昆虫对Bt晶体蛋白杀虫剂作用的影响

本文概述了近年来昆虫肠液蛋白酶,中肠受体蛋白和昆虫抗性方面对苏云金杆菌杀虫晶体蛋白杀虫作用的影响。本期刊登该文的第三部分。     

苏云金杆菌HBF-1菌株晶体蛋白活化及对金龟幼虫毒力的影响

通过SDS-PAGE研究了缓冲液pH值对HBF-1菌株晶体蛋白的降解活化作用及其对晶体蛋白杀虫毒力的影响.结果表明,晶体蛋白在牛胰蛋白酶和金龟子幼虫中肠液作用下的降解程度,随着缓冲液pH值的增加而加深.幼虫中肠蛋白酶在缓冲液pH值达到8.0时,就能完全降解晶体蛋白;而胰蛋白酶在pH值达到11.0时,才能把晶体蛋白完全降解.产生的活力片段分子量近似,均在63.0kD左右.在pH11.0条件下,胰蛋白酶的降解速度大干幼虫中肠液.生测结果显示,晶体蛋白经中肠液水解后,其毒力明显增强,在7d和14d增效率分别达到1.25和1.00.同时,经强碱性缓冲液处理后,也起到了较强的增效作用.     

苏云金芽孢杆菌HBF-1菌株对铜绿丽金龟和黄褐丽金龟幼虫生长发育及取食的影响

研究了苏云金芽孢杆菌Bacillus thuringiensis HBF-1菌株对10日龄铜绿丽金龟Anomala corpulenta和黄褐丽金龟A.exoleta幼虫存活率、拒食、抑制生长及取食选择性的影响。结果表明,随着感染剂量的增大和感染时间的延长,两种金龟子幼虫的存活率均下降,对铜绿丽金龟幼虫的拒食作用和生长抑制作用增强,使该幼虫对饲料的选择性增强。感染7 d时,对黄褐丽金龟幼虫的LC50值为64.16 μg/g,14 d时下降到13.98 μg/g,对铜绿丽金龟幼虫的LC50值则由79.69下降到19.14 μg/g。当菌剂浓度为10 μg/g、感染7 d时,HBF-1菌株对铜绿丽金龟幼虫的拒食率和生长抑制率分别为4.74%和9.84%,14 d时分别为30.75%和73.87%;当菌剂浓度达到160 μg/g、感染7 d时,对铜绿丽金龟幼虫的拒食率和生长抑制率分别为39.01%和83.61%,14 d时分别为86.10%和97.75%。可见高浓度菌剂对铜绿丽金龟幼虫有一定的拒食作用。     

化学杀虫剂对苏云金杆菌芽孢及伴胞晶体的影响

研究了7种常用化学杀虫剂对苏云金杆菌芽孢及伴胞晶体的影响及作用,结果表明,常用浓度下,2.5%溴氰菊酯乳油、48%毒死蜱乳油对苏云金杆菌芽孢及伴胞晶体无影响,可与苏云金杆菌制剂事先做成混剂;4.5%高效氯氰菊酯乳油、2.5%高效氯氟氰菊酯乳油、20%灭多威和40%辛硫磷在短时期内对芽孢及伴胞晶体无明显影响,可与苏云金杆菌制剂现混现用;80%敌敌畏乳油(500倍稀释)对苏云金杆菌伴胞晶体有明显损伤作用,不宜与苏云金杆菌制剂混合使用。     

感染微孢子虫的棉铃虫幼虫对化学杀虫剂的敏感性

为明确棉铃虫微孢子虫Nosema sp.与杀虫剂混用的效果及其机理,采用感染饲喂和微量点滴法,研究了感染微孢子虫的棉铃虫幼虫对辛硫磷、溴氰菊酯的敏感性变化.健康幼虫与感病幼虫对辛硫磷LC50之比为4.855,对溴氰菊酯LC50之比为7.953.随着微孢子虫感染时间和感染剂量的增加,棉铃虫对杀虫剂的敏感性进一步增强;感染微孢子虫5天,健康幼虫与感病幼虫对辛硫磷的LC50之比为3.278,与感染3天处理相比差异显著;当剂量为107个孢子/mL时,健康幼虫与感病幼虫对辛硫磷的LC50之比为4.090.经微孢子虫处理后,棉铃虫幼虫体内的羧酸酯酶、谷胱甘肽-S-转移酶和乙酰胆碱酯酶的比活力均增高.     

