胚胎干细胞向神经细胞定向诱导分化方法的研究进展

胚胎干细胞具有自我更新和多向分化潜能,有望成为治疗神经系统疾病重要的种子细胞来源。如何高效地诱导胚胎干细胞向特定神经细胞分化是目前研究的热点。本文就胚胎干细胞定向分化成神经细胞的3种方法:RA诱导法、谱系选择法和SDIA法及其移植研究做一综述。     

人神经母细胞瘤细胞异种克隆胞质受体的选择

本研究检测人神经母细胞瘤细胞-水牛和人神经母细胞瘤细胞-猪重构胚胎的体外发育潜能,以期建立人神经细胞母细胞瘤细胞的异种治疗性克隆模型,为进一步研究人癌症发生过程中的表观遗传学修饰机制及分离得到正常的人类胚胎干细胞奠定基础。分别以水牛颗粒细胞和人神经母细胞瘤细胞为供体,水牛卵母细胞为受体构建克隆胚胎,然后检测这2种重构胚胎的体外发育效率;再以猪卵母细胞为胞质受体,同样以上述2种体细胞为供体细胞构建重构胚胎。结果显示,人神经母细胞瘤细胞-水牛重构胚胎囊胚发育率显著低于水牛同种克隆胚胎的（1.1%∶12.1%,P〈0.05）,而融合率（83.7%∶79.4%,P〉0.05）和卵裂率（55.8%∶58.2%,P〉0.05）无显著差异。但是,当以猪卵母细胞为受体胞质时,人-猪重构胚胎卵裂率显著低于水牛-猪重构胚胎（43.7%∶89.8%,P〈0.05）,但重构胚胎融合率和囊胚率差异不显著（85.8%∶82.5%,0∶1.4%,P〉0.05）。结果表明,人神经母细胞瘤细胞-水牛和人神经母细胞瘤细胞-猪异种重构胚胎可以在体外发育,尽管其囊胚发育率相对比较低。     

囊胚注射转基因ES细胞制作嵌合体的研究

在小鼠胚胎成纤维细胞制作的饲养层上培养并成功的维持了携带LacZ基因的胚胎干细胞系（S8），在此基础上，以S8为供体细胞，以远交系昆明白小鼠3．5d胚胎为受体，通过显微注射法将供体细胞转移到受体的囊胚腔内，经过恢复培养，移植到代孕鼠昆明白雌鼠的子宫中；后代在嵌合体出生一周后进行判定。本试验用8～13代的S8细胞共注射胚胎597枚，经1～3h恢复培养，有585枚胚胎重新具有膨大的囊胚腔，细胞轮廓分明，滋养层细胞间连接也清晰可见，胚胎成活率为97％；胚胎移植后，代孕母鼠共移植胚胎228枚，经17～19d的妊娠期后，产仔37只（2只死胎），产仔率为16％；有35只仔鼠（雄鼠18只，雌鼠17只）存活到可以判断毛色，共获得8只S8细胞毛色嵌合体小鼠，嵌合体的产生率为21．6％。结果表明用S8细胞经囊胚注射后能够获得嵌合体，并且嵌合体明显发生了性偏离现象。本试验为国内利用囊胚注射携带LacZ基因的胚胎干细胞获得嵌合体小鼠的首例报道。     

细胞核移植技术在研究太湖猪高繁殖性能核外基因效应中的应用

细胞核移植技术细胞核移植技术 ,根据核供体细胞的不同 ,有胚胎细胞核移植、胚胎干细胞核移植、胎儿成纤维细胞核移植和体细胞核移植。以核移植为核心技术的动物克隆技术 ,其基本技术环节除基本显微操作外 ,主要包括供核的分离、受体细胞的去核、核卵重组、重组胚的融合、核移植胚的培养与移植或重复克隆。供体核的分离胚胎细胞用 0 2 %链霉蛋白酶预处理胚胎 ,去胚胎的胶膜及透明带 ,离出单个卵裂球。目前在胚细胞核分离技术中有两大重要进展 :①胚胎干细胞系建立──胚胎干细胞在发育阶段上类似于内细胞团细胞 ,胚胎干细胞系是早期胚胎经…     

人猪嵌合体胚胎培育成功

<正>一个国际科研小组1月26日在美国《细胞》杂志上宣布,他们把人类干细胞注入猪胚胎中,首次成功培育出人猪嵌合体胚胎,并在猪体内发育了3到4周时间。人猪嵌合体研究面临巨大的伦理争议,但科学家认为,这项工作最终有助在动物体内培育出可供移植的人类器官,从而解决移植器官来源严重不足的难题。在新研究中,人类细胞发育成了肌肉细胞和其他组织器官的前体细胞,而不是脑细胞的前体细胞。研究人员认为,人猪嵌合体胚胎将能帮助模拟认识许多人类遗传疾病的早期起病过程,并实施药物测试,最终将     

胚胎干细胞的体外诱导分化

胚胎干细胞是从早期囊胚内细胞团或桑葚胚中分离的一种多潜能细胞,具有体外无限增殖和自我更新能力,而且还能被定向诱导分化形成机体几乎所有的细胞类型,如肝细胞、造血细胞、成骨细胞、神经细胞、神经胶质细胞、肌肉细胞、胰岛细胞、内皮细胞、黑色素细胞、淋巴细胞、脂肪细胞、成纤维细胞等.     

