沟纹硬皮地蛛粗毒的多肽成分初探

通过高效液相色谱结合MALDI-TOF-TOF质谱对沟纹硬皮地蛛粗毒所含多肽成分进行分离和鉴定.从沟纹硬皮地蛛粗毒中一共鉴定到105种毒素多肽.大多数毒素多肽的分子质量分布范围在1 000~3 500 u(占总数84.8%),还有一部分毒素多肽的分子质量分布范围在3 500~4 500和6 500~8 500 u.与其他蜘蛛种类比较,沟纹硬皮地蛛毒素多肽的分子质量分布特征均不相同,这体现了地蛛科蜘蛛毒液成分的特异性.     

雄性中华狼蛛毒素多肽的分离及鉴定

采用反向高效液相色谱对雄性中华狼蛛粗毒进行分离,再用MALDI–TOF–TOF质谱进行相对分子质量测定。结果表明:从雄性中华狼蛛粗毒中一共鉴定到195种毒素多肽组分,这些毒素多肽的相对分子质量为1 000~10 000,其中大多数多肽的相对分子质量为1 000~3 500和4 500~7 500。这些毒素多肽的相对分子质量的分布特征与已报道的其他蜘蛛的不同,这可能是因为不同种类蜘蛛的毒素成分具有不同的多样性特点。     

蜘蛛毒素医学相关生物学活性的研究进展

蜘蛛种类繁多且多数蜘蛛能够分泌毒液.蜘蛛毒液中含有丰富的蛋白质多肽并具有复杂的生物学活性.近年来,由蜘蛛毒液分离纯化出的蛋白质多肽成分日益增多,且这些生物学活性成分具有极好的药物开发价值及应用前景.该文对蜘蛛毒素的生物学活性及其机制进行了综述.     

海葵多肽类神经毒素的结构与药理学功能

海葵以其触手刺细胞中的毒液行使捕食和防御功能,其毒液中富含各种多肽类神经毒素,分子量为3—7kDa之间,分子序列中含多对二硫键以稳定其结构。海葵神经毒素以钠离子通道毒素和钾离子通道毒素为其主要成分,此外还发现有作用于其他离子通道的成分,此外,还有部分海葵毒素目前尚不清楚其分子靶标。不同类型的海葵毒素具有不同的空间结构。海葵毒素多肽的分子多样性使其成为动物毒素研究的一个重要分支,同时海葵多肽毒素对不同离子通道的特异性和高亲和性,使得它们成为神经生理学和药理学研究的一种重要工具。     

家福捕鸟蛛毒腺cDNA文库构建及其毒素-16序列和活性分析

家福捕鸟蛛(Selenocosmia jiafu)是一种生活在广西、云南等地的蜘蛛新种。为了阐明其毒素的分子多样性和筛选河豚毒素不敏感型(Tetrodotoxin-resistant,TTX-R)钠通道抑制剂,利用SMART法构建了毒腺全长cDNA文库,并进行DNA测序和表达序列标签(Expressed sequence tags,ESTs)聚类分析。结果表明家福捕鸟蛛毒腺双链cDNA条带分布在300~3 000 bp。经测序得到752个高质量的EST序列,去冗余后得到257个唯一序列,其中毒素序列438条。家福捕鸟蛛毒素-16(Jiafu toxin-16,JF-16)是从家福捕鸟蛛粗毒中分离得到的1种分子量为3 954.616的哺乳类神经毒素,其全序列为H_2N-ECTKLLGGCTKSSECCPHLGCRRKWPYHCGWDGTF-COOH。研究结果揭示JF-16的全长cDNA为518 bp,编码87个氨基酸。全细胞膜片钳试验结果表明JF-16对大鼠背根神经节(Rat dorsal root ganglion,DRG)细胞TTX-R钠通道具有抑制作用。说明JF-16是一种潜在的具有镇痛活性的蜘蛛毒素。本研究有利于开展家福捕鸟蛛毒腺转录组研究和JF-16潜在镇痛活性分析。     