苏云金杆菌新菌株对金龟子幼虫的毒力比较

金龟子类幼虫是一类重要的地下害虫,可危害农、林、果、菜、草等多种植物。由于这类害虫危害植物地下部分或地面附近根茎部分,具有一定的隐蔽性,而且分布广,也是难以防治的世界性害虫。随着人们对苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis,以下简称Bt)资源调查与研究的深入,新的具有特异杀虫谱的Bt菌株陆续被发现。1992年,Ohba等在世界上首次从土壤中分离筛选出对金龟子幼虫具有特异杀虫活性的Bt新菌株BuiBui。笔者于     

美洲斑潜蝇幼虫对杀虫剂的敏感性研究

利用浸叶法测定了美洲斑潜蝇幼虫对１１种不同类型杀虫剂的敏感性。实验结果表明,齐墩螨素对美洲斑潜蝇具有较高的毒力,其ＬＣ_５０仅为０.０８１８ｍｇ／Ｌ,其次是菊酯类杀虫剂溴氰菊酯和高效氯氰菊酯。美洲斑潜蝇对有机磷杀虫剂马拉硫磷、敌敌畏、乙酰甲胺磷、氨基甲酸酯类杀虫剂灭多威和丁硫克百威具有较强的耐药性。     

几种常用化学杀虫剂对Bt菌株生长影响的初步研究

苏云金芽胞杆菌（Bacillus thuringiensis,Bt）可产生多种杀虫活性物质,是一种应用最广泛的微生物杀虫剂。最近研究表明Bt对化学杀虫剂抗性害虫有较好的防治效果,并且与化学杀虫剂的联合使用可以提高杀虫效果,减少化学杀虫剂的用量。为了进一步设计更好的Bt与化学杀虫剂协同控害方案,本论文研究了不同亚种的Bt菌株与常用化学杀虫剂的兼容性。泛基因组分析表明不同亚种的Bt菌株在基因组成上有较大差异,说明Bt菌株对化学杀虫剂的反应可能会有所不同。进一步化学杀虫剂对Bt增殖影响分析结果显示,溴虫腈对大部分Bt测试菌株有抑制,说明Bt与化学杀虫剂协同使用时需要测定两者兼容性。高效氯氰菊酯对所有常用的防治鳞翅目害虫的Bt杀虫剂亚种类型库斯塔克亚种（Bt kurstaki,Btk）和鲇泽亚种（Bt aizawai,Bta）菌株影响都不大,可以进行协同使用;氯虫苯甲酰胺和茚虫威对Btk菌株HD1有一定抑制作用,定虫隆对其有较好的促进作用,说明HD1与定虫隆协同使用效果更好;茚虫威对Bta菌株G03影响较小,定虫隆对其有一定的抑制作用,氯虫苯甲酰胺对G03则有一定的促进作用,说明G03及其衍生菌株可以与氯虫苯甲酰胺、茚虫威协同使用。本研究结果说明Bt菌株对不同杀虫剂的敏感性是有差异的,可以通过筛选获得兼容性好的组合,为进一步制定Bt杀虫剂与化学杀虫剂配伍方案与协同使用技术提供了理论指导与数据参考,对实现化学农药减量施用具有重要的指导意义。     

杀虫剂对斜纹夜蛾幼虫的毒力研究

测定了11种杀虫剂对江苏省南京市马群和山东泰安市郊区斜纹夜蛾田间种群的毒力。用点滴法测定结果表明:6种杀虫剂对南京斜纹夜蛾3龄幼虫的毒力(LD50)大小顺序为:高效氯氰菊酯>氯氟氰菊酯>辛硫磷>马拉硫磷>毒死蜱>灭多威;对泰安斜纹夜蛾幼虫的毒力大小顺序为:高效氯氰菊酯>氯氟氰菊酯>马拉硫磷>辛硫磷>毒死蜱>灭多威。高效氯氰菊酯对两种群的毒力最大,灭多威的毒力最小。山东泰安种群较南京种群对杀虫剂略敏感。用浸叶法测定结果表明:9种杀虫剂对南京斜纹夜蛾3龄幼虫的毒力(LC50)大小顺序为:除尽>菜喜>高效氯氰菊酯>米螨>抑太保>氯氟氰菊酯>辛硫磷>毒死蜱>抑食肼。对山东泰安斜纹夜蛾3龄幼虫的毒力大小顺序为:除尽>菜喜>抑太保>高效氯氰菊酯>毒死蜱>辛硫磷>米螨>氯氟氰菊酯>抑食肼。除尽和菜喜对两种群的毒力最高,抑食肼的毒力最低。山东泰安斜纹夜蛾种群除对氯氟氰菊酯和米螨的敏感性略低于南京种群外,对其他药剂均比南京种群敏感。     

