禽流感H5N1亚型不同株抗原抗体相互检测相关性试验

禽流感病毒（Avian Influenza Virus,AIV）是禽流行性感冒（简称禽流感,Avian Influenza,AI）的病原。其中高致病性的H5N1亚型AIV可以造成鸡群的大批死亡,对家禽养殖业影响严重,并可引起人的感染和死亡。通过接种疫苗能有效地控制禽流感的传播,在禽流感疫苗免疫效力的评价过程中,监测免疫鸡血清抗体是最常用、最可行的方法。2009年农业部批准重组禽流感病毒灭活疫苗（H5N1亚型,Re-5株）和重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗（H5N1,Re-5株+Re-4株）制造,2012年重组禽流感病毒灭活疫苗（H5N1亚型,Re-6株）及重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗（H5N1,Re-6株+Re-4株）取代以上两个产品,2014年,北方出现了新的7.2分支毒株,而禽流感Re-4株疫苗和Re-6株疫苗对这种新型流行株的保护效力并不佳。2014年4月11日,农业部发布“中华人民共和国农业部公告第2093号”,制定了重组禽流感病毒灭活疫苗（H5N1亚型, Re-7株）和重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗（Re-6株+Re-7株）2种兽药产品制造及检验规程,全国将主要以Re-6与Re-7两种疫苗联合免疫为新的趋势。本试验分别用不同毒株的禽流感试验抗原与不同毒株禽流感疫苗免疫鸡的血清通过HI试验相互检测,对抗体效价进行分析,从而得出不同毒株的相关性。     

禽流感H5N1亚型不同株抗原抗体相互检测相关性试验

禽流感病毒（Avian Influenza Virus,AIV）是禽流行性感冒（简称禽流感,Avian Influenza,AI）的病原。其中高致病性的H5N1亚型AIV可以造成鸡群的大批死亡,对家禽养殖业影响严重,并可引起人的感染和死亡。通过接种疫苗能有效地控制禽流感的传播,在禽流感疫苗免疫效力的评价过程中,监测免疫鸡血清抗体是最常用、最可行的方法。2009年农业部批准重组禽流感病毒灭活疫苗（H5N1亚型,Re-5株）和重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗（H5N1,Re-5株＋Re-4株）制造,2012年重组禽流感病毒灭活疫苗（H5N1亚型,Re-6株）及重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗（H5N1,Re-6株＋Re-4株）取代以上两个产品,2014年,北方出现了新的7．2分支毒株,而禽流感Re-4株疫苗和Re-6株疫苗对这种新型流行株的保护效力并不佳。2014年4月11日,农业部发布“中华人民共和国农业部公告第2093号”,制定了重组禽流感病毒灭活疫苗（H5N1亚型,Re-7株）和重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗（Re-6株＋Re-7株）2种兽药产品制造及检验规程,全国将主要以Re-6与Re-7两种疫苗联合免疫为新的趋势。本试验分别用不同毒株的禽流感试验抗原与不同毒株禽流感疫苗免疫鸡的血清通过HI试验相互检测,对抗体效价进行分析,从而得出不同毒株的相关性。     

乌昌地区三黄鸡免疫不同禽流感疫苗及不同免疫剂量的抗体水平测定和效力对比试验

用5种不同的禽流感疫苗以不同免疫剂量、不同免疫次数接种乌昌地区三黄鸡,定期检测禽流感免疫抗体,结果表明,重组禽流感病毒灭活疫苗(H5N1亚型,Re-1株)、Inactivated Vaccine of Avian Influenza(H5N2)和禽流感(H5+H9)二价灭活疫苗(H5N1Re-1+H9N2 Re-2株)等3种疫苗均能刺激机体产生良好的免疫抗体,而禽流感-新城疫重组二联活疫苗(rL-H5株)和禽流感重组鸡痘病毒载体活疫苗(H5亚型)的免疫抗体十分低下。经不同免疫次数的比较试验表明,重组禽流感病毒灭活疫苗(H5N1亚型,Re-1株)、Inactivated Vaccine of Avian Influenza(H5N2)和禽流感(H5+H9)二价灭活疫苗(H5N1Re-1+H9N2 Re-2株)二次免疫的H5抗体水平明显高于经一次免疫的抗体水平,且免疫持续期长。     