蜘蛛养殖需谨慎

目前养蜘蛛主要是取其蛛干、蛛毒的药用价值。蛛干的销路主要在国内．蛛毒的销路主要是在国外。蜘蛛整个养殖和取毒过程非常不容易．就连一般技术人员也很难掌握．一般农户不具备养殖和取毒技术。确切地说，我国的“养蜘蛛取毒”技术还处于研究阶段。因此要进行蜘蛛养殖要注意两点：一是注意技术问题。养蜘蛛需要很强的技术性，在自然界里．蜘蛛从捕食种类到栖息环境，可以自由选择．一旦人工养殖，不仅活动场所受到了限制，而且饮食也很难适合其胃口，久而久之会造成长期食欲不振而死亡。冬季稍有不慎蜘蛛还有可能被冻死。二是注意市场。蜘蛛有药用价值，但实际上用量极少，加之不同的蜘蛛所分泌的毒液不尽相同．其作用和价值也相差很大。     

蜘蛛毒素对人胃腺癌细胞株BGC-823增殖的抑制作用

为比较不同蜘蛛毒素对肿瘤细胞的抑制作用,采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)测定了不同浓度的虎纹单柄蛛(Ornithocton huwen)、海南单柄蛛(Ornithoctonus hainana)、敬钊缨毛蛛(Chilobrachy jingzhao)和雷氏大疣蛛(Macrothele raveni)4种蜘蛛毒素对人胃腺癌细胞株BGC-823的抑制作用。结果表明:4种蜘蛛毒素对人胃腺癌细胞株BGC-823的细胞增殖均有不同的抑制作用;同一蜘蛛毒素浓度越高抑瘤作用越好,蜘蛛毒素作用时间越长抑瘤效果越强,量效关系和时效关系良好;不同蜘蛛毒素对BGC-823细胞增殖的抑制作用效果不同,以敬钊缨毛蛛毒素作用最强,IC50为0.109μg/μL。     

拟环纹豹蛛体表裂缝感受器、跗节器亚显微观察

拟环纹豹蛛(Pardosa pseudoannulata)为狼蛛科豹蛛属动物,为了探究游猎型蜘蛛接收外界信号的机制,通过对拟环纹豹蛛体表进行扫描电镜观察,分析拟环纹豹蛛体表感受器的类型、分布及特征。结果显示,拟环纹豹蛛的单个裂缝感受器主要分布在触肢的跗节与胫节,数量较少,在整个触肢只能发现1~2个单个裂缝感受器;竖琴器在拟环纹豹蛛体表分布广泛,螯肢、触肢、步足均有发现,且胫节分布较多;而跗节器则见于触肢端部的前跗节上,其形态似水滴状小孔,为圆形或椭圆形空洞。     

绣球菌瓣片与基部多糖的分子量分布比较

为了明确广叶绣球菌Sparassis latifolia子实体的瓣片、基部可溶性多糖分子量分布差异,将新鲜绣球菌子实体经冷冻干燥、热水提取得到绣球菌瓣片多糖和基部多糖,通过β-葡聚糖酶酶解试验和高效凝胶渗透色谱(HPSEC)对绣球菌瓣片、基部多糖的分子量分布规律进行研究。结果表明:广叶绣球菌的瓣片多糖与基部多糖的重均分子量和分子量分布显著不同,绣球菌的瓣片多糖的重均分子量为3.88×10~5 Da,主要成分的重均分子量为4.30×10~5 Da;而基部多糖的重均分子量为1.43×10~6 Da,主要由2.85×10~4 Da的小分子量部分和分子量大于2×10~6 Da的大分子量部分构成。酶解试验结果表明绣球菌基部多糖的水溶液中分子量大于2×10~6 Da的部分无法被β-葡聚糖酶酶解。     