Toxicity of Mixtures of Bacillus thuringiensis with Endosulfan and Other Insecticides to the Cotton Boll Worm Helicoverpa armigera

In the laboratory, low concentrations of Bacillus thuringiensis Berliner (B.t.), as ‘Dipel’ 2X applied (at about the LC₅) to cotton leaves enhanced the activity of endosulfan and reduced resistance to endosulfan from approximately seven fold to two fold in neonate larvae of Helicoverpa armigera (Hubner). Low (LC₅) concentrations of endosulfan also increased the toxicity of B.t. Both endo-sulfan and B.t. increased the toxicity of the stomach poison cryolite to H. armigera. This increased toxicity was not observed where B.t./endosulfan combinations were applied topically to larvae or where B.t. was combined with organophosphorus or pyrethroid insecticides which are considered primarily to be contact toxicants. Mixtures of B.t. and endosulfan applied at equitoxic concentrations were less toxic than similar concentrations applied alone.     

高效苏云金杆菌KN11杀虫剂产品开发及应用

苏云金杆菌（Bacillus thuringiensis,Bt）商品化制剂是目前应用范围最为广泛,占据市场容量最大的微生物农药,在对害虫的生物防治中发挥了巨大的作用。本文综述了高效苏云金杆菌KN11产品开发背景、菌株信息、产品特性、登记情况、应用技术等,并对未来KN11产品改进及应用进行了展望。     

苏云金芽孢杆菌HBF-1芽孢对棉铃虫幼虫生长发育及酶活的影响

苏云金芽孢杆菌HBF-1菌株的芽孢对初孵棉铃虫幼虫无明显杀伤作用,但可以直接影响其正常的生长发育,使幼虫前期体重增加;而后期发育迟缓,历期延长,成虫产卵量明显减少。通过光学显微镜观察发现,用含有HBF-1芽孢的饲料饲喂棉铃虫幼虫,幼虫中肠肠壁细胞遭到破坏;随着虫龄的增大,微绒毛逐渐脱落,有的部位细胞壁破裂。酶活的测定结果表明:初孵棉铃虫幼虫取食含有HBF-1芽孢(100μg/g)的饲料后,幼虫体内的乙酰胆碱酯酶、羧酸酯酶和谷胱甘肽-S-转移酶的活性发生了变化。     

粘虫幼虫对苏云金芽孢杆菌伴孢晶体低度敏感的机理探讨

比较了粘虫和家蚕对苏云金芽孢杆菌库斯塔克亚种菌株ＨＤ┐１的伴孢晶体在幼虫中肠液中的体外活化过程。ＳＤＳ┐ＰＡＧＥ结果表明,伴孢晶体或溶解的１３０ｋＤａ原毒素在粘虫中肠液中活化后形成的毒性肽的浓度比家蚕低,原因是１３０ｋＤａ原毒素在粘虫中肠液中发生了过度降解。蛋白酶活性检测结果表明,粘虫中肠液中含有较高的蛋白酶活性。     

昆虫病原线虫侵染鳞翅目幼虫的血淋巴病理学

菜青虫经口感染斯氏线虫后,２０小时左右在其血淋巴中出现杆状的共生细菌,并开始大量增殖,４８小时的细菌数已达出现初期的１万倍以上。用３种不同品系线虫 结果显示：经分别感染不同线虫的大蜡螟幼虫,其血细胞数总的增减变化趋势是一致的,在感染初期血细胞数较健康虫体明显降低,４￣６小时达最低值;随后逐渐增加,１２小时后血细胞数达到高峰;随后不迅速下降。感染线虫的家蚕１２小时后其血淋巴的蛋白质含量较对照明显降低     

