鸡减蛋综合征病毒DNA结合蛋白的基因结构及同源分析

从中国发病鸡群中分离的鸡减蛋综合征病毒（ＥＤＳＶ）ＡＡ－２株，经常规方法提取其病毒核酸后，构建了限制性内切酶ＰｓｔⅠ及ＨｉｎｄⅢ水解片段的基因文库。对其中ＨｉｎｄⅢ－Ｆ片段（５２．９～５８．９ｍｕ）的正反２条链的序列测定发现，其反链存在１个编码容量为３８７个氨基酸（ａａ）的开放读码框架（ｏｐｅｎｒｅａｄｉｎｇｆｒａｍｅ，ＯＲＦ），经Ｇｅｎｅｂａｎｋ／ＥＭＢＬ同源搜寻后证实其编码产物为ＥＤＳＶ的ＤＮＡ结合蛋白（ＤＢＰ）。与其他腺病毒ＤＢＰ的氨基酸序列进行同源比较，其Ｎ端同源性在１９．０％～４６．２％之间，Ｃ端同源性在２７．７％～６０．４％之间。腺病毒ＤＢＰ的３个保守序列ＣＲ１，ＣＲ２，ＣＲ３在ＥＤＳＶＤＢＰ中有较大变化，但ＥＤＳＶＤＢＰ的锌指框架（Ｚｎ２＋ｆｉｎｇｅｒｍｏｔｉｆ）却保留了对其功能必需的残基。     

牦牛卵泡液LDH同工酶及外源性激素对其表达模式的影响

采用比色法和不连续缓冲系统的聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡＧＥ）技术对未孕和怀孕初期牦牛卵泡液乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）活性及同工酶进行了测定，并分析了促卵泡素３号（ＬＲＨ－Ａ３）、人绒毛膜促性腺激素（ｈＣＧ）和孕马血清促性腺激素（ＰＭＳＧ）对其表达模式的影响。结果表明，未孕和怀孕初期牦牛卵泡液ＬＤＨ活性分别为２００．４±３１．１，２１５．３±８６．６μｍｏｌ·ｓ－１·Ｌ－１，同工酶有５条谱带。３种外源性激素均使牦牛卵泡液ＬＤＨ活性显著升高（Ｐ＜０．０１），ＬＤＨ同工酶带型分布发生变化，降低了ＬＤＨ２／ＬＤＨ１比值，改变了同工酶中Ａ和Ｂ亚基所占比例     

藏獒血液乳酸脱氢酶同工酶酶谱的电泳研究

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法对２１条藏獒的红细胞乳酸脱氢酶（ＲＢＣ－ＬＤＨ）和血清到脱氢酶（Ｓ－ＬＤＨ）同工酶酶谱及其多态性进行研究。结果发现：（１）ＲＢＣ－ＬＤＨ同工酶共有３条区带,呈现两种电泳表型,１１条藏契为ＬＤＨ２Ａ型（５７．８９％）,８条藏獒为ＬＤＨ２ａ（４２．１１％）,（２）Ｓ－ＬＤＨ共有５条区带,呈现两种电泳表型,２条藏獒为ＬＤＨ１Ａ（９．５２％）,１９条藏獒为ＬＤＨ１ａ（９０．４８％）     

产气荚膜梭菌α毒素保护性抗原基因在大肠杆菌中的高效表达

对含有产气荚膜梭菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）α毒素基因的重组菌株ＢＬ２１（ＤＥ３）（ｐＸＥＴＡ１）和ＢＬ２１（ＤＥ３）ｐｌｙｓＳ（ｐＸＥＴＡ１）,通过培养性状观察和小鼠接种试验,证明这２株重组菌株均无致病性。随后对这２株重组菌株的表达产物进行了研究,经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和薄层凝胶扫描分析,ＩＰＴＧ诱导３～４ｈ后的ＢＬ２１（ＤＥ３）（ｐＸＥＴＡ１）表达的α毒素占菌体总蛋白３３．２１％,ＢＬ２１（ＤＥ３）ｐｌｙｓＳ（ｐＸＥＴＡ１）表达的α毒素占菌体总蛋白２７．２５％,其相对分子质量约３７５００;经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析,表达产物可被α毒素抗血清识别。包涵体粗提物的免疫攻毒试验结果表明,以１倍致死量攻击的免疫小鼠可获得１００％（３６／３６）的保护,以２倍致死量攻击的免疫小鼠可获得９４．２８％（３３／３５）的保护,从而说明表达产物具有良好的免疫原性。     

