一种快速简便的植物病原真菌基因组DNA提取方法

 尿素提取法是最新报道的一种植物拟南芥基因组DNA的提取方法,但是还没有应用于植物病原真菌DNA的提取。本研究采用改进的4种不同的方法(尿素提取法、CTAB提取法、氯化苄提取法以及SDS-CTAB提取法),分别对5种分类地位不同的植物病原真菌(草莓疫霉病菌、西瓜蔓枯病菌、草莓炭疽病菌、西瓜枯萎病菌和水稻纹枯病菌)的基因组DNA进行提取和比较。结果表明,尿素提取法和SDS-CTAB法均能提取到所有5种真菌的基因组DNA,而尿素提取法提取DNA的效率更高、质量更好,操作步骤更为快速简单。     

小麦光腥黑粉菌冬孢子总DNA提取方法比较

以小麦光腥黑粉菌冬孢子为试验材料,比较分析了改良CTAB法、氯化苄法、SDS法对小麦光腥黑粉菌冬孢子总DNA提取的效果。结果表明,SDS法无论在DNA纯度(R=A260 nm/A280 nm)和产量上均优于氯化苄法和CTAB法。利用SDS法能获得186 ng/mg的DNA产率,而氯化苄法和CTAB法只能分别获得145 ng/mg和112 ng/mg。采用SDS法提取的DNA纯度较高,-RSDS=1.485,氯化苄法(BC)和CTAB法所得DNA纯度无明显差异,分别为-RCTAB=1.254和-RBC=1.264。     

野生稻、野燕麦、枸杞DNA的提取方法

采用CTAB法和2种经改进SDS法提取野生稻、野燕麦、枸杞总DNA。提取结果表明植物的种类不同,所适用的提取方法也有所不同。野生稻和野燕麦DNA提取较合适的方法为SDS-和CTAB法,枸杞DNA提取较合适的方法为SDS-法。     

菟丝子属5个种的种子DNA微量提取方法比较

本研究以Cuscuta属中5个种的种子为实验材料,分别采用CTAB、SDS、Moller与TaKaRaDNA提取试剂盒这4种方法提取DNA;并对不同方法所提取DNA的纯度、DNA质量浓度、DNA提取率进行比较分析。结果表明：用SDS的方法对Cuscuta属5个种的种子DNA的提取为最佳方法。     

Sorghum属7个近似种的DNA微量提取方法比较

本研究以Sorghum属中7个近似种的种子为试验材料,采用CTAB、SDS、CTAB与SDS相结合及TaKaRa DNA提取试剂盒等4种方法提取DNA,并对不同提取方法所获取的DNA纯度、浓度及DNA提取率进行研究分析比较.结果表明:采用Moller方法对其7个近似种的基因组DNA的提取为最佳方法.     

Sorhum属7个近似种的DNA微量提取方法比较

本研究以Sorghum属中7个近似种的种子为试验材料，采用CTAB、SDS、CTAB与SDS相结合及TakaRa dNA提取试剂盒等4种方法提取DNA，并对不同提取方法所获取的DNA纯度、浓度及DNA提取率进行研究分析比较。结果表明：采用Moiler方法对其7个近似种的基因组DNA的提取为最佳方法。     

法国野燕麦单粒种子DNA 快速提取方法的比较

本文以法国野燕麦作为材料,比较了CTAB、SDS、NaOH裂解3种方法提取单粒种子DNA的效果,根据核糖体DNA的PCR扩增结果,结合准确、快速和简便的原则,挑选出快速提取单粒种子DNA的方法,为杂草种子快速分子鉴定打下基础。     

柑橘黄龙病病原DNA微量提取方法比较

对比分析了3种黄龙病病原DNA微量提取方法,方法1和方法2分别采用Sandrine等人和Hung等人的黄龙病病原DNA提取方法,但取样量分别由100mg和250mg减少为20mg和10mg;方法3采用周常勇等人的微量核酸提取方法,取样量为10mg.实验结果表明:方法1提取的病原DNA浓度低、杂质多,PCR效果差;方法2提取的病原DNA浓度较高、杂质少,PCR效果好,但提取周期较长,不适合大批量样品的PCR快速检测;方法3提取的病原DNA浓度较高、杂质少,PCR效果好,且提取速度快,适宜大批量样品的PCR快速检测.     

蚜虫内共生菌基因组DNA提取方法的比较和优化

为探究蚜虫共生菌基因组DNA的提取方案,以桃蚜为试验材料,比较了目前较为常用的4种蚜虫基因组DNA提取方法,从DNA纯度、完整性、PCR扩增效率及稳定性等方面进行了比较和评价,并通过调整蛋白酶K用量和水浴温度及时间对STE法进行了优化。结果表明,4种方法提取的蚜虫共生菌基因组DNA均可用于共生菌的PCR扩增检测;CTAB法和SDS法提取的DNA纯度较高,条带较完整,稳定性相对较高,不易降解,而STE法和PCR缓冲液法操作简便,适于快速提取单头蚜虫共生菌的基因组DNA,但纯度相对较低;可根据试验条件和要求进行选择。STE法优化条件为:用30 μL STE缓冲液将蚜虫匀浆,加入1.5 μL 20 mg/mL蛋白酶K,于56 ℃水浴1.5 h;再加入0.1 μL 10 mg/L RNA酶,于37 ℃培养1 h,95 ℃下处理5 min,5 000 r/min离心3 min,将提取到的DNA于-20 ℃保存或直接用于PCR扩增。优化后的STE法可作为提取蚜虫共生菌基因组DNA经济而快捷有效的方法。     

河西走廊地区盐碱土壤微生物总DNA提取方法的比较

为了找出一种更适于河西走廊地区盐碱土壤微生物总DNA的提取方法,分别运用方法 1(Omega试剂盒法)、方法 2(Mo Bio试剂盒法)、方法 3(CTAB-SDS法)和方法 4(Ca Cl2-SDS-酶解法),对河西走廊盐碱土壤微生物总DNA的提取方法进行比较。4种方法所提取总DNA片段分子量大约在23.1 kb,完整性较好,无明显降解现象。但4种方法所提取DNA的量差异很大,其中方法 1和方法 2提取的DNA目的条带不清晰,但纯度较高;方法 3和方法 4所提取的DNA产量高于方法 1和方法 2,但方法 3提取的总DNA杂质较多,影响后续分析的准确性;而方法4所提取得DNA纯度基本与试剂盒法接近,DNA提取量可达到452.875μg·g-1,远远高于其他3种方法,能满足后续实验,是一种较理想的且适合于河西走廊盐碱土壤微生物多样性和种群结构的总DNA提取方法。