乳蛋白基因及乳蛋白综合调控技术

乳蛋白是牛奶中最重要的成分,包括酪蛋白和乳清蛋白等,是评价鲜牛奶品质的主要指标。本文阐述了乳蛋白及其基因的多态性和影响其含量的诸多因素,如品种、泌乳阶段、日粮组成和乳房炎等;并从遗传育种、营养、转基因和内分泌等四个方面综述了国内外乳蛋白调控技术的研究进展,为提高乳蛋白产量和含量提供依据。     

乳蛋白基因在转基因动物乳腺细胞中特异性表达的研究进展

乳蛋白是乳的主要营养成分，乳蛋白的种类及其在乳中的浓度都影响乳的品质，而乳中各乳蛋白的含量都受到相应乳蛋白基因的控制。通过转基因技术，可以在转基因动物乳腺细胞中特异性地表达目的蛋白，从而改善乳的品质以及生产具有特殊药用价值的乳产品。本文主要概述乳蛋白多态性及其作用，乳蛋白基因及多态性，并着重介绍乳蛋白基因在转基因动物体内的表达调控；通过介绍大量转基因试验的研究成果，以探寻改变乳成分的分子遗传基础。     

反刍动物乳蛋白的合成机理及其营养调控

乳蛋白含有机体几乎所有的必需氨基酸,具有较高的营养价值。乳蛋白的消化会产生一系列的生物活性肽,是一种具有潜力的营养保健性物质,人类对其消费量很大。提高乳蛋白含量和产量将是奶业生产发展的必然趋势。不过,在不同的生产条件下,乳腺合成蛋白质的能力不同,乳蛋白的产量也有所变化。本文主要概述了乳蛋白的构成、乳蛋白的合成及乳蛋白合成的调控。     

牛乳蛋白合成及营养调控研究现状

牛乳蛋白不但是优质的营养物质,还具有特殊的免疫调节功能;但目前我国乳蛋白含量较低,尚未能充分发挥奶牛的遗传潜能。为此,本文综述奶牛乳蛋白合成机制及其主要的营养调控,以期从理论上指导实践。     

必需氨基酸调控奶牛乳腺上皮细胞乳蛋白合成的研究进展

乳蛋白含量的高低是衡量乳品质的重要指标,奶牛乳腺上皮细胞（BMECs）是乳腺合成乳蛋白的基本功能单位。必需氨基酸（EAA）作为乳成分前体物质,其不仅是乳蛋白合成的底物,而且可以作为信号分子调控乳蛋白的合成。本文综述了近年关于EAA对BMECs乳蛋白合成的影响及其潜在的信号通路机制的研究进展,为今后系统研究氨基酸对BMECs乳蛋白合成的调控及提高泌乳奶牛氨基酸转化为乳蛋白的效率提供参考。     

纳豆激酶基因在家蚕生物反应器中的表达

纳豆由枯草杆菌(Bacillussubtilis)或纳豆菌(Bacil-lusnatto)发酵大豆而成。1987年,日本学者须见洋行等首次从传统食品纳豆中发现了一种具有溶栓活性的酶制剂,并命名为纳豆激酶(nattokinase,NK)。纳豆激酶具有易于提取.溶栓效果好.无毒副作用,体内半衰期长,成本低,可降压、杀菌和抗病毒等优点,因而可能成为新一代的抗栓药物。杆状病毒是一类闭合双链DNA病毒,昆虫杆状病毒表达系统是80年代建立起来的真核表达系统.其表达效率高.具有包括糖基化作用、磷酸化作用等一系列蛋白质翻译加工修饰系统.其表达产物多具有可进行翻译后修饰.具有与天然产品相似的生物活性     

乳腺生物反应器表达载体和转基因方法的研究概况

动物乳腺生物反应器，属转基因动物研究的范畴，是指通过各种转基因技术，将某种或几种具有重要生物活性的蛋白外源基因在动物乳腺中高效表达，从而在乳腺中生产目的基因产品。与细胞发酵系统相比，乳腺生物反应器的pH、温度、离子强度等由动物自身控制和平衡，其发酵特性可以遗传，生产效率非常高，而且生产的外源蛋白具有翻译后加工     