绿脓杆菌外毒素A受体结合亚单位基因的克隆与表达

为防治绿脓杆菌感染造成的细胞坏死及多器官衰竭，本试验克隆了含绿脓杆菌外毒素Ａ（ＰＥＡ）结合亚单位（Ⅰ区）和部分跨膜亚单位（Ⅱ区）编码３０９个氨基酸的约１０００ｂｐ的基因片段，以正确阅读框架将该片段置于原核高效表达Ｔ７启动子下游，构建了高效表达质粒ｐＥＴ－ＥＡＢ。转化宿主菌ＢＬ２１（ＤＥ３）、ＨＭＳ１７４（ＤＥ３）、ＨＭ１７４（ＤＥ３）ｐｌｙｓＳ和ＢＬ２１（ＤＥ３）ｐｌｙｓＳ后，经ＩＰＴＧ诱导４ｈ，均表达了外源目的基因蛋白，其中ＢＬ２１（ＤＥ３）和ＢＬ２１（ＤＥ３）ｐｌｙｓＳ的表达量明显高于其他宿主菌。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析，外源蛋白分子量约３４０００，与ＰＥＡⅠ区和部分Ⅱ区基因所编码的蛋白理论估计值相符，命名为ＰＥ３４。凝胶薄层扫描显示，ＰＥ３４含量占菌体蛋白总量的５６％。Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔｉｎｇ检测证明ＰＥ３４为所需目的蛋白     

狂犬病病毒糖蛋白基因在原核细胞中的表达

将狂犬病病毒糖蛋白（ＲＶｇｐ）基因ＢｇｌⅡ片段（１６７５ｂｐ）分别正向插入到原核高效表达载体ｐＥＴ－１７ｂ和ｐＥＴ－１７ｂ２（用ＳａｃⅠ－ＮｄｅⅠ缺失掉ｐＥＴ－１７ｂ６０ｂｐ含起始密码子ＡＴＧ小片段）的ＢａｍＨⅠ切点，构建重组质粒ｐＥＴ－１７ｂＲＶｇｐ和ｐＥＴ－１７ｂ２ＲＶｇｐ。将其分别转化表达受体菌Ｅ．ｃｏｌｉＢＬ２１（ＤＥ３）和Ｅ，ｃｏｌｉＢＬ２１（ＤＥ３）ｐｌｙｓＳ．ＩＰＴＧ诱导表达，菌体经超声波裂解处理后ＳＤＳ－ｐＡＧＥ，染色，在分子量约６００００处可见重组质粒表达的较宽的蛋白带，以抗ＲＶｇｐＭｃＡｂ进行Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ检测，表明该表达蛋白为ＲＶｇｐ。通过扫描显示，表达的ＲＶｇｐ占菌体总蛋白的１０％～１４％，其中ｐＥＴ－１７ｂ２ＲＶｇｐ在Ｅ。ｃｏｌｉＢＬ２１（ＤＥ３）中的表达量最高。     

BWEL-SPF鸡群对鸡传染性法氏囊病强毒的敏感性试验

用三种不同鸡传染性法氏囊病强毒株,对ＢＷＥＬ－ＳＰＦ鸡群１－１０个家系３周龄鸡进行敏感性试验,观察比较鸡群各家系对不同敏感性,测定不同毒株的毒价。广西强毒株（ＩＢＤＶ－ＧＸ株）〈ＬＤ５０为１０＾５．０／０．２ｍｌ;湖南强毒株,ＬＤ５０为１０＾５．２／０．２ｍｌ;吉林强毒株（ＩＢＤＶ－ＪＬ株）,ＬＤ５０为１０＾５．５／０．２ｍｍｌ,以１００ＬＤ５０攻毒剂量,对ＢＷＥＬ－ＳＰＦ鸡１￣１０家系的致死率为     

饲喂豆饼粉——玉米基础日粮的河鲇鱼蛋氨酸需要量

应用豆饼粉－玉米基础日粮测定，２５℃时４２天试验期中１４克河鲇鱼日粮蛋氨酸（Ｍｅｔ）的需要量。与鲇鱼体成分氨基酸有关的平衡限制氨基酸基础日粮含２７７克ＣＰ、３．６克Ｍｅｔ、４．０克胱氨酸（Ｃｙｓ）和１０ＭＪＤＥ／ｋｇＤＭ。在谷氨酸缺乏时，ＤＬ－蛋氨酸按０￣１２克／千克，间隔２克添加到基础日粮中形成７种等氮和等能日粮。对照日粮含３３１克ＣＰ、８克Ｍｅｔ、５克Ｃｙｓ和１０ＭＪＤＥ／ｋｇＤＭ（包括８％鱼     

