热应激小鼠胚胎着床模型的建立

模拟夏季高温环境对孕鼠的应激作用,建立热应激影响昆明白小鼠胚胎着床的模型。试验设为对照组(23℃±2℃)、40℃和42℃应激组(小鼠妊娠1～4d,分别应激2h),比较观察妊娠5、6、7d小鼠胚胎着床数及子宫状况和产仔数。结果表明,与对照组相比40℃和42℃应激组妊娠5d(11.00±2.65、10.00±2.12vs15.00±1.58,P0.05)、6d(11.40±3.21、10.60±2.30vs 15.00±0.71,P0.05)、7d(11.00±2.55、11.00±1.58vs 15.60±1.67,P0.05)胚胎着床率显著下降,产仔数(8.60±1.14、8.40±1.82vs 11.40±1.82,P0.05)也显著下降;且相比对照组其着床位点均较少且分布失衡。40℃和42℃应激组之间无显著差异,以42℃应激组影响相对较大。可见,胚胎着床前孕鼠连续4d40℃、42℃应激2h,可显著影响小鼠的繁殖能力。42℃可作为影响小鼠胚胎着床的热应激模型。     

胚胎着床期间母-胎对话研究进展

哺乳动物胚胎着床时,母体和胚胎之间进行精密的分子对话和信号交换,以使两者达到协调。母体和胚胎来源的类固醇激素、生长因子、细胞因子、整合素等在胚胎着床及母体妊娠识别过程中发挥着重要的作用,使母体-胎儿间形成一个紧密联系的对话体系。综述了胚胎着床过程中母-胎对话的研究进展。     

反刍动物的胚胎着床与妊娠识别过程的研究进展

反刍动物的胚胎着床与妊娠识别是个复杂的生理过程，这一过程受多种细胞因子和生殖激素调控。文中叙述了各种细胞因子和生殖激素对妊娠建立和维持的调控作用。     

ICR小鼠着床障碍模型的建立

为建立ICR小鼠胚泡着床障碍模型,本研究用米非司酮和吲哚美辛对妊娠ICR雌鼠进行抗着床处理,观察其对胚泡着床及子宫内膜的影响。实验分为米非司酮组和吲哚美辛组,每组设对照组。于妊娠第4天分别注射0.3、0.6、0.9、1.2 g.L-1的米非司酮0.1 mL.mouse-1,及0.12、0.13、0.14、0.15 mL吲哚美辛溶液,对照组注射二者相应的溶剂丙二醇和麻油。妊娠第5天检查子宫内膜对台盼蓝的反应点数;妊娠第8天观察胚泡着床情况,统计子宫重量,制作切片,检测子宫内膜形态结构的变化。结果表明,0.09 mg米非司酮组和0.13 mL吲哚美辛组的子宫重量、内膜容受性、发育及蜕膜化均受到明显的抑制。结果表明,米非司酮和吲哚美辛可成功建立ICR着床障碍模型,用于相关研究。     

小鼠胚胎干细胞建系新方法的初步研究

通过对小鼠胚胎着床初期子宫组织块的培养及内细胞团的分离，探讨利用该方法获得胚胎干细胞的可能性，我们用这种方法已建立了一株小鼠胚胎干细胞系，传至第10代，AKP染色细胞呈强阳性，RT—PCR证实Qct-4表达强阳性。结果表明，利用这种方法获得胚胎干细胞是可行的，与传统方法相比，这种新方法极大简化了实验步骤，降低了实验技术难度。     