胚胎干细胞定向分化研究进展

胚胎干细胞是一类从早期胚胎内细胞团或原始生殖细胞分离和克隆出的 ,具有自我更新和发育全能性并产生分化后代能力的早期细胞 ,可分化形成各种组织类型。在合适的条件下 ,胚胎干细胞可发育成造血细胞、神经细胞、肌细胞等各种细胞。探索胚胎干细胞分化机理及其体外定向诱导分化为其他组织细胞的条件 ,就可以通过改变体外培养条件来探索胚胎干细胞向不同组织细胞分化规律 ,对揭开动物个体发育之迷 ,具有极其重要的理论意义 ;也可为细胞替代治疗、器官移植、建立药物筛选模型以及进行发育及细胞生物学的研究奠定基础。本文仅就胚胎干细胞定向分化的理论基础 ,定向分化研究现状作一综述     

E-钙粘蛋白抗体对小鼠早期胚胎发育的影响

旨在研究E-钙粘蛋白抗体(ECCD-1)对小鼠早期胚胎体内外发育的影响.在体外培养小鼠8-细胞胚胎的培养液中,分别添加不同浓度的ECCD-1,通过胚胎形态观察、碱性磷酸酶染色、多能性因子免疫染色、体外贴壁培养、嵌合体制备以及体内移植试验检测ECCD-1对小鼠胚胎发育能力的影响.结果表明,ECCD-1抗体延迟胚胎致密化和囊胚腔形成,但内细胞团并未受到影响,胚胎碱性磷酸酶和SSEA-1、Oct-4、Sox2、Nanog 4种多能性因子的免疫染色都呈阳性,此外,ECCD-1抗体也不影响胚胎的体外贴壁生长、体内移植着床以及嵌合体的制备.这些数据表明,ECCD-1抗体延迟胚胎致密化但并不影响胚胎的体内外发育能力.     

奶牛体细胞核移植技术的商业化应用

为了提高奶牛体细胞核移植产业化生产应用效率,拟通过优化高产奶牛体细胞克隆胚胎的体外生产技术条件,达到高效生产优质奶牛克隆胚胎进行克隆奶牛生产的目的。结果表明,从生产效率的角度考虑,卵母细胞直接进行盲吸去核处理,供体细胞无需进行同期饥饿处理,直接注入到盲吸去核后的受体卵子透明带下构建克隆胚胎,融合后的克隆胚胎在密封的混合三气(5%CO2+5%O2+90%N2)的气相条件下进行体外培养,利用西门塔尔牛做受体可以大规模地进行高产奶牛的商业化克隆。     

Cdx2和aPKC对胚胎早期发育的影响

尾型同源盒转录因子(Cdx2)能促进早期胚胎滋养外胚层(TE)的发育,并在胚胎发育体节的延伸中发挥着重要的作用;非典型性蛋白激酶(aPKC)则控制着细胞对称性和胚胎的极性,以维持哺乳动物神经细胞的功能和干细胞的分化,同时aPKC还参与调节外胚层细胞的发育,此外,Cdx2的表达水平也影响着aPKC在胚胎卵裂球顶端的定位.论文对Cdx2和aPKC在胚胎发育和极性建立方面的作用机制进行综述.     

胚胎干细胞源神经胶质前体细胞是髓鞘质移植的一种来源

自我更新、全能的胚胎干(ES)细胞可为移植提供几乎无限的供体来源。现已设计了一种可以在体外生成来自ES细胞的少突胶质细胞和星形胶质细胞前体,在人髓鞘质病的大鼠模型上进行的移植表明ES细胞源的前体同宿主神经元相互作用,在大脑和脊髓轴突作用更为明显。因此,ES细胞可为神经移植提供一种有价值的特异性体细胞前体的来源。源于囊胚阶段的内细胞群的ES细胞是全能干细胞,它们能分化为所有组织和细胞类型。最近的发现扩展了ES细胞的潜在作用,包括从人胚胎组织中分离出ES细胞,在绵羊和小鼠成体组织中将细胞核移入去核卵细胞,可产生同一…     

犬脂肪间充质干细胞的制备与初步应用

干细胞是一类具有自我更新和多向分化潜能的细胞,在一定条件下可以分化成为多种功能性细胞,其分类根据细胞发育阶段可分为胚胎干细胞(ESC)和成体干细胞(ASC);根据发育潜能可分为全能干细胞(如TSC)、多能干细胞(PSCs)和单能干细胞(如造血干细胞、神经干细胞等).干细胞移植到患者体内后,具有各种组织和器官的修复、再生潜能,对神经、血液、心脑血管、肝脏、肾脏等多个系统的重大疾病具有明显疗效,正在成为各国政府、科技界和产业界的战略必争领域.     