重庆市稻田动物群落及农田蜘蛛资源考察

对重庆北培、万州、璧山、合川及永川5区、县、市的稻田动物及农田蜘蛛群落的结构组成及数量动态进行了田间系统调查与室内分析鉴定,发现稻田动物5纲17目101科198属269种,农田蜘蛛21科81属203种,其中稻田蜘蛛16科46属89种;稻田节肢动物2纲13目95科192属261种,其中昆虫11目78科145属171种;昆虫中天敌7目27科53属64种,害虫7目45科86属100种,其他类虫1目6科6属7种;稻田动物中天敌3纲9目46科102属156种,其中捕食性天敌3纲9目41科92属143种。稻田蜘蛛优势种主要是拟水狼蛛、食虫沟瘤蛛、草间小黑蛛、粽管巢蛛和八点球腹球。     

大豆多肽分子质量分布与苦味的确定

利用葡聚糖凝胶（Sephadex G-25)柱层析和高压液相色谱（HPLC）测定大豆多肽分子质量与水解度以及分子质量与苦味之间的关系。试验结果表明，随着水解度的增加，大豆蛋白水解物分子质量变小，当水解度约为25％时，其分子质量绝大多数在500－1000u之间。分子质量为500－1000u的大豆多肽苦味较强。     

Study on Enzymatic Hydrolysis of Gadus morrhua Skin Collagen and Molecular Weight Distribution of Hydrolysates

Process parameters on enzymatic hydrolysis and molecular weight （MW） distribution of collagen hydrolysates from Gadus morrhua skin were investigated. The optimal process parameters were obtained by the single-factor and orthogonal experiments. The molecular weight distribution of hydrolysates was determined using both Sephadex G25 partition and high speed liquid chromatography electricity spray mass spectrum （HPLC-ESI-MS）. Collagen hydrolysates were first gained by an alkaline protease ＂alcalase＂ for 3 h at temperature （50~C）, pH （10.0）, substrate concentration （75 g L-~）, and E/S （3%）. The molecular weight distribution of collagen hydrolysates ranged from 300 to 1 500 Da, and most of peptides were under 1 200 Da. Sephadex G25 partition and HPLC-ESI-MS should be successfully employed to determine the molecular weight distribution of collagen hydrolysates.     

仙人掌抗菌肽的筛选、分离纯化及性质研究

目的:研究仙人掌植物是否具有起抑菌作用的抗菌肽,并对其进行分离纯化和部分性质研究。方法:采用梯度盐析的方法提取6种仙人掌不同饱和梯度硫酸铵沉淀的蛋白质组分进行抑菌性试验,筛选蛋白质组分具有抗菌效果的仙人掌品种。用Sephadex G-75和Sephadex G-25柱层析对抗菌效果最为显著的蛋白质组分进一步分离纯化,并对纯化到的具有抗菌活性的多肽物质进行分子量、理化性质和抗菌活性检测。结果:发现4种仙人掌中存在对金黄色葡萄球菌有抗菌作用的小分子量蛋白质成分。其中金手球所含蛋白质组分的抗菌效果最为显著,并从中分离纯化得到具有抗菌活性的多肽物质,命名为MH-AMP-1。MH-AMP-1的分子量(Mr)约为8511 Da,在pH 2.5~7.5的乙酸铵缓冲液中抗菌活性强,且具有一定的热稳定性,对检测的病原菌具有广谱抗菌活性。     