不同高致病性禽流感疫苗的免疫效果试验

应用重组禽流感病毒灭活疫苗（H5N1亚型,Re-1株）,禽流感-新城疫重组二联活疫苗（rL-H5株）对三组肉鸡进行禽流感免疫效果观察,首免用重组禽流感病毒灭活疫苗（H5N1亚型,Re-1株）,二免用禽流感-新城疫重组二联活疫苗（rL-H5株）。结果表明：接种重组禽流感病毒灭活疫苗（H5N1亚型,Re-1株）的免疫效果比接种禽流感-新城疫重组二联活疫苗（rL-H5株）的效果好;首免用重组禽流感病毒灭活疫苗（H5N1亚型,Re-1株）,二免用禽流感-新城疫重组二联活疫苗（rL-H5株）的效果比仅接种重组禽流感病毒灭活疫苗（H5N1亚型,Re-1株）的效果好。     

重组禽流感病毒灭活疫苗（H5N1亚型）对鸭和鹅的免疫效果观察

由H5N1亚型禽流感病毒（Avian influenza virus,AIV）引起的高致病性禽流感（highly pathogenic avian influenza, HPAI）是禽类的一种烈性传染病,疫苗免疫是禽流感防控中的重要环节。本试验采用重组禽流感病毒灭活疫苗（H5N1,Re-5株）和重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗（H5N1、Re-5株+Re-4株）进行了鸭和鹅的免疫试验,对免疫鸭和鹅的抗体水平进行了动态监测。试验结果表明,两种疫苗对鸭和鹅均具有良好的免疫效果。基于试验结果提出了鸭和鹅禽流感免疫程序：2 w左右首免,4~5 w时二免,开产前三免,此后每隔4~5个月加强免疫一次。     

重组禽流感病毒H_5亚型二价灭活苗(H_5N_1,Re-5株+Re-4株)的免疫效果评价

为评价H5N1高致病性禽流感二价灭活苗（H5N1,Re-5株＋Re-4株）的免疫效果。选择健康无禽流感免疫史的62日龄肉鸡20羽作为保护期外组（Ⅰ组）;选择健康并有2次H5N1亚型Re-5株疫苗免疫史的110日龄肉鸡19羽作为保护期内组（Ⅱ组）。每羽胸肌注射二价苗0.5 mL。试验证实,重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗（H5N1,Re-5株＋Re-4株）免疫注射后,未见临床异常反应,一次免疫注射后即可达到群体合格率70%以上。     

对重组禽流感病毒灭活疫苗（H5N1亚型，Re-1株）对家禽免疫效果方面的调研

2006-2007年,通过检测免疫注射H5N1重组禽流感病毒灭活疫苗（Re-1株）后3-4周的444个鸡场、66个鸭场和28个鹅场共计16140份血清中H5亚型禽流感血凝抑制抗体水平,比较A、B、C、D、E5个不同厂家的疫苗对鸡、鸭、鹅免疫效果。结果显示：重组禽流感灭活疫苗（H5N1亚型,Re-1株）对鸡的免疫效果明显好于鸭和鹅;不同厂家疫苗质量和免疫效果有差异,其中A厂疫苗质量和免疫效果最好。     

对重组禽流感病毒灭活疫苗（H5N1亚型，Re-1株）在家禽免疫效果方面的调研

2006-2007年,通过检测免疫注射H5N1重组禽流感病毒灭活疫苗（Re-1株）后3～4周的444个鸡场、66个鸭场和28个鹅场共计16140份血清中H5亚型禽流感血凝抑制抗体水平,比较A、B、c、D、E5个不同厂家的疫苗对鸡、鸭、鹅免疫效果。结果显示：重组禽流感灭活疫苗（H5N1亚型,Re-1株）对鸡的免疫效果明显好于鸭和鹅;不同厂家疫苗质量和免疫效果有差异,其中A厂疫苗质量和免疫效果最好。     

