兔抗褪黑激素高免血清的制备,提取和纯化

运用Ｍａｎｎｉｃｈ法,将褪黑激素（ＭＬＴ）与牛血清白蛋白（ＢＳＡ）偶联制备成完全抗原。经ＵＶ－２６０紫外分光光度仪测定,ＭＬＴ与ＢＳＡ的连接比为１２：１。５只新西兰大耳兔用此抗原免疫６次后,ＥＬＩＳＡ和ＲＩＡ抗体效价分别平均１：１４０００和１：１５００００。     

兔化高免褪黑激素抗血清的制备

运用Ｍａｎｎｉｃｈ反应,将褪黑激素与ＢＳＡ联结起来制备完全抗原,用ＵＶ－２６０紫外仪测定了ＭＬＴ与ＢＳＡ的联结比为１２：１,用此抗原免疫新西兰大耳兔５只,经过６次免疫后,发现抗体效价平均１：１００００（ＥＬＩＳＡ）,将抗血清经Ｎａ２ＳＯ４沉淀,Ｓｅｐｈａｄｅｘ－Ｇ－２００过柱层析、收集纯化抗体,用分光光度计７２１ 春蛋白浓度,经５－羟色胺等阻断试验发现抗体特异性较高。     

抗兔病毒性出血症高免血清的制备和使用

1984年春,在我省苏南部分市、县暴发了一种侵袭2月龄以上兔的烈性传染病——兔病毒性出血症。至同年12月该病已波及江苏全省。上海、浙江、山东、安徽、河南等省、市的部分市、县也发现此病。该病传播迅速,流行面广,病程短,发病率和死亡率均很高,试用多种药物治疗均不奏效,用高免血清在病初有较好的治疗效果,在疫区作被动免疫,具有保护作用,可减少损失。本文就高免血清的制备和使用效果作一介绍。     

兔抗孕酮抗体的制备及纯化

以１１α－羟孕酮半琥珀酸酯为原料，采用混合酸酐法合成了１１α－羟孕酮半琥珀酰－人血清白蛋白结合物。两批合成的产率分别为８７．３８％和６４．８８％；孕酮与人血清白蛋白的分子结合比率为１８：１和２３：１，达到Ｓｉｇｍａ同类产品标准。     

兔抗猪瘟高免血清的制备及纯度鉴定

利用猪瘟弱毒疫苗(C株)免疫新西兰大白兔,制备抗猪瘟高免血清IgG。运用间接ELISA方法测血清效价,再经饱和硫酸铵盐析沉淀法提纯血清IgG,SDS-PAGE电泳法鉴定提纯IgG的纯度,结合无菌检查试验和仔猪接种试验,检测血清IgG的安全性。结果表明,获得了蛋白含量为6 mg/mL,效价为1∶6400的高效价、安全性高、成本低的抗猪瘟高免血清IgG。为猪瘟病毒的检测和猪瘟的防制提供了理想的生物制剂。     

几种不同免疫程序制备抗弓形虫高免血清的比较

用弓形虫血清抗体阴性的健康家兔,以4种不同的免疫程序皮下接种弓形虫速殖子裂解抗原制备高免血清.研究结果表明,先以完全弗氏佐剂和不完全弗氏佐剂分别进行一免和二免,然后再以抗原进行三免或四免制备高免血清,其抗体效价高达1:4096(IHA),与每次都使用抗原的传统免疫程序制备的抗体效价相当,但所用抗原剂量减半,该法优于另外2种免疫程序.     

兔抗小麦钙调素抗血清的制备及其纯化

为制备兔抗小麦钙调素抗血清并对其进行纯化,首先从小麦叶片中提取钙调素蛋白,对其初步纯化后免疫家兔,制备得到兔抗小麦钙调素抗血清,再以大肠杆菌中诱导表达的拟南芥钙调素蛋白作为抗原,利用PVDF膜结合法纯化得到了兔抗小麦钙调素抗血清,并通过Western Blotting对所纯化的多克隆抗体进行了鉴定。     