离子交换色谱法对肌肉中钙激活酶分离纯化的研究

试验通过离子交换色谱法对肌肉中钙激活酶(Calpain)进行定量分析研究,确定了Calpain粗提液制备工艺。对Calpain粗提液进行全波长紫外扫描说明276～280nm处有一个吸收高峰。应用DEAE离子交换层析对Calpain进行纯化,用0～500mmol·L-1NaClTris-HCl进行离子强度线性梯度洗脱,在280nm波长下测定洗脱液的光吸收值,洗脱得3个蛋白峰,μ-Calpain和m-Calpain分别在NaCl为130～180mmol·L-1和260～300mmol·L-1时洗脱下来,钙激活酶抑制蛋白(Calpastatin)在NaCl为70～110mmol·L-1时洗脱下来。Calpain分子量为110000u,通过电泳试验表明,本检测结果提取液正好在分子量约为110000u处有一条清晰的带,说明所得提取物为Cal-pain,而且纯度较高。     

舟山黄海葵杀虫活性多肽的初步研究

通过多维高效液相色谱结合动物实验,从舟山黄海葵粗毒中筛选了多种具有强杀虫活性以及低哺乳动物活性的杀虫肽,其分子量约在2~5 kDa之间,在100μg/kg体重浓度下对脊尾白虾以及黄粉虫幼虫具有强且快速的麻痹、致死活性,对小鼠毒性较弱。上述研究结果表明舟山黄海葵是一个研究和开发杀虫肽的宝库,同时也为从舟山黄海葵毒素中进一步筛选杀虫肽并深入研究其杀虫机理奠定了基础。     

中性蛋白酶酶解蛋清制备活性肽的研究

研究了AS1398中性蛋白酶酶解鸡蛋蛋清制备小分子活性肽,确定了酶解的最佳工艺:pH值8.0,酶解温度60℃,底物浓度4%,酶加入量为底物浓度的7%,水解时间4h.在此条件下,水解度达到26.1%.用SephadexG-15测定了水解物分子量分布,结果表明:水解产物中的主要成分是分子量集中在1 300Da的寡肽.     

Comparative toxinology of Loxosceles reclusa and Corynebacterium pseudotuberculosis

In contrast to other kinds of phospholipases, phospholipases D that are toxic for humans and animals are not commonly encountered as constituents of venoms or as products of pathogenic microorganisms. Toxic phospholipases D are present, however, in the venom of the brown recluse spider (Loxosceles reclusa) and in supernatants or filtrates of cultures of Corynebacterium pseudotuberculosis. Although the two enzyme toxins are derived from phylogenetically disparate entities, they are similar in molecular weight, charge, substrate specificity, and in several biological activities. They are immunologically distinguishable.     

发酵鱼粉中寡肽检测技术研究

用单宁酸作为发酵鱼粉中水溶性蛋白质的沉淀剂,经飞行时间质谱仪测得滤液中蛋白质分子量在2047．98Da以下。用双缩脲反应法可以测出发酵鱼粉中水溶性总肽的含量,用凯氏定氮法可以测出被沉淀的多肽的含量,从而可以计算出发酵鱼粉中寡肽的含量。用该技术测得2546Da和1500Da的低分子量蛋白的回收率分别为92．42％和5．91％。     

乌贼内脏酶解多肽的制备和抗氧化活性研究

[目的]探讨乌贼内脏酶解多肽的制备和抗氧化活性。[方法]以乌贼内脏为原料,用胰蛋白酶对其进行水解,采用单因素和正交试验方法研究酶解温度、酶解时间、加酶量和pH对水解度和抗氧化性的影响;通过检测羟自由基清除率、DPPH清除率和还原力评价不同分子量水解物多肽的抗氧化性。[结果]当酶解温度为35℃,时间为5 h,加酶量为5 000 U/g,pH为7.5时,水解度最大;当酶解温度为40℃、时间为7 h、加酶量为4 500 U/g,pH为8.0时,水解物对羟自由基清除率最大。超滤后不同分子量多肽对羟自由基的清除率为3～5 kD3 kD以下5～10 kD;DPPH清除率:3～5 kD3 kD以下5～10 kD;还原力:3 kD以下3～5 kD5～10 kD。[结论]乌贼内脏酶解多肽具有较好的抗氧化活性,不同分子量多肽的活性不同。