茶树悬浮细胞培养儿茶素的产生

利用植物细胞培养方法生产有用次生代谢产物,是植物生物工程研究的一个重要方面.茶树是次生代谢产物较为丰富的植物种类,尤其是以儿茶素为主要代表的多酚类物质,在茶树细胞中含量较高,因此,利用细胞培养方法生产儿茶素类物质具有天然的有利条件.茶树组织培养次生代谢产物形成的研究最早见于英国Forrest的报道,其后,原苏联科学家对茶愈伤组织中酚类化合物的形成也作了一系列研究.中国农业科学院茶叶研究所在茶树愈伤组织培养儿茶素的形成方面也进行了一系列的研究,证实茶树培养细胞在一定条件下不仅能够保持其次生代谢产物的合成能力,而且可以通过培养基组分调节等方法大幅度提高其儿茶素含量.本文着重讨论茶树细胞悬浮培养下培养基配方、接种量、碳源和氮源浓度、激素、培养基初始pH值等因素对儿茶素形成的影响.     

石牌广藿香的细胞悬浮培养

以石牌广藿香无菌苗幼嫩叶片为外植体,通过愈伤组织诱导和培养、筛选及细胞的液体培养,在含0.05 mg/L 2,4-D和0.5 mg/L KT的MS液体培养基中获得了分散性良好的悬浮细胞,建立了广藿香细胞悬浮培养体系.研究培养基中植物生长调节剂、继代培养时间等因素对细胞生长、分化的影响.结果表明:0.05 mg/L2,4-D和0.5 mg/L KT能促进细胞的快速生长,而0.5～1.0 mg/L BA促进细胞的分化;以继代培养时间为15～18 d细胞进行接种,接种量8 g/100 mL时,悬浮细胞到达最大生长量,细胞鲜重最高达到511.2 g/L.     

枇杷细胞悬浮培养生产熊果酸的调控

以枇杷悬浮培养细胞的生长量及熊果酸（UA）的含量为考察指标,从蔗糖浓度、装液量、pH值、接种量、温度、光照强度、摇床转速、激素等开展培养参数的筛选。结果表明：接种量8 g/100 mL,pH6.0,蔗糖30 g/L,25 ℃,白炽灯400 lx,转速130 r/min,装液量130 mL/250 mL,MS+NAA 0.5 mg/L,15 d收获,细胞鲜重是起始的3.577倍,UA含量为34.993 mg/g DW,是自然界枇杷叶的约3.5倍。     

大豆悬浮细胞培养及作为外源基因转化受体的研究

以吉林小粒7号大豆品种为材料,切取无菌幼苗下胚轴诱导愈伤组织,初步建立了大豆悬浮细胞系,测定不同硼酸浓度下悬浮细胞生长变化;采用农杆菌介导法对大豆悬浮细胞进行外源GUS基因的转化,先通过不同程度的超声处理确定最佳超声时长,然后在最佳超声处理时长的基础上,探讨了硼酸浓度对转化效率的影响;最后采用PCR和Southern blot杂交对抗性愈伤做分子鉴定。结果表明:大豆悬浮细胞正常生长硼酸浓度在2.0~10 mg·L-1,过高或过低均会抑制大豆细胞正常的生长,高于100 mg·L-1时抑制作用最显著。但在转化过程中,适当增加硼酸浓度(10~30 mg·L-1)则能够提高悬浮细胞的转化效率,并且有助于转化组织的筛选,借以3 min超声的辅助作用,30 mg·L-1硼酸浓度下转化效率达到1 mg转化细胞团中含28个转化体。     

香蕉胚性细胞悬浮培养方法的改进

针对香蕉胚性悬浮细胞培养过程中存在的胚性愈伤组织的诱导率低、周期过长、胚性易丢失等问题, 以“苹果蕉”及“威廉斯”香蕉的未成熟雄花为试验材料, 对香蕉胚性愈伤组织的诱导、 悬浮培养的理化条件进行改进。 结果表明： （1）光照条件较暗培养更有利于诱导理想的香蕉胚性愈伤组织; （2）M1培养基中加入酪蛋白和脯氨酸有利于胚性愈伤组织的诱导; （3）用微孔板代替三角瓶悬浮培养, 有利于悬浮细胞分裂增殖, 而且可减少污染的可能。     