乳蛋白影响因素及营养调控的研究技术

乳蛋白是牛奶中最重要的营养物质,其含量是决定牛奶质量的重要指标。乳蛋白率受遗传、环境、营养和饲养管理等多种因素影响。提高乳蛋白率难度很大,应综合分析,找准原因,采取综合措施来加以改进,主要可从遗传育种、饲养管理及营养等三方面来实施。相对于乳脂率来说,在生产中提高乳蛋白率难度要大,因为乳蛋白的含量受奶牛遗传育种的影响更大。但只要饲料营养配比得当,乳蛋白率水平也会提高。     

乳蛋白合成的信号通路与营养调控

乳蛋白是衡量乳品质高低的重要指标之一。研究乳腺合成乳蛋白的机理,探索奶牛将摄入的营养物质转化成乳蛋白的代谢过程及对关键基因的调控作用,已为提高乳品质提供了新的思路。本文从日粮蛋白质、能量、氨基酸、维生素等营养素的角度,结合相关的信号通路关键基因,综述了营养素对乳蛋白合成的调节作用,为利用日粮营养素对乳蛋白合成的调节研究提供理论基础。     

tPA乳腺组织特异性表达载体构建及转基因小鼠建立

以pKB、pcDNA3和pCPA为原始质粒，构建BLG启动子调控的组织型纤溶酶原激活剂（tPA）乳腺组织特异性表达载体pBTA。以SalⅠ酶切质粒pBTA，回收5.45kb基因片段BLG－tPA-bGHpolyA，通过显微注射，导入昆明小鼠受精卵的雄原核内。共注1365枚，将存活的1053枚移植的50只同期发情假孕母鼠的输卵管内，怀孕24只，共产仔79只，上述仔鼠通过PCR检测，结果19只阳性。Southern blotting检测上述19份PCR阳性小鼠基因组，其中4只为整合阳性，说明已获得了乳球蛋白启动子调控下的tPA转基因小鼠，为tPA在小鼠体内表达研究提供了必要条件。     

Leptin对奶牛乳腺上皮细胞主要乳蛋白基因表达的影响

本试验旨在研究不同处理浓度Leptin对奶牛乳腺上皮细胞中主要乳蛋白基因表达的影响。分别在有催乳素(PRL)(1μg/mL,+)和无PRL(0μg/mL,-)条件下进行,均以无Leptin组为对照组,10、100、1 000 ng/mLLeptin组为处理组。采用荧光定量PCR技术测定奶牛乳腺细胞中α-酪蛋白(α-CN)、β-酪蛋白(β-CN)和β-乳球蛋白(β-LGB)的基因表达。结果表明:无PRL条件下,Leptin未促进、甚至抑制奶牛乳腺上皮细胞中α-CN和β-CN基因的表达;有PRL条件下,Leptin极显著促进二者表达(P<0.001),以100 ng/mL处理组效果最显著;无论有、无PRL,Leptin均促进β-LGB基因的表达,但有PRL条件下,1 000 ng/mL处理组显著抑制β-LGB基因表达(P<0.001)。结果显示,有PRL条件下,Leptin促进奶牛乳腺上皮细胞主要乳蛋白基因的表达。     

泌乳反刍动物乳蛋白的合成机理及调控途径的研究

乳蛋白含有机体几乎所有的必需氨基酸，具有较高的营养价值。乳蛋白的消化会产生一系列的生物活性肽，是一种具有潜力的营养保健性物质，人类对其消费量很大。不过，在不同的生产条件下，乳腺乳蛋白的合成能力不同，乳蛋白的产量也有所变化。有报道奶牛将日粮氮转化为乳中氮的效率不高，一般为15％～30％，造成日粮中氮的大量浪费(Bequette等，1998)。然而，     

乳蛋白的营养调控

牛奶的干物质主要由乳脂肪、乳蛋白、乳糖和矿物质组成．其成分因品种、饲养管理及环境等不同而有一定的差异。一直以来我国没有一个很完整的以质论价的鲜奶收购体系。三聚氰胺事件发生后,各乳品企业鲜奶的收购标准也越来越严格。而乳蛋白不达标往往是拒收最常见的一个原因。     