重组禽流感病毒（H5+H7）三价灭活疫苗免疫鸡群的临床效果评价

为评价重组禽流感病毒（H5+H7）三价灭活疫苗（H5N1 Re-11株+Re-12株,H7N9 H7 Re-2株）免疫鸡群的临床应用效果及当前禽流感免疫程序的合理性,对河南省使用重组禽流感病毒（H5+H7）三价灭活疫苗免疫的940个存栏500只以上的养鸡场开展临床应用效果调查,并抽取328个场开展免疫抗体检测。结果显示：免疫后1周内出现不良反应的养鸡场190个,占20.21%（190/940）;发病的养鸡场140个,占14.89%（140/940）;出现死亡的养鸡场51个,占5.43%（51/940）。免疫后1周内出现不良反应的鸡只占0.11%,发病的占0.09%,死亡的占0.04%。血清样品的血凝（HA）和血凝抑制（HI）试验结果显示：H5亚型Re-11株场群合格率为97.56%,免疫抗体阳性率为94.20%;H5亚型Re-12株场群合格率为96.34%,免疫抗体阳性率为92.70%;H7亚型Re-2株场群合格率为98.17%,免疫抗体阳性率为94.67%。结果表明：重组禽流感病毒（H5+H7）三价灭活疫苗的鸡群免疫效果较好,免疫后的临床不良反应率极低。但在免疫过程中,应尽量消除影响疫苗临床效果的不利因素,定期开展免疫效果监测,及时调整免疫程序。本研究为全国高致病性禽流感疫苗的应用提供了参考。     

不同种类禽流感疫苗对番鸭的免疫效果对比试验

为评价重组禽流感病毒灭活疫苗鸡胚源H5N1亚型Re-6株、鸡胚源H5N1亚型Re-6+Re-8株灭活疫苗、细胞源Re-6+Re-8株灭活疫苗及水禽专用H5N2亚型D7株灭活疫苗4个产品对番鸭的免疫效果,分别取四种疫苗分别免疫20日龄番鸭,125只/组,免后35日采血测定HI抗体效价。结果表明,4种疫苗免疫后用Re-6抗原检测抗体依次分别为8.1log2、9.3log2、8.9log2、7.0log2,用Re-8抗原检测抗体分别为1.5log2、9.9log2、8.7log2、7.5log2,用D7抗原检测抗体分别为0.3log2、7.6log2、5.6log2、6.5log2。四种疫苗免疫效果由高至低依次为:鸡胚源H5N1亚型Re-6+Re-8株灭活疫苗细胞源Re-6+Re-8株灭活疫苗H5N2亚型D7株灭活疫苗鸡胚源H5N1亚型Re-6株灭活疫苗。     

禽流感H_5和H_9混合疫苗免疫肉鸽的效果试验

将禽流感H5亚型二价灭活疫苗（H5N1,Re-4＋Re-5）和H9亚型（SS株）灭活疫苗等量均匀混合,采用不同剂量不同次数分别注射。用血凝和血凝抑制试验方法检测H5亚型（Re-4、Re-5）和H9亚型（SS株）抗体效价。试验表明：以较小剂量0.5ml/只,间隔21d二免能产生整齐、持久、高滴度保护抗体,据此提出鸽H5和H9亚型禽流感多价混合疫苗的参考免疫程序。     

鸡新城疫、传染性支气管炎、禽流感(H9亚型)三联灭活苗(La Sota株+M41株+Re-9株)应用效果研究

鸡新城疫、传染性支气管炎、禽流感(H9亚型)三联灭活苗(La Sota株+M41株+Re-9株)(三联苗(Re-9株))为国内首个采用基因重组H9亚型禽流感疫苗株研制的新支流三联灭活疫苗。为研究疫苗上市后的实际应用效果,使用7日龄AA肉鸡和260日龄产蛋期蛋鸡评价三联苗(Re-9株)有效性。结果显示:肉鸡免疫后14 d即可激发抗体,免疫后21 d,新城疫病毒(NDV)、传染性支气管炎病毒(IBV)、H9亚型禽流感病毒(H9 AIV)的血凝抑制(HI)抗体分别达8.6log2、6.2log2、8.3log2,出栏时仍维持在较高水平;于免疫后14 d抽样进行NDV、H9 AIV攻毒,对照组均100%发病或排毒,免疫鸡均可获得100%保护;在蛋鸡上,免疫三联苗(Re-9株)后28 d,NDV、IBV、H9 AIV的HI抗体效价分别达12.0log2、7.8log2、12.2log2,免疫后6个月仍可以维持在较高水平。结果表明:三联苗(Re-9株)在实际应用中免疫效果较好,本研究将为鸡新城疫、传染性支气管炎、H9亚型禽流感的防控提供有力支撑。     

