左旋咪唑对金黄色葡萄球菌粘附素 ClfA重组 DNA 疫苗免疫效果的影响

为了探究左旋咪唑（LMS）作为免疫增强剂对金黄色葡萄球菌粘附素 ClfA 重组 DNA 疫苗免疫效果的影响.分别用含左旋咪唑的 ClfA 重组 DNA 疫苗、ClfA 重组 DNA 疫苗及空载体免疫昆明白小鼠,通过巨噬细胞吞噬试验、MTT 实验、免疫血清对金黄色葡萄球菌识别能力、酶联免疫吸附试验和攻毒试验验证免疫效果.结果表明,含左旋咪唑 DNA 疫苗组在巨噬细胞吞噬指数、脾脏淋巴细胞增殖、免疫血清对金黄色葡萄球菌识别能力方面有增强作用,与其他两组相比差异显著（P ＜0．05）,含左旋咪唑 DNA 疫苗组小鼠抗体水平及攻毒实验保护率高于单独 ClfA 重组 DNA 组和空载对照组,LMS 能够对 ClfA 重组 DNA 疫苗免疫效果起到增强作用.     

溶藻弧菌疫苗对黑鲷的免疫效果研究

用溶藻弧菌1.1587制备全细胞、全细胞 弗氏完全佐剂(FCA)、脂多糖(LPS)3种疫苗,疫苗经腹腔对黑鲷进行免疫注射,分别在第7、14、28、56 d采鱼血,检测抗体效价、白细胞吞噬活力、溶菌酶活力、SOD活力和抗菌活力;第28 d用5.5×108 cfu/mL的溶藻弧菌悬液进行攻毒试验来比较疫苗的免疫效果. 结果表明:抗体凝集效价在28 d达到最高值,免疫组2显著高于免疫组1和免疫组3(P《0.05);白细胞吞噬百分数和吞噬指数28 d达到最高值,3个免疫组都显著高于对照组(P《0.05);免疫组1和免疫组2溶菌酶活力在28 d达到最高值,显著高于对照组(P《0.05);SOD活力在28 d达到最高值,免疫组1和免疫组2显著高于对照组(P《0.05). 3种疫苗对黑鲷攻毒后20 d的免疫保护率分别为71.4%、85.7%、71.4%. 全细胞-FCA疫苗对黑鲷的免疫效果最好.     

免疫增强剂提高禽流感疫苗效力的研究

为评价免疫增强剂(VA5)对鸡的免疫效力,将不同剂量免疫增强剂与H9禽流感抗原混合后制备疫苗,评价对SPF鸡的免疫效力。根据筛选结果,将最适剂量的免疫增强剂与H9禽流感抗原以共同混合的形式配制疫苗,并将免疫增强剂以伴侣形式与H5或H9禽流感疫苗混匀免疫商品鸡,评价免疫增强效果。结果表明,免疫增强剂与H9疫苗共同混匀,或将免疫增强剂制备成疫苗伴侣形式与H5或H9商品疫苗共同混合免疫商品鸡,均能使H5或H9疫苗免疫后抗体提前1周达到7lg2,免疫后2~3周抗体效价显著高于不含免疫增强剂的常规疫苗组。该免疫增强剂能提高H5和H9亚型禽流感疫苗对鸡的免疫效力,具有较好的应用前景。     

重组金黄色葡萄球菌FnbpA亚单位疫苗的研制

【目的】制备金黄色葡萄球菌纤连蛋白结合蛋白A(FnbpA)基因工程亚单位疫苗,并以小白鼠为试验模型,检测其免疫保护效果。【方法】诱导表达FnbpA,经组氨酸标签亲合纯化后用Bradford法测定纯化的目的蛋白的含量,并检测其黏附活性及对动物的安全性。制备FnbpA亚单位疫苗,经无菌检验及安全检验后,进行免疫保护试验,用ELISA方法检测被免疫小鼠血清中的抗体效价,通过腹腔攻毒试验检测疫苗的免疫保护力。【结果】纯化的目的蛋白在80 ku处出现单一条带,蛋白质量浓度为0.245 mg/mL。细菌黏附抑制试验发现,经FnbpA蛋白预处理过的MDBK细胞黏附的金黄色葡萄球菌数较对照极显著减少;动物安全性试验显示,小鼠注射FnbpA亚单位疫苗后均健活,表明制备的FnbpA亚单位疫苗安全性良好。所有免疫组小鼠于首免后7 d即可在血清中检测到特异性抗体,抗体效价逐渐上升,在21 d达到最高值,之后逐渐降低。【结论】纯化的FnbpA蛋白达到了电泳级纯度,且依然保持良好的黏附活性;制备的FnbpA亚单位疫苗作用机体产生的抗体水平符合抗体消长规律,且表现出良好的免疫保护力。     