含绿脓杆菌外毒素A受体结合区重组蛋白的纯化

将表达含绿脓杆菌外毒素（ＰＥＡ）受体结合区基因的质粒ｐＥＴ－ＥＡＢ转化到大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中,经ＩＰＴＧ诱导表达了含ＰＥＡ受体结合区的重组蛋白（称ＰＥ３４）。ＰＥ３４主要以包涵体形式存在于大肠杆菌中,用溶菌酶－脱氧胆酸钠法结合超声波裂解法破碎细菌,离心制备包涵体。用２ｍｏｌ／Ｌ脲洗涤包涵体后,包涵体纯度可达７５％,在８ｍｏｌ／Ｌ脲存在条件下,ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－２００凝胶滤过,ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦａｓｔＦｌｏｗ离子交换层析纯化,获得ＳＤＳ－ＰＡＧＥ１条带的ＰＥ３４,纯度达９５．８％,得率为２４．５％。     

鸡新城疫CS2实验疫苗的生产及鉴定

应用ＳＰＦ鸡胚生产出３批ＣＳ２实验疫苗，疫苗的病毒价≥１０８．５ＥＬＤ５０／ｍｌ。对２月龄小鸡的最低免疫量（ＭＩＤ）为３～３０ＥＬＤ５０。据此，作者们建议对此种小鸡的实用免疫剂量为１０５ＥＬＤ５０。对这３批疫苗的实验结果显示：１０倍的剂量（即１０６ＥＬＤ５０）对鸡不引起任何不正常现象。免疫持续期达１２个月以上。在２～８℃和－１５℃中分别保存９和２４个月效力不变。     

L-肉碱在水产动物营养中的作用

１Ｌ－肉碱的结构及合成Ｌ－肉碱又叫肉毒碱，是一种水溶性的氨基酸，其结构同胆碱和甜菜碱相似。肉碱有两种旋光异构体即Ｄ－肉碱和Ｌ－肉碱。Ｄ－肉碱及其消旋体为合成物，不存在于生物体组织中，且由于Ｄ－肉碱对肉碱乙酰转移酶（ＣＡＴ）和肉碱脂肪酰转移酶（ＰＴＣ）有竞争抑制作用，而不利于生物体的新陈代谢及Ｌ－肉碱功能的发挥。Ｔｏｍｉｔａ和Ｓｅｎｄｉｕ等（１９２７）证实了其分子结构，为Ｌ－β－羟－γ－三甲氨基丁酸［（ＣＨ３）３－Ｎ＋－ＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２－ＣＯＯ－］，是一种存在于生物体组织中具有生理活性的物…     

1993年农业部批准的国家级新兽药28种（一）

１９９３年农业部批准的国家级新兽药２８种（一）苯硫苯咪唑ＢｅｎｌｉｕｂｅｎｍｉｚｕｏＦＥＮＢＥＤＡＺＯＬＵＭ本品为５－苯硫基－苯并咪唑－２－氨基甲酸甲酯。按干燥品计算，含Ｃ１５Ｈ１３Ｎ３Ｏ２Ｓ应为９９．０－１０１．０％。［性状］本品为白色或类白色粉末...     

蝇蛆在动物饲料中的应用

１蝇蛆的营养价值据国内外对蝇蛆营养成分的的分析，蝇蛆含粗蛋白质５９％～的％，脂肪２．６％－１２％（表１），无论原物质或是干粉，蝇蛆的粗蛋白质含量都和鲜鱼、鱼粉及肉骨粉相近或略高。蝇蛆的营养成分较为全面，含有动物所需要的多种氨基酸，且每一种氨基酸含量都高于鱼粉，必需氨基酸总量是鱼粉的２．３倍，蛋氨酸含量是鱼粉的２．７倍，赖氨酸含量是鱼粉的２．６倍。蝇蛆粉的必需氨基酸总量（Ｅ）为４３．３０％，超过粮食与农业组织／世界卫生组织（ＦＡＯ／ＷＨＯ）提出的参考值４０％，其必需氨基酸与非必需氨基酸总量的比值（…     

