究奠定基础。[方法]以元宝枫‘鲁红1号’为材料,采用RT-PCR和RACE-PCR方法,克隆元宝枫‘鲁红1号’中MYB基因。[结果]测序结果显示该基因全长831 bp,编码276个氨基酸,该蛋白分子量为32.17 kDa,分子式为C_(1430)H_(14052)N_(2247)O_(406)S_(14),原子总数为4 510个,等电点为9.44,GenBank登录号为1825712,命名为AtrMYB。该蛋白具有R2R3MYB结构域,该蛋白偏疏水性,没有信号肽,具有核定位信号。氨基酸序列比对发现与其它物种的MYB有较高的同源性,进化树分析表明,AtrMYB与调控橙子花青苷合成的转录因子MYB亲缘关系最近,处在同一进化枝。[结论]从元宝枫‘鲁红1号’中成功获得了元宝枫转录因子MYB基因。     

bZIP转录因子与植物抗逆性研究进展

碱性亮氨酸拉链(Basic region/leucine zipper motif,bZIP)类转录因子是近年来研究较多的转录因子家族之一,参与多种生物学过程,对植物的抗病性、抗寒性、抗旱性和耐盐性等逆境均具有重要的调控作用.文章通过对植物bZIP类转录因子的分布、结构、分类及其在植物逆境胁迫中的作用等最新研究进展进行了综述,提出今后可在全基因组层面上发掘更多的bZIP转录因子,并通过定点突变、转基因等手段创造bZIP的突变体,促进对bZIP表达调控机制的认识,进而了解bZIP转录因子对抗逆相关基因的调控机理,并通过基因工程手段提高植物的抗逆性,培育多抗性植物新品种.     

干旱胁迫下5个烤烟品种的生理指标变化及抗旱性比较

[目的]比较5个烤烟品种的抗旱性。[方法]选用5个烤烟品种(安烟2号、K326、云烟97、中烟100、中烟14),采用漂浮育苗技术育苗,在苗期5叶期进行干旱胁迫处理,并对与抗旱性相关的部分生理指标进行了测定。[结果]相同的干旱胁迫条件下,某些烤烟品种对干旱的敏感程度和忍耐力存在显著差异,安烟2号和中烟14的抗旱性相近,属抗旱性较强的品种,云烟97和中烟100次之,K326的抗旱性最弱。[结论]该研究结果可为干旱地区烤烟主栽品种的选择提供参考。     

不同叶面肥对抚州烟区烤烟产质量的影响

[目的]为筛选出最适合抚州烟区生态条件的叶面肥。[方法]通过大田试验,对3种新型叶面肥进行效果对比。[结果]喷施"憨烟一笑"叶面肥可以增强烟叶的抗逆性,提高烟叶产量,同时可以增强烟叶内在化学成分的协调性,提高烟叶的吸食品质。[结论]喷施"憨烟一笑"叶面肥可以提高烟叶品质,增强烟叶的可用性。     

马里兰烟609雄性不育系转育与利用研究

[目的]为马里兰烟609雄性不育系(Msmd609)的大面积推广应用奠定基础。[方法]利用白肋烟MSBurley21雄性不育源与马里兰烟609(Md609)进行转育回交,获得Msmd609。分析Msmd609的遗传性状稳定性、田间抗病性、产量产值、均价、上中等烟比率、原烟外观质量及内在化学成分。[结果]Msmd609抗逆抗病性强,生长势强,农艺经济性状好,化学成分协调,评吸结果优良,适宜推广种植。[结论]该研究对解决马里兰烟种植品种单一、抗逆抗病性较差等问题,满足卷烟工业对马里兰烟原料需求具有重要的意义。     

转录因子在植物抗逆性上的应用研究

转录因子在植物胁迫应答途径中起着十分重要的作用,就转录因子的概念与结构,转录因子的分类与ERF等4类主要转录因子家族的生物学功能进行了详细介绍,对近年来应用转录因子提高植物的抗寒性,抗旱性,抗盐性与抗病性的研究进行了综述。     