鱼肠道弧菌疫苗制备及免疫保护效果

本文比较了不同灭活剂及灭活条件对鱼肠道弧菌（Vibrio ichthyoenteri）的灭活效果,确定以0.4%（v/v）福尔马林溶液在25℃下处理30h作为疫苗的最佳灭活条件,用灭活的鱼肠道弧菌疫苗免疫大菱鲆并测定了该疫苗针对鱼肠道弧菌、溶藻弧菌（Vibrio alginolyticus）、副溶血弧菌（Vibrio prarhaemolyticus）、鳗弧菌（Vibrio anguillarium）等的免疫保护力,结果表明,采用注射免疫方式接种后,针对鱼肠道弧菌的免疫保护率达75%;溶藻弧菌免疫保护率为67.6%;鳗弧菌免疫保护率为50%;副溶血弧菌免疫保护率为57.2%;采用浸浴免疫方式接种后,疫苗针对鱼肠道弧菌、溶藻弧菌、鳗弧菌、副溶血弧菌的免疫保护力分别为25%、22.3％、11.1%、12.5%。     

863课题介绍

正课题名称:新型重大动物疫病疫苗与诊断试剂创制及生产工艺创新课题编号:2011AA10A213课题内容、目标:本课题主要任务目标为研发即用型佐剂,应用于口蹄疫疫苗,降低免疫副反应,提高免疫效力;研发活疫苗免疫增强剂,应用于猪瘟弱毒疫苗,提高免疫后抗体阳转率;研发灭活疫苗免疫增强剂,应用于禽流感疫苗,提高抗体滴度和交叉保护力。     

草鱼出血病细胞培养灭活疫苗大规模生产工艺研究

本项研究对草鱼出血病病毒的理化、生物学及基因组特性、病毒和细胞的大规模培养条件、疫苗免疫保护力、增效措施、保存期及免疫保护时效,制订了草鱼出血病细胞培养灭活疫苗的制备和检验规程,建立了旋转瓶法大规模生产草鱼细胞疫苗的生产工艺,建成了年生产能力约100万ml的疫苗车间.     

姜黄素肠道修复剂对鸡球虫病疫苗免疫效果的影响

球虫疫苗免疫时期使用姜黄素肠道修复剂,观察鸡群免疫后21d攻虫保护效果,并对比阳性对照组、未添加姜黄素和空白对照组鸡群的免疫效果。结果添加姜黄素肠道修复剂组肠道病变记分和粪便记分低于未添加组,显示添加姜黄素肠道修复剂组鸡群相对增重高于未添加组鸡群,相对增重数据差异无统计学意义。试验结果表明,姜黄素肠道修复剂可辅助球虫面议疫苗,修复受损肠道。     

滴鼻免疫布氏菌活疫苗保护效果的研究

为评价布氏疫苗通过滴鼻方式免疫豚鼠的免疫保护效果,将60只豚鼠随机分为3组,滴鼻免疫布氏菌活疫苗,免疫30 d后进行心脏采血,制备肺泡灌洗液以及鼻腔灌洗液。ELISA法检测免疫动物血清中IgG抗体和免疫动物肺泡灌洗液、鼻腔灌洗液中IgG、IgA抗体;通过迟发型皮肤超敏实验进行体内细胞免疫评价;用羊布氏菌弱毒株M5经皮下和滴鼻两种途径攻击免疫动物,通过脾脏细菌计数评价布氏菌活疫苗的主动免疫保护力。取40只小鼠随机分为8组,将豚鼠免疫血清对小鼠进行腹腔注射,2 h后皮下攻击M5羊布氏菌弱毒株,通过脾脏细菌计数评价免疫血清的被动免疫保护力。用ELISA法检测到经布氏活疫苗免疫的豚鼠体内有特异性抗体产生;疫苗免疫动物对Br PPD抗原迟发型超敏反应（DTH）阳转率均为100％;通过布氏菌活疫苗保护力分析,表明该疫苗的主动免疫以及免疫血清的被动免疫都具有较好的保护效果。布氏菌活疫苗采用滴鼻方式免疫豚鼠,免疫后能获得较好的免疫保护效果。     