貉抗犬瘟热病毒高免血清的制备

在貉饲养场打皮前期,采用犬瘟热弱毒苗对貉群进行3次加强免疫。打皮时同时采血和分离血清,使用双抗和过滤方法对血清进行除菌处理后冷冻保存备用。以中和试验来检测血清中的犬瘟热病毒中和抗体效价,并对所制备的高免血清进行无菌检验和安全试验。结果表明:加强免疫组血清中犬瘟热中和抗体效价1∶102.53±0.16,而对照组的抗体效价为1∶101.61±0.12;无菌检验未发现血清有任何细菌,安全试验显示皮下注射的幼貉没有任何明显的不良反应。     

抗猪瘟高免卵黄抗体的制备

猪瘟是由猪瘟病毒引起的一种急性、热性、高度接触性传染病。近年来,在养猪生产中尽管普遍对猪群用猪瘟兔化弱毒苗进行免疫接种,但免疫失败的现象时有发生,给养猪业造成了很大的经济损失。为了找到一个治疗猪瘟的经济有效方法,我们进行了抗猪瘟高免卵黄的制备。1材料与方法1·1试验动物186日龄罗曼商品蛋鸡,杜洛克仔猪均由郑州牧业工程高等专科学校微生物学教研室提供。1·2疫苗及毒株猪瘟兔化弱毒苗购自农业部郑州生物药品厂;石门系猪瘟强毒购自中国兽药监察所。1·3免疫方法1·3·1基础免疫对罗曼商品蛋鸡进行免疫,第一次每羽肌注猪瘟兔化…     

抗重金属镉多克隆抗体的制备及纯化

镉是生物毒性最强的重金属之一,动物性食品中的重金属镉残留给人类健康带来了巨大危害,建立高效、快速的重金属镉免疫学检测技术对保障食品安全和人类健康具有十分重要的意义。本研究运用双功能螯合剂DTPA、镉离子标准溶液和牛血清白蛋白(BSA)制备重金属镉的完全抗原Cd-DTPA-BSA,以其为免疫抗原加入弗氏佐剂乳化后免疫家兔,制备抗重金属镉多克隆抗体,并运用凝胶柱层析法纯化抗重金属镉多克隆抗体,SDS-PAGE结果显示多克隆抗体的纯化效果较好,Dot-ELISA测定纯化后多克隆抗体的效价达到1∶1 600。该研究为动物性食品中重金属铅ELISA检测方法的建立奠定了基础。     

脱落酸结合蛋白的纯化及抗体制备

以脱落酸（ＡＢＡ）为配基，分别通过其Ｃ１位和Ｃ４位偶联的亲和层析对玉米根尖中的膜ＡＢＡ结合蛋白（ＡＢＢＰ）进行了纯化，其中，用Ｃ１偶联的亲和柱具较高的纯化效率，对比了以尿素和硫氰化钾（ＫＳＣＮ）为解吸附剂的洗脱效果，发现使用后者（３ｍｏｌ／Ｌ）能得到纯净的ＡＢＢＰ；放射性配合结合分析（ＲＬＢＡ）结果表明，经过亲和纯化后的ＡＢＢＰ具有受体的基本特性－专一结合ＡＢＡ的能力，以Ｃ１－ＡＢＢＰ和Ｃ４－ＡＢ     

抗鸡传染性法氏囊病毒单克隆抗体的提纯和鉴定

取抗鸡传染性法氏囊病毒单克隆抗体．经饱和硫酸铵盐析，透析除盐、葡聚糖凝胶过滤粗提后，经ＤＥＡＥ—２２纤维素离子交换层析，获得纯化的单抗，ＥＬＩＳＡ效价达１０（－６）以上．双向琼扩效价达１：６４以上；抗体回收率达６０％以上；最高浓度达１．２ｍｇ／ｍｌ．经抗鼠全血清双向琼扩结果证明所提取物为纯一的ＩｇＧ．     