牛磺酸对昆明小鼠早期胚胎体外发育和着床的影响

本研究主要探讨了牛磺酸对昆明(KM)小鼠体外胚胎发育及对胚胎着床的作用。在mKSOM(modified potassium simplex optimized medium)胚胎体外培养液中分别添加不同浓度牛磺酸,培养24、72 h后分别统计4-细胞率、囊胚率、囊胚总细胞数;采用子宫角注射的方法,研究牛磺酸转运抑制剂β-丙氨酸对孕D9胚胎着床数的影响。结果表明,添加10 mmol/L牛磺酸培养液组的胚胎4-细胞率高于对照组(P<0.05),囊胚率与囊胚总细胞数明显高于对照组(P<0.01)。子宫角注射β-丙氨酸(20 μg/mL)显著降低D9着床的胚胎数。本研究初步明确了牛磺酸对小鼠体外胚胎发育及对胚胎着床的影响,为进一步研究胚胎发育和着床提供参考。     

小鼠胚胎嵌合的研究

选用昆白.CI_(57)及B/L_(615)三个品系小鼠,对其8细胞期(8C),桑椹期(M)和囊胚期(B)的全胚和半胚(半)进行聚合,培养和移植试验。8细胞期及桑椹期胚胎的聚合发育率显著高于囊胚期(P<0.05),全胚聚合的发育率显著高于半胚(P<0.05)。将同品系和不同品系的8细胞期,桑椹期和囊胚期胚胎嵌合移植给27只受体,9只妊娠,妊娠率分别为17％(1/6),40％(6/15)及33％(2/6),平均为33％(9/27),共产仔35只,其中不同品系胚胎的嵌合胚移植,产仔15只,4只为皮毛嵌合体。     

小鼠胚胎冷冻保存条件研究

为探索在实验室条件下最佳的小鼠胚胎冷冻保存条件.对不同发育阶段小鼠胚胎按照同一个冷冻程序进行冷冻;两个不同的冷冻程序对同一个发育阶段的小鼠胚胎进行冷冻.结果表明,-7℃平衡10 min,然后以0.3℃/min的速率迅速降至-35℃,-35℃平衡5min后投入液氮中,此冷冻程序比较适合小鼠胚胎冷冻;冷冻保存对16细胞以上的小鼠胚胎影响较小.     

选择素及其配体在哺乳动物胚胎着床过程中的作用

选择素是一种非免疫来源的多价糖类结合蛋白,为细胞粘附分子(celladhesionmolecules,cAMs)超家族的一员,选择素家族有3个结构类似的成员:E-选择素、L-选择素、P-选择素,它们在炎症发生时可介导白细胞与血管内皮细胞之间、白细胞与白细胞及白细胞与血小板之间的粘附。近年来研究发现,选择素及其配体还在精卵识别、滋养层细胞和子宫内膜的相互识别、滋养层细胞侵入、胎盘形成等过程中发挥重要作用。在此,主要对E-选择素、L-选择素及它们的配体在哺乳动物胚胎着床过程中发挥的作用及其表达调节作一综述。     

转人血清白蛋白基因小鼠胚胎的体外培养

探讨了获取受精卵的时间、显微注射和培养液等因素对显微注射胚胎体外发育的影响。结果表明：在注射HCG后24～26h和18～22h时获得的受精卵的囊胚率分别为45％和20％,二者差异显著;注射胚和非注射胚卵裂率差异显著(56／80 VS 74／76),但显微注射对2-细胞以后阶段的发育没有显著影响;mWM1培养液和mWM2培养液都能有效克服受精卵体外发育阻断。mWM2培养液更支持早期转基因胚胎体外发育。     

湖南地区汉族人群mir-499基因多态性与鼻咽癌发生发展的关联性研究

目的研究mir-499(rs3746444)位点多态性与鼻咽癌发病风险及临床病理因素的关系。方法采用病例-对照研究方法,用PCR-RFLP检测152例湖南地区汉族鼻咽癌患者(病例组)及性别、年龄匹配的197例正常人(对照组)mir-499(rs3746444)多态性分布,分析其与鼻咽癌风险及临床病理因素的关系。结果 mir-499基因多态性位点rs3746444的基因型和等位基因分布在病例组和对照组中差异无统计学意义(P>0.05)。T3、T4期鼻咽癌患者携带CC基因型的比例低于T1、T2期患者(P=0.027)。结论 mir-499基因多态性与湖南地区汉族人鼻咽癌的疾病发生无关,与鼻咽癌的疾病进展有关。     