含日本血吸虫可溶性抗原及重组GST的免疫刺激复合物对小鼠的免疫试验

免疫刺激复合物(ISCOM)是 Morein 创立的一种疫苗免疫载体,其中的主要佐剂成分是 Quil A(皂素的一种成分).本研究首先用日本血吸虫中国大陆株成虫可溶性租抗原(SWA)作为免疫抗原,按改进方法结合皂素制备 ISCOM,对其在小鼠体内诱导的免疫保护力和 SWA 在 FCA/FIA、蜂胶二种佐剂条件下的免疫保护力进行了比较研究,然后对不同剂量 SWA-ISCOM 的免疫效果进行考察;最后对重组日本血吸虫中国大陆株28kD GST(rSj28GST)-ISCOM 在小鼠体内所诱导的免疫保护力进行观察.结果表明 IS-COM 在进一步应用于各种基因工程苗方面有研究价值。     

超声波与渗透调节处理对油松种子萌发的影响

通过正交试验设计（L₉3⁴）,研究了超声波和渗透调节处理对油松Pinus tabulaeformis种子萌发和萌发前期物质代谢的影响。结果表明：聚乙二醇（PEG）渗透调节和超声波处理会对油松种子萌发和萌发前期物质代谢产生一定的影响,但具体影响效果不同。PEG促进种子萌发的作用随着溶液质量分数的增大而增强,其中质量分数为20%PEG溶液对油松种子萌发具有显著促进作用,并显著促进种子萌发前期可溶性糖和可溶性蛋白质质量分数的增加。59 kHz超声波处理油松种子10 min,可显著提高种子发芽率和发芽指数,同时加速种子萌发前期淀粉的分解,并提高可溶性蛋白的质量分数。超声波和PEG渗透调节处理油松种子最佳组合为质量分数为20%PEG溶液浸种24 h,然后经59 kHz超声波处理10 min。表3参17     

不同处理对朝鲜白头翁种子萌发的影响

以朝鲜白头翁种子为材料,测定其基本特征和吸水特性,研究GA3、PEG6000浸种和超声处理对其种子萌发的影响.结果表明,朝鲜白头翁种子具有快速吸水的生物学特性,入水后1 h的吸水量可达最大吸水量的61.09%;适宜的GA3、PEG6000浸种以及超声处理均可以显著提高朝鲜白头翁种子发芽率和出苗率,100 mg·L-1GA3浸种12 h、10%～30% PEG6000浸种12 h和40℃条件下80 W超声波处理20 min,3种前处理萌发出苗效果最好,其出苗率可分别达到48.33%、52.00%和55.67%.赤霉素GA3操作简单易行,成本低,适合生产采用.     

猪传染性胃肠炎转移因子的制备及其特性研究

用猪传染性胃肠炎弱毒疫苗分两次接种猪,取其脾脏制备特异性猪传染性胃肠炎转移因子（ＴＧＥ－ＴＦ）,生化试验结果表明,ＴＥＧ－ＴＦ是由核苷酸、多肽组成的小分子物质,能非特异性地增强小鼠吞噬细胞的吞噬功能。     

乳酸菌株植物乳杆菌和粪链球菌对肉鸡免疫性能的影响

将植物乳杆菌和粪链球菌2株乳酸菌分别添加到肉鸡饲料中,通过检测免疫器官指数、胸腺和脾脏的T细胞百分数、白细胞吞噬率、红细胞花环率、血清中新城疫(ND)血凝抑制(HI)抗体效价等指标,探讨了乳酸菌对肉鸡免疫性能的影响.结果表明,2株乳酸菌均能够促进肉鸡胸腺、脾脏和法氏囊的发育,增强白细胞的吞噬功能,增加胸腺和脾脏中的T细胞数,提高E-C3bR和E-ICR的花环形成率,以及提高机体产生ND疫苗HI抗体的水平.     

DNA疫苗浸泡免疫预防鳜鱼传染性脾肾坏死病毒

以ISKNV MCP基因为目的基因,克隆到真核表达质粒pcDNA3.1(+)中,构建成DNA疫苗pcMCP,对鳜鱼(Siniperca chuatsi)pcMCP DNA疫苗进行浸泡免疫效果研究。结果表明,pcMCP DNA疫苗能够刺激免疫系统,对非特异性免疫和Ig M的表达都具有激活作用。免疫后血液中白细胞含量、白细胞吞噬能力和SOD活力都显著提高,14 d时均达到最大。IgM和Mx基因的mRNA表达研究显示,72 h大量表达,96 h达到最大,分别是对照组的3.05倍和2.02倍。攻毒试验显示,浸泡免疫能够有效保护ISKNV感染的鳜鱼,在第11天,浸泡免疫组的累计死亡率仅为40%,而对照组死亡率都达到了100%,pcMCP浸泡免疫降低了ISKNV感染的鳜鱼死亡率。     

A synthetic conjugate polysaccharide vaccine against Haemophilus influenzae type b

Glycoconjugate vaccines provide effective prophylaxis against bacterial infections. To date, however, no commercial vaccine has been available in which the key carbohydrate antigens are produced synthetically. We describe the large-scale synthesis, pharmaceutical development, and clinical evaluation of a conjugate vaccine composed of a synthetic capsular polysaccharide antigen of Haemophilus influenzae type b (Hib). The vaccine was evaluated in clinical trials in Cuba and showed long-term protective antibody titers that compared favorably to licensed products prepared with the Hib polysaccharide extracted from bacteria. This demonstrates that access to synthetic complex carbohydrate-based vaccines is feasible and provides a basis for further development of similar approaches for other human pathogens.     