传染性法氏囊病病毒变异株主要免疫原基因cDNA的克隆及鉴定

采用反转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ），从１株传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）本地分离株ＧＺ９０２中扩增到编码ＩＢＤＶ主要免疫蛋白ＶＰ２的ｃＤＮＡ片断，大小约为１３５０ｂｐ。将该ｃＤＮＡ片断插入ｐＢｓＫ质粒中，用重组质粒转化大肠杆菌ＸＬ１－Ｂｌｕｅ，成功获得重组质粒转化菌。对重组质粒ＤＮＡ进行酶切鉴定，证明插入的ＤＮＡ片断与ＰＣＲ扩增的ＤＮＡ片段大小相符。对ＧＺ９０２高可变区进行了序列分析。其核苷酸序列与３株ＩＢ－ＤＶ变异株Ａ、ＧＬＳ、Ｅ的同源性分别达到９８．９％，９６．２％和９５．５％。而与其他Ⅰ型毒株的同源性较低。比较从ＤＮＡ序列推导出的氨基酸序列，发现ＧＺ９０２高可变区的两个亲水区均发生了一个氨基酸的变化，而在２４９和２５４位上的氨基酸分别为Ｋ和Ｓ，与以上３个变异株相同，但与所有标准Ⅰ型毒株不同。这两个氨基酸可以作为ＩＢＤＶ变异株的标志。     

共轭亚油酸对蛋鸡生产性能、蛋壳质量和血清生化指标的影响

为了研究共轭亚油酸（ＣＬＡ）对蛋鸡生产性能和蛋壳质量的影响及机理,试验选用 ４０周龄健康、体重和产蛋率相近的海兰白蛋鸡 ４８０只,采用单因素试验设计,随机分为 ４组,每组 ３个重复,每个重复４０只,试验组分别添加０．５％、１．０％和２．０％的 ＣＬＡ,对照组不添加,试验期８周。试验结束时,每组选 ６只采血并屠宰,测定血清中三碘甲腺原氨酸（Ｔ３）、四碘甲腺原氨酸（Ｔ４）、皮质醇、雌二醇（Ｅ２）、钙离子、磷离子含量和碱性磷酸酶（ＡＬＰ）活性及肝脏肉毒碱棕榈酰转移酶（ＣＰＴ Ⅰ）活性。结果表明：１）各试验组蛋鸡生产性能与对照组均差异不显著（Ｐ＞０．０５）。２）各试验组蛋壳强度均显著大于对照组（Ｐ＜０．０５）,蛋壳厚度均差异不显著（Ｐ＞０．０５）。３）２．０％ＣＬＡ组蛋鸡血清 Ｔ３、Ｔ４、皮质醇和 Ｅ２含量显著高于对照组及 ０．５％和 １．０％ＣＬＡ组（Ｐ＜０．０５）;各试验组蛋鸡血清钙、磷离子浓度与对照组差异不显著（Ｐ＞０．０５）;０．５％和 １．０％ＣＬＡ组蛋鸡血清 ＡＬＰ活性显著高于对照组（Ｐ＜０．０５）。４）１．０％和 ２．０％ＣＬＡ组蛋鸡肝脏 ＣＰＴ Ⅰ活性显著低于对照组（Ｐ＜０．０５）。由此可见,在本试验条件下,饲粮添加 １．０％的ＣＬＡ能显著提高蛋鸡血清中 ＡＬＰ活性,并在一定程度上促进 Ｅ２的分泌,显著提高蛋壳强度,且不影响蛋鸡的生产性能。     

影响玻璃化冷冻兔胚胎效果的一些因素

试验对影响玻璃化冷冻兔胚胎效果的一些因素进行探讨，以找出理想的玻璃化冷冻方法。在测试的５种玻璃化溶液中，含３５％乙二醇（ＥＧ）和１．０ｍｏｌ／Ｌ蔗糖的溶液（ＶＳ１）对胚胎的毒性最小。用ＶＳ１冷冻桑椹胚和囊胚的理想程序是：在室温下使胚胎分别在２０％ＥＧ和３５％ＥＧ中平衡２、３分钟后，移入ＶＳ１中，０．５分钟内（囊胚也可在２分钟后）投入液氮中冷冻。桑椹胚的存活率为９１．７％（３３／３６），囊胚的存活率为９７．１％（３３／３４）～９７．３％（３６／３７）。８～１６细胞胚胎的理想冷冻程序为：在室温下使胚胎在２０％ＥＧ、３５％ＥＧ中平衡２、３分钟，移入４℃的３７％ＥＧ＋１．０ｍｏｌ／Ｌ蔗糖溶液中平衡２分或１０分钟后冷冻，胚胎存活率分别为１００％（３７／３７）、８６．１％（３１／３６）。     

