蟹源地衣芽孢杆菌ESB3对中华绒螯蟹生长及部分免疫指标的影响研究

以初始质量为11.40 g的中华绒螯蟹为研究对象,在室内半循环水系统进行为期60 d的饲养试验,研究饲料中添加蟹源地衣芽孢杆菌ESB3活菌、灭活菌对中华绒螯蟹生长及部分免疫指标的影响。以基础饲料为对照组,在基础饲料中添加来源于中华绒螯蟹肠道的地衣芽孢杆菌ESB3活菌(命名为低、中、高剂量组,实际剂量分别约为1.3×107 CFU/g、1.4×108 CFU/g、0.9×109 CFU/g)、灭活菌冻干粉(剂量约为108 CFU/g),配制5种饲料。试验结果表明,与对照组相比,中、低剂量活菌可显著提高增重率(P<0.05),高剂量活菌提高增重率,但差异不显著(P>0.05)。ESB3活菌可不同程度提高血细胞总数、血细胞呼吸爆发活性、酚氧化酶活性、溶菌酶活性、酸性磷酸酶和碱性磷酸酶活性,其中高剂量活菌效果最好。ESB3灭活菌仅能显著提高溶菌酶活性、酸性磷酸酶和碱性磷酸酶活性(P<0.05)。本试验条件下,ESB3活菌能明显提高中华绒螯蟹对嗜水气单胞菌的抵抗力。上述结果表明,蟹源地衣芽孢杆菌ESB3活菌对中华绒螯蟹的生长和免疫均有一定促进作用,但适宜剂量有差异;灭活菌单纯菌体刺激效果不明显。     

蟹源地衣芽孢杆菌培养条件的优化

以牛肉膏蛋白胨培养基为初始培养基,探讨了不同培养时间、初始pH值、温度、盐度(NaCl浓度)和转速对中华绒螯蟹源地衣芽孢杆菌ESB3生长的影响。结果表明:菌株ESB3产最大活菌数的培养条件为培养时间20h,初始pH为7.8,温度为30℃左右,盐度为1.5%(m/V),转速为190r/min。采用单因子试验和正交试验优化了种子培养基的组成,结果表明,最佳种子培养基:可溶性淀粉(2%)(m/V)、胰蛋白胨(2%)(m/V)、K2HPO4(0.3%)(m/V),此条件下菌株ESB3活菌数达11.09×108CFU/mL。     

枯草芽孢杆菌微胶囊制剂对中华绒螯蟹免疫机能及抗病力的影响

在基础饲料中分别添加0(对照)、1、5 g/kg的枯草芽孢杆茵海藻酸钠微胶囊冻干粉(活菌含量为2.2×1011 CFU/g),制成颗粒饲料后投喂中华绒螯蟹7 d,然后将两个试验组改投喂对照组饲料.在停喂试验组饲料后第0、1、2、3周,分别测定中华绒螯蟹血细胞呼吸爆发活性、血清酚氧化酶(PO)、溶茵酶(LSZ)和酸性磷酸酶(ACP)活性,并在停喂试验组饲料后第2周,以1.2×107 CFU/kg体重的剂量,体腔注射致病性嗜水气单胞菌CL99920菌株,记录接种10 d后中华绒螯蟹的累计死亡率.结果显示:在停喂试验组饲料后0周,5g /kg组的血细胞呼吸爆发活性显著高于对照组和1 g/kg组(P＜0.05);在多数采样时间点,5 g/kg组的血清PO和LSZ活性显著高于对照组(P＜0.05);在一些采样时间点.1 g/kg组的血清PO和LSZ活性也显著高于对照组(P＜0.05);两个试验组的血清ACP活性与对照组无显著差异(P＞0.05);试验组蟹对嗜水气单胞茵的抵抗力明显增强.本研究表明,饲喂5 g/kg饲料剂量的枯草芽孢杆茵微胶囊制剂可增强中华绒螯蟹的免疫力和抗病力.     

中华绒螯蟹点状产气单胞菌的分离鉴定与药敏试验

为确定诱发中华绒螯蟹肠炎的病原菌,筛选潜在的防控药物,采用传统方法从患肠炎的中华绒螯蟹体内分离到一株病原菌(DD5),通过API 20E细菌鉴定系统和16SrDNA序列分析对菌株DD5进行了鉴定,并采用KB纸片扩散法对菌株DD5的抗菌药物敏感性进行了测定。结果表明,菌株DD5为点状产气单胞菌(GenBank登录号:KP260655),其16SrDNA序列与基因库中气单胞菌属菌株的16SrDNA序列有99%~100%的同源性,而且与点状产气单胞菌136c株(GenBank登录号:EU488688)的亲缘关系最近。此外,菌株DD5对四环素、链霉素、卡那霉素、庆大霉素、恩诺沙星、氧氟沙星、左氟沙星、复方新诺明等抗菌药物高度敏感。本研究证实点状产气单胞菌是中华绒螯蟹肠炎的病原菌,恩诺沙星、庆大霉素等常规渔药可作为点状产气单胞菌引起的中华绒螯蟹肠炎的防控用药。     