60Co-γ射线辐照对云烟87烟苗某些生理抗性指标的影响

[目的]探讨了γ-射线作为提高烟苗抗逆、抗病性手段的可行性。[方法]以云烟87漂浮苗为供试材料,研究了60Co-γ射线辐射剂量处理(204、06、08、01、001、502、00 Gy)对烟苗某些生理抗性指标的影响。[结果]云烟87烟苗的超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)活性随辐射剂量的增加而升高;60Co-γ射线辐射剂量小于40 Gy的处理不会对烟苗造成伤害,但提高烟苗抗性的效果不显著;大于100 Gy的辐射处理会造成云烟87苗有害物质增加;60 Gy是最佳的辐射处理剂量,丙二醛(MDA)含量比对照降低了40.77%,SOD活性比对照提高了5.13%,POD活性是对照的1.43倍,CAT活性是对照的1.24倍。[结论]云烟87的最佳辐射剂量为60Gy,可降低烟苗有害物质含量,提高各保护性酶活性,增强烟苗的抗逆性和抗病性。     

盐碱胁迫下烟草出芽率和脯氨酸·丙二醛活性变化

[目的]探讨不同品种烟草抗盐碱胁迫能力。[方法]检测不同浓度的盐碱混合溶液（6．25～500mmol／L）胁迫下5种常见烟草品种（白肋烟TN90、烤烟NC89、晒烟延晒5号、香料烟河南香料,黄花烟）种子出芽率和幼苗叶片丙二醛和脯氨酸含量的变化。[结果]黄花烟抗盐碱胁迫能力最强,河南香料、延晒5号、NC89次之,TN90最弱。[结论]为因地制宜选择适合本地栽培的烟草品种提作参考。     

烤烟漂浮育苗化控壮苗与抗逆性诱导效果研究

[目的]在烤烟漂浮育苗中,研究化控对壮苗和抗逆性的效果,为培育健壮无病烟苗提供科学依据。[方法]采用苗床叶面喷施的方法,于烟苗3叶期和7叶期分别喷施不同的化控物质,研究它们对烟苗生长、营养吸收和某些生理生化指标的影响。[结果]采用化控措施的烟苗在成苗时均达到了适栽壮苗要求,并且生理生化指标表现优良,增加了烟株对营养物质的吸收与利用,减少了病虫害的发生。其中处理T1[0.010 g/L 3-吲哚丁酸(3叶期喷施)+0.003 g/L多效唑(7叶期喷施)]、T4[0.010 g/L生根粉(3叶期喷施)+0.003g/L多效唑(7叶期喷施)]和T8[0.010 g/L萘乙酸(3叶期喷施)+0.010 g/L乙烯利(7叶期喷施)]综合表现最佳。[结论]通过一定的化控措施可以达到培育健壮无病、抗逆性强的烟苗的目的,为烤烟化控育苗提供理论基础和技术依据。     

循环干旱锻炼对在干旱胁迫下烟草植株光合参数及叶绿素荧光参数的影响

[目的]研究循环干旱锻炼对在干旱胁迫下烟草植株叶片光合参数及叶绿素荧光参数的响应差异,从一个侧面了解干旱锻炼提高烟草抗旱性的机制。[方法]通过对漂浮育苗的烟草幼苗进行控水—半萎蔫—复水—恢复的循环干旱锻炼及后续干旱胁迫,测定烟草光合参数及叶绿素荧光参数。[结果]循环干旱锻炼后烟草植株在随后的干旱胁迫下烟叶净光合速率(Pn)、PSⅡ最大光化学量子效率(Fv/Fm)、PSⅡ实际光化学量子效率(ΦPSⅡ)、光化学淬灭系数(qP)比未锻炼的对照高,而非光化学淬灭系数(NPQ)下降。[结论]循环干旱锻炼提高了烟草植株光合系统对干旱胁迫的适应能力。     

20个烟草品种抗旱性的比较筛选与综合评价

[目的]对20个烟草品种的抗旱性进行比较筛选与综合评价,为烟草的抗旱育种和栽培提供理论依据。[方法]通过对漂浮育苗的烟草幼苗施加干旱胁迫,测定干旱胁迫下的幼苗存活率、叶片丙二醛含量、相对电导率和相对含水量,并应用隶属函数方法对测定的指标进行抗旱性分析和综合评价。[结果]20个不同抗旱性烟草品种存活率、叶片丙二醛含量、相对电导率与组织含水量在干旱胁迫下有显著变化,利用隶属函数法可对它们进行综合的抗旱性强弱排序。[结论]在该试验中,MSK326、TN90、NC55的抗旱性较好;MD609、云烟87、红花大金元的抗旱性相对较差。