超排山羊卵巢卵母细胞体外成熟和体外受精的研究

以ＴＣＭ１９９＋１０ｍｍｏｌ／ＬＨＥＰＥＳ＋青霉素（６ｍｇ／Ｌ）＋链霉素（５ｍｇ／Ｌ）为基础培养液（ＢＭ），再分别加入不同成分，配成５种卵母细胞成熟液：（Ａ）ＢＭ＋１０％ＥＧＳ；（Ｂ）ＢＭ＋１０％ＥＧＳ＋ＨＣＧ（２．５ｍｇ／Ｌ）；（Ｃ）ＢＭ＋１０％ＥＧＳ＋ＨＣＧ＋Ｅ２（１ｍｇ／Ｌ）；（Ｄ）ＢＭ＋１０％ＦＣＳ＋ＨＣＧ＋Ｅ２；（Ｅ）ＢＭ＋１０％ＥＧＳ＋ＨＣＧ＋Ｅ２＋颗粒细胞（１．５×１０６～３．０×１０６个／ｍＬ）。在３８．５℃、５％ＣＯ２下培养２６ｈ，排卵后第１天卵巢卵母细胞体外成熟率分别为６７．６７％（２０／３０），６０．４２％（２９／４８），８３．６７％（４１／４９）和８０．８２％（５９／７３），排卵后第５天卵巢卵母细胞，在培液Ｄ中体外成熟率为７１．４３％（４５／６３）。排卵后第１天的９８枚卵巢卵母细胞，体外成熟体外受精卵裂率为２１．４３％，２１枚２细胞胚移植５头受体获２头羔羊。研究表明，超排山羊卵巢卵母细胞经体外成熟可获得大量廉价的成熟卵母细胞，并可通过体外受精获得试管山羊     

允许使用的饲料添加剂品种

中华人民共和国农业部公告（第１０５号）附件总计：１７３种（类）类　　别饲料添加剂名称饲料级氨基酸７种Ｌ赖氨酸盐酸盐；ＤＬ蛋氨酸；ＤＬ羟基蛋氨酸；ＤＬ羟基蛋氨酸钙；Ｎ羟甲基蛋氨酸；Ｌ色氨酸；Ｌ苏氨酸饲料级维生素２６种β胡萝卜素；维生素Ａ；维生素Ａ乙酸酯；维生素Ａ棕榈酸酯；维生素Ｄ３；维生素Ｅ；维生素Ｅ乙酸酯；维生素Ｋ３（亚硫酸氢钠甲萘醌）；二甲基嘧啶醇亚硫酸甲萘醌；维生素Ｂ１（盐酸硫胺）；维生素Ｂ１（硝酸硫胺）；维生素Ｂ２（核黄素）；维生素Ｂ６；烟酸；烟酰胺；Ｄ泛酸钙；ＤＬ泛酸…     

兔狲血液蛋白质和酶的电泳分析

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法对２只兔狲的４种血液蛋白质表型和３种血液同工酶酶谱进行研究。结果发现：①被检兔狲的血红蛋白（ＨＢ），白蛋白（ＡＬＢ）和后白蛋白（Ｐａ）分别呈单一的ＨＢＡＢ，ＡＬＢＡＡ和ＰａＡＡ型，运铁蛋白（ＴＦ）有ＴＦＡＢ和ＴＦＢＢ两种表型；②血清碱性磷酸酶（ＡＬＰ）由ＡＬＰＡ，ＡＬＰＢ，ＡＬＰＣ和ＡＬＰＤ四种同工酶组成；③血清酯酶（ＥＳ）由ＥＳＩ和ＥＳＩＶ两种同工酶共７条区带组成；④血清乳酸脱氢酶（Ｓ－ＬＤＨ）由ＬＤＨ１，ＬＤＨ２，ＬＤＨ３，ＬＤＨ４和ＬＤＨ５五种同工酶组成，红细胞内只有前四种ＬＤＨ同工酶。     

混合保护液和冻前处理方法对小鼠胚胎一步冷冻效果的影响

选用Ａ￣Ｅ５种混合保护液：Ａ．二甲亚砜（ＤＭＳＯ）＋乙醇（ＥＧ），Ｂ．甘油（ＧＬ）＋丙二醇（ＰＧ），Ｃ．ＧＬ＋ＥＧ，Ｄ．ＧＬ＋ＤＭＳＯ，Ｅ．ＰＧ＋ＥＦ，以２种冻前处理方法，对小鼠桑椹胚和囊胚进行一步冷冻，冷冻混合保护液中各种保护剂浓度均为２５％。法的冻前平衡液为ＶＳ２的对倍稀释液；法的冻前平衡液中，前一种保护剂浓度为１０％，后一种保护剂浓度为２０％。胚胎于室温（２０℃）下在ＶＳ１中平衡５ｍｉｎ或Ｖ