三种禽流感灭活疫苗对农村散养鸭的免疫效果比较

采用重组禽流感灭活疫苗(H5N1亚型,Re-1株)、禽流感灭活疫苗(H5亚型,N28株)、禽流感H5-H9二价灭活疫苗三种疫苗免疫农村散养鸭,结果表明,在一次免疫和加强免疫中,重组禽流感灭活疫苗、禽流感灭活疫苗的抗体效价都分别明显高于H5-H9二价灭活疫苗同期的H5抗体效价,因此对水禽免疫宜使用重组禽流感灭活疫苗或禽流感灭活疫苗;加强免疫明显比一次免疫效果好,应用禽流感灭活苗对散养鸭免疫,必须加强方可达到理想的免疫效果。     

Failure of a recombinant fowl poxvirus vaccine containing an avian influenza hemagglutinin gene to provide consistent protection against influenza in chickens preimmunized with a fowl pox vaccine

Vaccines against mildly pathogenic avian influenza (AI) have been used in turkeys within the United States as part of a comprehensive control strategy. Recently, AI vaccines have been used in control programs against highly pathogenic (HP) AI of chickens in Pakistan and Mexico. A recombinant fowl pox-AI hemagglutinin subtype (H) 5 gene insert vaccine has been shown to protect specific-pathogen-free chickens from HP H5 AI virus (AIV) challenge and has been licensed by the USDA for emergency use. The ability of the recombinant fowl pox vaccine to protect chickens preimmunized against fowl pox is unknown. In the current study, broiler breeders (BB) and white leghorn (WL) pullets vaccinated with a control fowl poxvirus vaccine (FP-C) and/or a recombinant fowl poxvirus vaccine containing an H5 hemagglutinin gene insert (FP-HA) were challenged with a HP H5N2 AIV isolated from chickens in Mexico. When used alone, the FP-HA vaccine protected BB and WL chickens from lethal challenge, but when given as a secondary vaccine after a primary FP-C immunization, protection against a HP AIV challenge was inconsistent. Both vaccines protected against virulent fowl pox challenge. This lack of consistent protection against HPAI may limit use to chickens without previous fowl pox vaccinations. In addition, prior exposure to field fowl poxvirus could be expected to limit protection induced by this vaccine.     

Immunoadjuvant effects of bacterial genomic DNA and CpG oligodeoxynucleotides on avian influenza virus subtype H5N1 inactivated oil emulsion vaccine in chicken

This study investigated the immunoadjuvant effects of three types of bacterial genomic DNA and CpG oligonucleotides (CpG ODN) on the avian influenza virus (AIV) subtype H5N1 inactivated oil emulsion vaccine under two immunization strategies. The genomic DNA extracted from Escherichia coli O₂, Staphylococcus aureus, Streptococcus faecalis FQ68, and synthetic CpG ODN were used as adjuvants, and their effects on the AIV oil emulsion vaccine were examined in chickens. The results indicated that when administered separately from the vaccine, adjuvants induced lower haemagglutination inhibition (HI) titres and serum IgG titres but resulted in higher concentrations of IFN-γ and IL-10. In contrast, when combined with the oil emulsion vaccine prior to inoculation, CpG ODN induced higher HI, IgG titres and IFN-γ concentration but resulted in lower IL-10 concentration. These data suggest that, depending on the immunization approaches, adjuvants may exert distinct immune effects in chickens receiving AIV H5N1 oil emulsion vaccine: the prior incorporation of CpG ODN into the vaccine may augment both the humoral and Th1 type immune responses, while separate inoculation of adjuvants has not shown better adjuvanticity.     

动物园鹦鹉科鸟类H5 N1禽流感疫苗免疫后效果监测

多年来动物园虽然严格按照国家强制要求对园内饲养的野生鸟类进行禽流感疫苗的免疫接种工作,但是对于接种后各种鸟类免疫效果的问题仍未有研究。本次研究主要目的为探究圈养鸟类免疫商品化禽流感疫苗后的免疫效果如何,以及各个物种对疫苗的免疫应答水平是否相同。实验中选取动物园几种圈养小型鹦鹉科鸟类为实验对象,对其进行禽流感H5N1亚型疫苗免疫接种后,利用血凝(HA)及血凝抑制(HI)实验监测禽流感抗体水平变化规律,评估免疫效果。从初步的实验结果发现,鹦鹉科鸟类仅接种一次商品化禽流感疫苗,其免疫应答水平普遍偏低,免疫效果不理想。根据实验结果,尝试性地以虎皮鹦鹉为实验对象,尝试调整免疫程序后再次进行禽流感疫苗的免疫接种,通过多次尝试找出较好的免疫程序,使得虎皮鹦鹉的禽流感疫苗免疫效果得到改善,为今后制定出适合其他种类野生鸟类的禽流感免疫程序提供了科学依据。     