鸡抗TMV的I_gY抗体的制备和血清学试验

从烟草花叶病毒(TMV)免疫母鸡的蛋黄中提取免疫球蛋白I_gY。试验结果表明,免疫后10天,抗体就达较高滴度(1:1024)。停止免疫后14个月,滴度仍保持在1:64。在琼脂糖凝胶扩散试验中,当PH7.0,NaCl浓度为3.5—5%时,可获得最理想沉淀线。以碱性磷酸酶(AKP)标记抗体I_gY成功地检测出了TMV。用一种病毒免疫兔和母鸡可取得两种抗体(I_gG和I_gY),必将有助于间接酶标的研究。     

用PPA-ELISA等5种方法检测布病抗体敏感性

以布病S_2苗免疫猪,7,21和35天采血,血清457份。以4种常规方法检测,RBPT和SAT两法的检出率高于其他方法。血清置-80℃冰箱冻存2个月后,取84份,用PPA-ELISA及4种常规方法检测,SAT的阳性率为90.5％,高于其他方法,差异显著(P<0.05)。PPA-ELISA和RBPT分别居第2位(87.2％)和第3位(85.7％)。PAT和CFT阳性率最低。检出抗体滴度比较,SAT高于PPA-ELISA,而后者又高于PAT。SAT、PPA-ELISA和RBPT三者之间符合率均较高(88％)。PPA,ELISA检测猪布病免疫抗体的敏感性低于SAT而高于其他方法。本文还探讨了5种方法的优缺点。     

伊氏锥虫单克隆抗体制备及性质研究

本研究运用杂交瘤技术成功地分离了B_8、I_2两株分泌抗伊氏锥虫单克隆抗体(McAb)的细胞系。首先用可溶性伊氏锥虫抗原接种BALB/C小鼠,经过一定的免疫程序后,取其脾细胞与SP2/O骨髓瘤细胞融合,经过两次有限稀释法克隆,用ELISA方法选育出B_8、I_2两株产生抗伊氏锥虫McAb的细胞株。用琼脂扩散法与标准羊抗鼠亚类血清反应证明两种McAbs皆隶属于IgG_1亚类。细胞株在连续传代及冻存复苏后其分泌抗体能力稳定;经多种血清学反应证实,这两株McAb与伊氏锥虫可溶性抗原不起凝集反应,只有ELISA反应阳性。pH稳定试验表明,B_8株McAb比I_2株稳定。     

布氏杆菌单克隆抗独特型抗体细胞株建立及免疫原性测定

在建立了布氏杆菌单克隆抗体细胞株的基础上,筛选具有强保护作用的单抗细胞株A7免疫BALB/C鼠,并进行细胞融合.用竞争抑制ELISA法筛选出5个强阳性孔,经克隆化培养后首次建立了9个布氏杆菌单克隆抗独特型抗体细胞株.其中,F9株传25代后及液氮冻存复苏后仍能稳定地产生高效价的抗独特型抗体.其IgG类型鉴定为IgG2a,并证实具有抗原“内影象”.以鼠红细胞为载体将抗独特型抗体吸附其表面进行小鼠免疫试验,检测结果表明该抗独特型抗体具有良好的免疫原性,能诱导免疫小鼠产生相当效价抗布氏杆菌抗体(Ab3).     

抗日本血吸虫单克隆抗体的建立及特性测定

 用感染日本血吸虫尾蚴的小鼠脾脏，制备单克隆抗体（McAb），获得24株抗日本血吸虫单抗，选择12株进行Ig亚型测定，对血吸虫抗原敏感性和特异性的测定，组织定位，免疫印迹，体外ADCC对血吸虫童虫的杀伤效应和体内被动免疫转移试验等方面的研究。其中一株IgM单抗在Balb/c小鼠体内诱导了38.41%的减虫率；另一株IgG#-1单抗在昆明系小鼠体内诱导了32.23%的减虫率，并观察到有抑制宿主肝脏肉芽肿形成的现象。     

猪痢疾密螺旋体水相抗原的提取及鉴定

本试验应用热水酚法提取了猪痢疾密螺旋体菌壁的水相抗原，并用琼扩法、火箭电泳法以及被动血凝法测定了该抗原的特异性。结果表明，该抗原能特异性地与兔抗猪痢疾密螺旋体的抗血清和单克隆抗体６Ｈ结合，而与抗非致病性密螺旋体抗血清不发生反应。