建立高质量马铃薯细胞悬浮培养物的研究

以马铃薯四倍体栽培品种甘农薯２号、布尔班克（Ｒｕｓｓｅｔ Ｂｕｒｂａｎｋ）的块茎和茎段两种外植体为材料,进行了愈伤组织诱导和继代培养、细胞悬浮培养物的建立及其继代培养的研究。结果表明：选取良好的愈伤组织经１～３次继代培养后进行细胞悬浮培养,培养物每５ｄ继代一次,继代时新旧培养基体积按３：１配置,能获得较高质量的培养物。在悬浮培养及继代培养过程中,用高浓度蔗糖溶液或蒸馏水调节该培养液的渗透压,以及采用与愈伤组织固体培养基成分相同的细胞悬浮培养基和悬浮继代培养基,可有效地控制悬浮细胞的质壁分离和破碎现象,有助于建立高质量的细胞悬浮培养物。     

茶悬浮培养细胞玻璃化超低温保存研究

为保存具有稳定代谢能力的优良茶细胞系,本文对茶叶悬浮培养细胞玻璃化法超低温保存进行了初步研究。结果表明:预培养以4d最佳,60%PVS2冰浴装载以20min最好,100%PVS2冰浴脱水处理60min最优,40℃复温解冻细胞存活率最高,采用这些参数进行完整试验的细胞存活率达到76%,初步建立了茶悬浮培养细胞玻璃化超低温保存的冷冻程序。     

胆木愈伤组织与悬浮细胞培养研究

通过组织培养技术,利用胆木(Nauclea officinalis)种子无菌实生苗的茎段、叶片、叶柄等进行愈伤组织的诱导及悬浮细胞的培养。结果如下：(1)以WPM为基本培养基,获得愈伤组织高诱导率的激素种类及浓度为①0.5 mg/L 2,4-D、②0.5～1.5 mg/L IBA＋(0.0,0.5 mg/L)6-BA,诱导率达到100%;(2)在外植体的差异上,茎段和叶片出现愈伤组织的时间较早、增殖系数最大,可达15倍;(3)在培养基1/2WPM＋0.5 mg/L 2,4-D＋30 g/L蔗糖中,继代周期为14～17 d,胆木细胞悬浮培养增殖率可达30.16%。     

内生细菌及其组合对雷公藤悬浮细胞生长及生化特性的影响

本研究将雷公藤内生细菌菌株 Pseudomonas chlororaphis LG6、Pantoea ananatis LY3、Bacillus cereus group LJ3、Bacillus cereus group LJ12 及其组合分别以活菌、灭活菌体粗提物和菌液的形式添加到悬浮细胞培养体系中,通 过检测悬浮细胞的重量、细胞活力以及培养液的 pH、电导率、可溶性糖和 NO3 ? 含量,分析了内生细菌对雷公藤悬浮细 胞生长状况的影响。结果显示,内生细菌活菌对悬浮细胞生长的影响较大,菌株 LY3、LJ3、LJ12、LY3+LJ12 及 LG6+LY3+LJ3+LJ12 活菌对悬浮细胞的鲜重具有促进作用,菌株 LY3 和大部分混合菌株的活菌降低了培养液的 pH,多 数内生菌株活菌提高了培养液的电导率,内生菌株活菌的添加使培养液的可溶性糖含量发生了较大变化,并明显提高 了培养液中的 NO3 ? 含量。灭活菌体粗提物和菌液的添加对细胞鲜重的增加多表现为抑制作用。     