禽流感病毒H5N2亚型西藏株的分离鉴定与特性分析

从西藏地区病死鸡体内分离鉴定到1株H5N2亚型禽流感病毒,基因组序列测定与分析显示,此H5N2毒株可能是由H5NI和H9N22种亚型的病毒重配形成,其PB2、HA、NS片段与高致病性H5NI亚型高度同源,PBI、PA、NP、NA、M均与低致病性H9N2亚型亲缘关系相近。尽管HA蛋白切割位点有多个碱性氨基酸序列,但静脉接种指数只有0．59,表现为低致病力。     

鸭坦布苏病毒病-H9亚型禽流感二联灭活疫苗免疫佐剂筛选

为筛选出理想的鸭TMUV-AIV(H9亚型)二联灭活疫苗免疫佐剂,将灭活的坦布苏病毒液和禽流感病毒(H9亚型)尿囊液分别与白油佐剂、卡波姆佐剂、铝胶佐剂、蜂胶佐剂制成抗原含量相同的TMUV-AIV二联灭活疫苗。应用阻断ELISA方法和血凝抑制方法测定免疫鸭血清中坦布苏病毒和禽流感病毒抗体,比较不同佐剂疫苗对试验鸭的免疫效力。结果表明,以白油作为佐剂的灭活疫苗组免疫效果最好,抗体产生快、抗体水平优于其他各组,免疫2周后60%(6/10)血清样品HI抗体可达1∶8以上,80%血清样品呈TMUV抗体阳性,是制备鸭TMUV-AIV(H9亚型)二联灭活疫苗的理想佐剂。     

H9亚型禽流感病毒HF株的分离鉴定和免疫原性评价

2015年,从安徽合肥某养鸡场分离出一株H9N2亚型禽流感病毒（AIV）,命名为HF株。该毒株鸡胚半数感染量（EID₅₀）为10^9.17/0.1 mL,最小致死量的平均死亡时间（MDT）为87 h。对其HA基因分析发现,其氨基酸裂解位点为RSSR↓GLF,符合低致病性AIV特征;HA基因的遗传进化分析结果表明,该分离株属于h9.4.2.5谱系,符合当前毒株流行趋势。将HF株与2006-2018年分离自全国各地的10株H9N2亚型AIV分离株同时制备灭活疫苗,免疫SPF鸡,制备阳性血清,通过交叉血凝抑制试验分析病毒抗原性,结果显示HF株与2014年之前毒株抗原相关性介于0.50~0.56之间,与2014年及之后毒株抗原相关性介于0.89~1.00之间,表明该分离株与2014年之后的流行毒株具有良好的抗原相关性。用0.2%甲醛灭活HF株病毒液,其HA效价在灭活前后未发生变化;用灭活抗原制备油乳剂灭活疫苗免疫SPF鸡,免疫后21 d HI抗体效价几何平均值达到9.0log2以上,可使免疫鸡完全抵抗H9亚型AIV的感染,提供100%的攻毒保护。研究结果表明,HF株具有良好的免疫原性,可作为疫苗候选株用于H9N2亚型禽流感疫苗的研制。     

蛋鸡免疫重组禽流感病毒H_5亚型二价灭活疫苗抗体消长规律的研究

为了在临床上制定合理的禽流感疫苗免疫程序,用重组禽流感病毒H_5亚型二价灭活疫苗(H_5N_1,Re-5株+Re-4株)分别在14日龄、49日龄、105日龄免疫蛋鸡,免疫剂量分别为0.3ml/只、0.5ml/只、0.5ml/只。分别在第1、6、10、14、20、28、35、42、49、56、63、70、77、86、94、105、120、150、180日龄采血测定HI抗体效价。结果表明首免后HI抗体上升较慢较低,只有第二次免疫后,抗体才迅速升高。在70日龄(二免后3周)H5N1,Re-4HI抗体达到9.60log2,H_5N_1,Re-5HI抗体达到7.86log2。在120日龄(三免后2周)H_5N_1,Re-4HI抗体达到9.30log2,H_5N_1,Re-5HI抗体达到9.25log2。