牛奶乳蛋白含量的影响因素及营养调控技术

乳蛋白是牛奶中最重要的成分之一,受多种因素的影响,如品种、奶牛泌乳阶段、胎次、疾病和饲料组成与营养等。文中阐述了乳蛋白的合成机理及有关影响乳蛋白的营养和非营养因素;同时对国内外乳蛋白营养调控的技术进展作了全面的阐述,旨在为提高乳蛋白含量和产量提供参考。     

乳腺内氨基酸调控乳蛋白合成的分子作用机制

作为维持哺乳动物生命活动重要的"生物工厂",乳腺利用从流经血液中摄取的氨基酸等营养物质为底物合成乳蛋白。研究证实,氨基酸还可作为一种信号因子,通过乳腺内多种信号级联传导通路,调控乳蛋白基因的转录及翻译过程,从而影响乳腺中乳蛋白的合成。酪氨酸蛋白激酶-信号转导子和转录激活子(JAK-STAT)信号通路和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)信号通路是乳蛋白基因转录和翻译过程中的主要调控路径。本文综述了乳腺JAKSTAT和m TOR信号通路的分子机制及氨基酸通过这些通路调控乳蛋白合成的研究进展,旨在进一步阐明氨基酸调控乳蛋白合成的作用机理。     

乳蛋白的营养调控

牛奶的干物质主要由乳脂肪、乳蛋白、乳糖和矿物质组成,其成分因品种、饲养管理及环境等不同而有一定的差异。一直以来我国没有一个很完整的以质论价的鲜奶收购体系。三聚氰胺事件发生后,各乳品企业鲜奶的收购标准也越来越严格。而乳蛋白不达标往往是拒收最常见的一个原因。随着乳品研究的发展和健康消费的需要,人们对乳蛋白的需求不断增加,     

日粮对脂肪酸合成酶(FAS)基因的表达调控及其应用

脂肪酸合成酶（ＦＡＳ）催化乙酰酶Ａ和丙二酸单酰辅酶Ａ转变成脂肪酸,从而在动物体脂沉积中发挥重要作用。动物体内脂肪酸合成酶受激素和日粮因素的调控。本文介绍日粮（碳水化合物、蛋白质、脂肪和微量元素）对脂肪酸合成酶的活性和基因表达调控的影响,并就日粮脂肪酸合成酶基因表达调控在实际生产中的应用也进行了探讨。     

家蚕胰凝乳蛋白酶抑制剂基因SCI-SB的原核表达、纯化及活性检测

为进一步研究家蚕胰凝乳蛋白酶抑制剂基因SCI-SB的功能和作用机理,利用RT-PCR技术,从家蚕总RNA中扩增到家蚕SCI-SB基因片段,构建了含有GST标签的融合表达质粒pGEX4T-1-SCI-SB。采用pGEX融合蛋白表达系统,在大肠杆菌BL21中得到以包涵体形式存在的重组GST融合蛋白质,表达量可占菌体蛋白的15%。将包涵体变性、复性处理以后,进一步利用GSTTrapFF亲合层析一步获得了重组蛋白。将该重组蛋白免疫新西兰纯种大白兔,获得效价高的多克隆抗体。胰凝乳蛋白酶活性抑制实验结果表明该重组蛋白具有一定的酶活抑制作用。     

人胰岛素基因杆状病毒表达载体的构建及其在Sf9细胞中的表达

对人胰岛素基因真核表达载体（pCMA／mINS）进行Xho I酶切，回收的含人胰岛素基因组基因的1608bp片段与线性化的杆状病载体pFast Bac I进行连接，获得重组载体pFast/mINS。将该重组载体转化DH10Bac感受态细菌，在体内进行重组，并经2次抗性与蓝白斑筛选，得到杆状病毒重组载体Bacmid/mINS。将该载体转染Sf9细胞，获得了重组杆状病毒，经Tricine-SDS-PAGE和Western-blotting检测，重组杆状病毒在Sf9细胞中的表达产物是胰岛素原，而细胞培养上清中未检测到胰岛素和胰岛素原。