速冻中低温保护剂浓度对小鼠胚胎发育的影响

用快速冷冻方法，冷冻小鼠的２－细胞胚、４－细胞胚、８－细胞胚、桑椹胚和囊胚，低温保护液分别含有０．５，１．５，２．５，４ｍｏｌ／Ｌ丙二醇，含１０％的犊牛血清和０．２５ｍｏｌ／Ｌ蔗糖，对于８－细胞以前的小鼠胚胎，快速冷冻保存时丙二醇的浓度在２．５ｍｏｌ／Ｌ和４ｍｏｌ／Ｌ时效果较好，随着小鼠早期胚胎（囊胚以前）的发育，抗低温冷冻的能力加强。     

醋酸铅对小鼠胚胎体内发育毒性的研究

采用饮水染毒法研究碱式醋酸铅对小鼠早期胚胎体内发育的毒性。将体重 (1 5± 2 ) g的母鼠随机分为高剂量、中剂量、低剂量染毒组和对照组。从试验的第 1天起 ,染毒组小鼠分别于下午 1 7:0 0至次日上午 8:0 0自由饮用 5 .0 ,1 .0和 0 .2 g/L醋酸铅溶液 ,次日上午 8:0 0至下午 1 7:0 0更换为自来水 ,如此循环 ,持续 2 1 d;对照组小鼠一直自由饮用自来水。染毒结束后 ,进行正常饲喂、饮水至试验结束。从第 2 6天开始对小鼠进行超排 ,超排小鼠分别在注射 h CG后的 4 8,72和 96 h回收输卵管及 /或子宫胚胎。结果显示 ,在注射 h CG后 4 8h回收胚胎时 ,染毒各组超排小鼠正常 2～ 4 - C胚胎占回收总数的比率与对照组无显著差异 (P>0 .0 5 ) ;72 h回收胚胎时 ,高、低剂量组的桑葚胚比率极显著低于对照组 (P<0 .0 1 ) ,中剂量组则显著低于对照组 (P<0 .0 5 ) ;96 h回收胚胎时 ,高剂量组囊胚比率极显著低于对照组 (P<0 .0 1 ) ,中、低剂量组的囊胚比率与对照组差异不显著 (P>0 .0 5 ) ,且此时各染毒组的退化胚比率均极显著高于对照组 (P<0 .0 1 )。结论认为 ,铅能显著影响体内胚胎从 2 - C期进一步发育为桑葚胚和囊胚 ,并使胚胎发育延迟、停滞和退化     

小鼠单个冷冻胚胎银染mRNA差异显示方法的建立

为建立单个冷冻胚胎银染mRNA差异显示方法,用小鼠单个4C鲜胚和冻胚RT—PCR产物,验证了冻胚和鲜胚实验结果的一致性。并从小鼠4C和8C冻胚的银染聚丙烯酰胺凝胶中回收了8C期的特异条带,通过再扩增、同收、克隆及酶切鉴定,克隆到了小鼠8C期胚胎差异表达的小鼠RP23—20A6基因。结果表明,所研究建立的单个冻胚银染mRNA差异显示方法具有可行性和有效性,可以用于动物早期胚胎基因表达的研究。     

胚泡植入的分子机理

胚泡植入是在各级因子组成的复杂网络系统调节下,胚泡与子宫内膜相互识别、定位、轴附和侵入,从而使胚泡成功地植入。目前的研究表明,许多活性分子参与胚胎植入的调节过程,而对细胞因子和生长因子及其受体的相互作用及整合素受体与其配体相互作用所引起信号转导的研究,将对揭示子宫内膜变化和胚泡植入的分子机理具有重要意义。     