香蕉横切薄层切片芽分化的培养技术

以香蕉横切薄层切片为材料,研究了不同因素对薄层切片芽分化的影响。结果表明:利用横切薄层培养技术能更有效、快速地进行香蕉的无性繁殖;TDZ（英文名为Thidiazuron,N-pheny-N’-1,2,3.-thia-diazol-5-ylurea,中文译为苯基噻二唑基脲）对香蕉薄层切片芽的分化有抑制作用,没有得到生长正常的不定芽;横切薄层切片在暗培养且培养温度为30℃时比25℃有较高的不定芽分化率,不定芽分化能力强,丛芽多;蔗糖和AgNO3对薄层切片芽分化有一定的影响。      

五种石斛组培苗生物学性状观测

通过对5种石斛组培苗栽培试验和生物学性状观测,了解不同石斛组培苗生长发育规律,为制定人工栽培措施提供科学依据。     

花生愈伤组织的诱导及细胞悬浮培养体系的建立

以中花2号无菌苗为材料,对愈伤组织诱导和细胞悬浮培养的最佳条件进行探讨,并对悬浮细胞的生长特性进行检测,建立了花生悬浮细胞培养体系。结果表明,叶片是诱导愈伤组织和进行悬浮培养的理想外植体,愈伤组织最佳诱导培养基为MS+6-BA 2.0mg/L+2,4-D 2.0mg/L,悬浮培养适宜培养基为MS+6-BA 2.0mg/L+2,4-D 2.0mg/L+KT 1.5mg/L。悬浮细胞生长呈"S"型曲线,培养12d达到最大生长量,最适继代周期为12d左右,在悬浮培养过程中,细胞数量呈现先上升后下降的趋势,培养液的pH和电导率变化则均为先下降再回升最后趋于稳定。     

香蕉内生炭疽菌鉴定及致病性测定

通过对香蕉内生炭疽菌（Colletotrichum spp.）的分类地位和致病性测定,确认香蕉内生炭疽菌为芭蕉炭疽菌（Colletotrichum musae）,对香蕉果实具有致病性,病菌可从伤口侵入或直接侵入果皮致病,引起不同程度的果实腐烂。试验结果表明,香蕉内生炭疽菌是香蕉炭疽病的潜伏侵染菌源。     

蝴蝶兰组织培养的研究进展

从外植体选择出发,阐述了培养基、激素以及其他添加物对蝴蝶兰类原球茎诱导、增殖以及分化等的影响,概述了蝴蝶兰组织培养的研究进展,为蝴蝶兰研究提供了一定的参考依据、     

虫霉防治大豆蚜虫效果及其评价

2002年和2003年应用虫霉防治大豆蚜虫,盆栽试验结果表明,喷施10ml/L虫霉的处理对大豆蚜虫校正 防效最高,两年分别为100%和99. 3% ,虫霉浓度为6. 7ml/L则校正防效分别为93. 5%和95. 6%。2003年采用虫 霉浓度为10ml/L和6. 7ml/L的处理其校正防效与化学农药氧化乐果的校正防效差异不显著。2004年田间小区试 验结果表明,虫霉浓度为10ml/L对大豆蚜虫校正防治效果达100% , 6. 7ml/L的校正防治效果为98. 6%;田间大区 试验的校正防效分别为62. 3%和50. 4% ,所以建议使用10ml/L的虫霉防治大豆蚜虫。     

2个淮山品种的微体扦插繁育技术

以"桂淮2号"、"桂淮6号"2个淮山品种的-叶-芽微体植株为试验材料.比较不同生长素种类及浓度处理,以及不同无土栽培基质配比对植株生根和微型薯生长的影响,以建立淮山微体扦插繁育技术体系.结果表明:"桂准2号"、"桂淮6号"2个淮山品种在植物非试管快繁技术大棚内可不经生长素处理直接进行微体扦插,生根率分别达到98.3%、95.8%;泥炭土:珍珠岩(1:1,体积比)、泥炭土:甘蔗渣(1:1,体积比)分别是"桂淮2号"、"桂淮6号"微体扦插生产微型薯的较优基质配方:微体扦插植株茎伸长生长长度分别与薯长及薯鲜重间存在明显的正相关性.