兔出血症病毒主要结构多肽的纯化及免疫保护性试验

人工感染ＲＨＤＶ－ＮＪ株病死兔肝经－５０℃反复冻融,氯仿处理,ＰＥＧ沉淀、差速离心,Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ－４Ｂ柱层析得纯化病毒,纯化ＲＨＤＶ经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、ＣｕＣｌ２负染色后,切取主要结构多肽ＶＰ１（６４．５ＫＤ）凝胶带,除去ＣｕＣｌ２和ＳＤＳ获得ＶＰ１,高效液相色谱鉴定只有一个蛋白峰,Ｗｅｓｔｅｒｎ－Ｂｌｏｔｔｉｎｇ,ＨＡ和ＨＩ结果显示纯化ＶＰ１具有良好的抗原表位稳定性。无母源抗体的３月龄兔１     

鸡外周血白细胞吞噬试验的研究

[目的]确定鸡外周血白细胞吞噬葡萄球菌的最佳条件。[方法]使用葡萄球菌10145为吞噬材料,以瑞士染色法检测鸡外周血白细胞的吞噬活性。通过正交试验研究吞噬时间、吞噬温度、葡萄球菌浓度对外周血白细胞吞噬百分率(PP)和吞噬指数(PI)的影响,并对其进行形态观察。[结果]细菌浓度是影响白细胞吞噬指数的主要因素,白细胞吞噬指数最高的条件为:温度41℃,时间40 min,菌液浓度为5×106个/ml。各因素对白细胞吞噬指数的影响程度为:细菌浓度>时间>温度。[结论]该研究为白细胞吞噬功能的检测提供了一种较为简便、可靠的方法。     

从中药方剂中提取的复合多糖对雏鸡免疫功能的影响

 480只7日龄健康罗曼雏鸡随机分为4组，每组120只。分别于8日龄注射中药复合多糖加环磷酰胺、中药复合多糖、环磷酰胺、生理盐水。分别在试验前、试验后第8、13、21、29、37天采血（每组15只）并涂片，测定淋巴细胞百分率及ANAE+ 淋巴细胞百分率；分别在用药前和停药后采血（每组12只）测定中性粒细胞吞噬力；分别在鸡18、25、32日龄（每组12只）测定腹腔巨噬细胞的吞噬功能；分别在NDⅡ系疫苗首免后7、14、21 d，二免后7、14、28 d采血（每组15只）分离血清，测定ND-HI抗体效价；分别在鸡4、6、9周龄（每组12只）时，测定法氏囊、胸腺、脾的重量；分别在用药前和停药后第4、8天采血（每组15只）测定红细胞免疫功能。试验结果表明：中药复合多糖可使淋巴细胞百分率和ANAE+ 淋巴细胞百分率、外周血中性粒细胞吞噬率和吞噬指数、腹腔巨噬细胞吞噬率和吞噬指数、首免和二免后ND-HI抗体效价、法氏囊和胸腺及脾重量、红细胞-C3b 花环率和红细胞-IC花环率明显升高。环磷酰胺可使上述指标明显下降，中药复合多糖加环磷酰胺组与环磷酰胺组之间上述指标差异显著，中药复合多糖加环磷酰胺组，上述指标接近或略高于生理盐水对照组。     

聚乙二醇模拟水分胁迫对桑树种子萌发和生理的影响

以丰驰桑种子为材料,研究了不同浓度(0、1.0、2.5、5.0、7.5、10.0 g/L)的聚乙二醇-6 000(PEG-6 000)模拟干旱处理对桑树种子发芽和生理的影响。结果表明:用1%PEG处理后,种子的平均发芽速度、发芽率和发芽势较对照高;其他处理随胁迫强度的增加呈现明显下降趋势(均低于对照)。10%PEG处理的种子在试验开始第5天后仍未萌发。随胁迫加重脯氨酸含量先降低后升高;而可溶性蛋白和可溶性糖含量随胁迫加重呈上升趋势。