夜蛾科昆虫高毒力苏云金杆菌菌株的分离和筛选

从山东省采集的750份土样中分离出苏云金芽孢杆菌菌株57株,这些菌株的晶体形态主要有菱形、圆形等。以夜蛾科害虫粘虫和甜菜夜蛾初孵幼虫为试虫,通过生测筛选出一株高毒力菌株QCL-1。菌株QCL-1对甜菜夜蛾的毒力显著高于标准菌株HD-1,对粘虫的毒力与HD-1相当。     

对葱黄寡毛跳甲高毒力Bt菌株的鉴定及效果评价

本研究筛选到一株对葱黄寡毛跳甲具有较高杀虫活性的菌株DK49,利用菌株DK49 gyrB基因序列和phoR基因序列分别在GenBank中进行同源性比较,两种基因序列均与苏云金芽胞杆菌的相应基因序列同源性最高,达到99%;同时分别构建系统发育树,发现菌株DK49均与苏云金芽胞杆菌聚合在一起,说明菌株DK49属于苏云金芽胞杆菌。Biolog表型分析结果显示菌株DK49可有效利用14种碳源,对二甲胺四环素等10种化学物质敏感,对利福霉素等11种化学物质不敏感。通过室内生物活性评价,明确菌株DK49对葱黄寡毛跳甲成虫3 d的LC₅₀为0.8161×10⁷ cfu/mL。田间小区结果显示,菌株DK49在1×10⁷ cfu/mL浓度下,连续施药3次后对葱黄寡毛跳甲的虫口减退率达到92.31%,防治效果达到96.81%。可见,菌株DK49能有效地控制葱黄寡毛跳甲的发生为害,具有良好的应用前景。     

转Bt基因棉种植前后3个棉铃虫种群对4种杀虫剂的抗性变化

分别于1990年、1992年、2001年和2005年从山东泰安、山东夏津和湖北天门采集3个棉铃虫H elicoverpa arm igera种群,采用点滴法测定了4种杀虫剂对其的毒力,以监测各种群的抗药性变化趋势。结果表明:19901992年3个种群棉铃虫对氰戊菊酯的抗性增长迅速(13.256.1倍);19922001年抗性增长速度有所减缓(3.111.0倍);20012005年抗性水平降低。3个种群棉铃虫对灭多威和辛硫磷的抗性变化趋势与氰戊菊酯的基本相似,但抗性水平较低;对硫丹则均一直处于敏感水平。引起抗药性变化的原因主要与各类药剂的使用频率和转B t基因抗虫棉的大面积推广有关。     

苏云金芽胞杆菌JQD117菌株对韭蛆体内几种酶活性的影响

为明确苏云金芽胞杆菌JQD117对韭蛆幼虫蛋白酶和解毒酶活性的影响,测定比较了感染Bt后幼虫体内胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、乙酰胆碱酯酶、谷胱甘肽-S-转移酶和羧酸酯酶的活性。首先采用室内生物活性测定方法明确了菌株JQD117对韭蛆3龄幼虫72 h的LC₅₀为2.8070×10⁷cfu/mL,然后采用10×LC₅₀、1×LC₅₀和0.1×LC₅₀三个浓度饲喂感染韭蛆幼虫,定期取样测定韭蛆体内5种酶活性,结果表明以较高浓度（1×LC₅₀和10×LC₅₀）感染韭蛆幼虫后体内蛋白酶和解毒酶活性变化较大,而以低浓度（0.1×LC₅₀）感染韭蛆幼虫后体内蛋白酶活性变化较小。其中,以1×LC₅₀和10×LC₅₀浓度感染韭蛆幼虫后,胰蛋白酶和乙酰胆碱酯酶活性在24~36 h和6~60 h与对照相比均显著升高;类胰凝乳蛋白酶和羧酸酯酶活性在6~60 h与对照相比均受到显著抑制。以0.1×LC₅₀浓度感染韭蛆幼虫后,胰蛋白酶活性只在36 h时与对照相比显著升高;乙酰胆碱酯酶活性在12~48 h时与对照相比显著升高;羧酸酯酶活性只在6 h与对照相比受到显著抑制;类胰凝乳蛋白酶活性与对照相比均无显著变化。谷胱甘肽-S-转移酶活性在三种感染浓度下与对照相比均无显著变化。可见,感染JQD117对韭蛆体内蛋白酶和解毒酶活性均产生了不同程度的影响,且随感染浓度的升高而增强,扰乱了韭蛆正常的生理代谢和对外源毒素的分解,本文为Bt防治韭蛆应用和开发提供了理论指导。