Aroclor 1254对小鼠早期胚胎体外发育的影响

【目的】探讨了Aroclor 1254对小鼠2-细胞和8-细胞胚胎体外发育的影响。【方法】在体外培养的小鼠2-细胞和8-细胞胚胎培养液中,分别添加质量浓度为0.05,0.25,1.25和6.25μg/mL的Aroclor 1254,并设Aro-clor 1254溶剂(乙醇)对照组和空白对照组,比较不同质量浓度的Aroclor 1254对小鼠2-细胞和8-细胞胚胎体外发育的影响。【结果】0.05μg/mL Aroclor 1254影响2-细胞胚胎的孵化(57.7%),与溶剂对照组(66.7%)差异显著(P<0.05);0.25μg/mL Aroclor 1254组,2-细胞胚胎的囊胚发育率(72.5%)及囊胚孵化率(23.2%)与溶剂对照组(84.2%,66.7%)差异极显著(P<0.01);1.25μg/mL Aroclor 1254组,2-细胞胚胎发育到8-细胞阶段的比率(32.1%)极显著低于溶剂对照组(P<0.01);6.25μg/mL Aroclor 1254组,2-细胞胚胎发育到4-细胞和8-细胞阶段的比率(58.1%和29.6%)极显著低于溶剂对照组(P<0.01)。0.05μg/mL Aroclor 1254对8-细胞胚胎发育无明显影响;但当质量浓度提高到0.25μg/mL时,Arolor 1254显著影响8-细胞胚胎的孵化(64.7%,P<0.05);1.25μg/mLAroclor 1254组,8-细胞胚胎囊胚发育率(68.6%)及孵化率(25.5%)极显著低于溶剂对照组(92.4%,75.7%)(P<0.01);6.25μg/mL Aroclor 1254组8-细胞胚胎不能继续发育。【结论】Aroclor 1254对小鼠胚胎体外发育存在明显的剂量-毒性关系,随着培养液中Aroclor 1254质量浓度的增加,对小鼠早期胚胎的发育毒性表现越早;胚龄越小,毒性敏感性越强。     

程序化冷冻对小鼠胚胎发育的影响

取小鼠原核(220枚)、2～4细胞胚胎(227枚)、桑椹胚(127枚),将其分为3组,每一时期胚胎分成两半,一半取出后立即冷冻复苏并体外培养至囊胚,另一半体外培养至囊胚后冷冻复苏,子宫冲取囊胚(78枚)冷冻复苏为对照组;各组囊胚均移植至于宫,比较程序化冷冻对小鼠早期胚胎存活率的影响.结果表明:原核、2～4细胞胚胎、桑椹胚体外培养至囊胚后冷冻复苏率分别为56.4%、72.2%、81.6%,移植产仔率分别为38.1%、41.6%、56.8%,原核、2～4细胞组复苏率和产仔率极显著或显著低于对照组,桑椹胚组与对照组差异不显著,显示体外培养对早期胚胎冷冻存活有影响;原核、2～4细胞胚胎、桑椹胚冷冻后体外培养至囊胚,胚胎移植后产仔率分别为25.3%、28.2%、42.1%,与对应胚胎时期体外培养至囊胚冷冻复苏后移植产仔率相比,原核、2～4细胞组均存在显著差异,而桑椹胚组差异不显著,显示原核、2～4细胞的早期胚胎体外培养至囊胚后冷冻可提高冷冻存活率.     

DDRT-PCR技术在研究附植前胚胎基因表达中的应用

哺乳动物附植前胚胎的发育受相应基因的调控,在不同的发育阶段表达不同的差异基因,分离并克隆差异表达基因,有利于了解胚胎发育的分子机理.本文对mRNA差异显示技术(DDRT-PCR)的基本原理、特点,单胚差异显示技术(SPEDDRT-PCR)在研究动物特定发育阶段表达的基因的优点,以及对不同种类动物早期胚胎在特定发育阶段表达的基因进展情况作了介绍.