嗜水气单胞菌微胶囊疫苗对中华绒螯蟹免疫机能的影响

以0(对照组)、1、3、6g/kg的剂量将嗜水气单胞菌海藻酸钠微胶囊冻干疫苗(菌含量为1.5×1012cfu/g)添加于基础饲料中投喂中华绒螯蟹7d,然后投喂对照组饲料。在停喂含疫苗的饲料后第0、1、2、3周,采样测定中华绒螯蟹血细胞呼吸爆发活性、血清超氧化物歧化酶(SOD)、酚氧化酶(PO)和溶菌酶(LSZ)活性,并在停喂含疫苗的饲料后第1周,以每千克体重1.2×107cfu的剂量,体腔注射致病性嗜水气单胞菌CL99920菌株,记录接种7d后中华绒螯蟹的累计死亡率。结果显示:在停喂含疫苗的饲料后第0周和第3周,6g/kg组的血细胞呼吸爆发活性显著增加(P<0.05);在一些采样时段,3个试验组的血清SOD、PO及LSZ活性分别显著上升(P<0.05)。各试验组的蟹对嗜水气单胞菌的抵抗力明显增强。由此说明,投喂试验剂量的嗜水气单胞菌微胶囊疫苗能增强中华绒螯蟹的免疫机能。综合本试验结果并考虑添加成本,建议在生产中使用3g/kg的添加剂量。     

皮质醇对中华绒螯蟹非特异性免疫的影响

分别以0(对照)、50、100和200 mg/kg体质量的剂量将皮质醇拌入基础饲料,制成颗粒饲料投喂中华绒螯蟹7d,在试验开始后第1天、第4天和第7天,分别采样测定中华绒螯蟹血清酚氧化酶(PO)、过氧化物酶(POD)、溶菌酶(LSZ)、碱性磷酸酶(AKP)和酸性磷酸酶(ACP)活性,并在试验开始后第7天,以0.2 CFU/kg体质量的剂量,体腔注射致病性嗜水气单胞菌CL99920菌株,记录接种7d后中华绒螯蟹的累计病死率.结果表明:对中华绒螯蟹饲喂50、100和200 mg/kg体质量剂量的皮质醇7d后,3个试验组的血清AKP活性显著高于对照组;100和200 mg/kg组的血清LSZ和ACP活性显著低于对照组,3个试验组的血清PO和POD活性亦显著低于对照组;嗜水气单胞菌攻毒后,3个试验组的病死率均高于对照组,以200 mg/kg组的病死率最高,高出对照组26.67％.     

海藻酸钠对中华绒螯蟹免疫功能及抗病力的影响

以每千克体重10、30和90mg的剂量对中华绒螯蟹(Eriocheirsinensis)体腔(即在第3或第4步足基节膜处)注射海藻酸钠,对照组注射等量的0.85%生理盐水,在注射开始之前(第0d)和注射后的第1、3、5、8d采集血淋巴液,测定中华绒螯蟹的血细胞总量(THC)、不同血细胞数量(DHC)、吞噬活性、呼吸暴发(超氧阴离子的释放)、酚氧化酶(PO)及溶菌酶(LSZ)活性;在注射海藻酸钠后第3d,按每千克体重1.2×107cfu的剂量,体腔注射接种中华绒螯蟹致病性嗜水气单胞菌(Aeromonashydrophi-la)CL99920菌株,记录接种7d后中华绒螯蟹的累积死亡率。结果显示,3个试验组的THC、大颗粒细胞(GC)数量、血细胞吞噬活性、呼吸暴发活性、PO活性和LSZ活性均显著地高于对照组(P<0.05);30mg/kg剂量组的透明细胞(HC)和小颗粒细胞(SGC)数量与对照组也有显著差异(P<0.05);海藻酸钠处理组的蟹对嗜水气单胞菌的抵抗力明显增强。因此,体腔注射适量的海藻酸钠可增强中华绒螯蟹的免疫力和抗病力。     

恩诺沙星对中华绒螯蟹非特异性免疫的影响

分别以0(对照)、50、100和200 mg/kg体质量的剂量将恩诺沙星拌入基础饲料,制成颗粒饲料投喂中华绒螯蟹7 d,在试验开始后第1、第4和第7天,分别采样测定中华绒螯蟹血清过氧化物酶(POD)、溶菌酶(LSZ)、碱性磷酸酶(AKP)和酸性磷酸酶(ACP)活性,并在试验开始后第7天,以0.2亿CFU/kg体质量的剂量,体腔注射致病性嗜水气单胞菌CL99920菌株,记录接种7 d后中华绒鳌蟹的累计病死率。结果表明:50 mg/kg组中华绒螯蟹在大多数采样时间点的血清POD、LSZ、AKP和ACP活性显著高于对照组;100 mg/kg组中华绒螯蟹的血清POD、LSZ及ACP活性,200 mg/kg组的POD、LSZ、AKP及ACP活性均呈现先促进后抑制的转变,其中,200 mg/kg组在试验开始后第7天,上述4个免疫指标活性均显著低于对照组;嗜水气单胞菌攻毒后50 mg/kg组的病死率低于对照组,100和200 mg/kg组的病死率均高于对照组,其中,200 mg/kg组的病死率高于对照组20%。     

枯草芽孢杆菌对三种水产动物病原菌体外拮抗作用的研究

为探明枯草芽孢杆菌BHI344菌株对水产养殖动物病害的生物防治功能,本文采用枯草芽孢杆菌与病原菌共同培养的方法,就枯草芽孢杆菌对三种水产动物病原菌(嗜水气单胞菌、温和气单胞菌、豚鼠气单胞菌)的体外拮抗作用进行了研究。结果表明:枯草芽孢杆菌BHI344菌株对三种水产动物病原菌都存在明显的拮抗作用,并随着枯草芽孢杆菌初始接种浓度的升高,以及培养时间的增长,拮抗作用越明显。     

饵料中不同淀粉水平对中华绒螯蟹消化酶活力的影响

试验旨在探究中华绒螯蟹肝胰脏和肠道中消化酶最适温度和pH值,研究饵料中小麦淀粉水平对中华绒螯蟹消化酶比活力的影响.选择平均体重为(10.0±0.1)g的中华绒螯蟹300只,随机分为5组,每组3个重复.各组中华绒螯蟹分别投喂小麦淀粉水平为12.0％、17.0％、22.0％、27.0％、32.0％的配合饵料.试验期60 d...