胚胎干细胞及种系嵌合体的研究进展

胚胎干细胞是着床前的囊胚内细胞团或早期胎儿的原始生殖细胞经体外分化抑制培养建立的多能性细胞系 ,具有与胚胎细胞相似的形态特征和分化潜能 ,体外培养时保持未分化状态 ,可以传代增殖。改变维持胚胎干细胞不分化的培养条件 ,胚胎干细胞可自发分化成多细胞结构。在一定诱导下 ,胚胎干细胞可向多个方向分化 ,并生成多种功能细胞。胚胎干细胞注入到胚泡期胚胎或与桑椹期胚胎聚合 ,可以参与包括性腺在内的各种组织的嵌合体的形成。胚胎干细胞在细胞分化与调控 ,胚胎发育 ,遗传病 ,肿瘤 ,免疫和组织或器官移植等研究中显示着广泛的应用前景。而种系嵌合体的获得是实现 ES细胞途径的决定步骤 ,低的种系嵌合率则是制约 ES细胞应用的关键。提高供体 PGCs在受体生殖腺中的比例 ,缩短 ES细胞的体外培养时间 ,以及注入早期发育阶段的受体胚胎等都能提高种系嵌合率。文章从多个方面综述了胚胎干细胞的最新研究成果 ,并着重以禽类 ES细胞为例论述了种系嵌合体的检测方法 ,种系嵌合率的影响因素以及提高种系嵌合率的方法     

精原干细胞及其在转基因技术中的应用

睾丸内生殖细胞分化起源于不断更新的干细胞小池,继而首先引起生精细胞(精原细胞)分化。这些定型细胞然后遵循一个固定的程序进行演化,它们首先同步化地进行六次有丝分裂,然后进入第一次减数分裂期。以形态学和细胞学标准,鉴别精原干细胞,根据注入不育者睾丸的分化活力,进行功能检测。目前干细胞的纯化和鉴定研究取得了日新月异的发展。生殖系生物学基本理论和多个领域中的临床前研究将会从中得益,同时附植前的基因转移为转基因技术开辟一条崭新的途径。细胞特征:①源于初生睾丸生长捕获生殖母细胞的少量精原干细胞(2～3×104/成年睾丸),主要分布在生精小管的周围;②细胞遗传学分析首次鉴定表明,它们是缺乏异染色质的圆形小细胞;③通过移植入缺乏生殖细胞的受体睾丸,在功能上表现为具有重建永久精子发生的能力;④基于α6β1整合素和CD9表达,可以获得较高浓度的精原干细胞,在转基因启动子驱动下异源表面蛋白质得以表达,可进一步纯化产物;⑤逆转录病毒载体能使基因转移先于移植,转基因后代随后即可产生。     

从冷冻胚胎获得的牛犊

<正> 全苏畜牧研究所在实验室移植牛的胚胎,1980年3月12日在苏联第一次获得晚期囊胚泡阶段的胚胎冷冻和解冻后移植成功的牛犊。 1979年6月12日从黑白花品种母牛3636号取得两个胚胎。一个移植给青年母牛3687号,1980年3月5日产了牛犊,编号62,初生重37公斤;第二个胚胎用乌克兰共和国科学院哈尔科夫低温生物学、低温医学研究所生产的《ЗП.00.00.00》冷冻装置进行冷冻。为了对胚胎进行     

葡萄内酯对SH-SY5Y神经细胞损伤模型保护作用的研究

为了研究葡萄内酯对人神经母细胞瘤细胞株(SH-SY5Y)损伤模型的保护作用,试验应用硫代硫酸钠(Na2S2O4)及L-谷氨酸分别建立缺氧缺糖细胞损伤模型及L-谷氨酸诱导细胞损伤模型,于37℃、5%CO2、饱和湿度的条件下培养和孵育4 h,采用MTT法检测细胞活性。结果表明:葡萄内酯可增加Na2S2O4诱导的缺糖缺氧细胞损伤模型及L-谷氨酸诱导的细胞损伤模型细胞的存活率。说明葡萄内酯对神经细胞损伤有保护作用。     

鸡胚盘细胞的研究进展

鸡胚盘细胞存在于未孵化的新鲜种蛋中，是一种具有多潜能性的胚胎干细胞。通过胚盘细胞移植法可制备体细胞或种系细胞嵌合体。如果将外源基因转入受体胚盘，受体胚后代则可能成为转基因鸡。利用胚盘细胞作为转基因载体，生产转基因鸡是研究禽类转基因的一种理想方法。作者就胚盘细胞及其研究进展给予综述。     

鸡胚原始生殖细胞诱导分化为神经元样细胞的研究

原始生殖细胞（Primordial Germ Cells：PGCs）是指能够发育为性细胞的前体细胞,可作为胚胎干细胞（ES）分离与克隆的一种新型材料,其形态、表面标志、体内外分化潜能及体外培养条件均类似于胚胎干细胞.体外培养过程中,在培养液中加入一定的诱导分化剂,PGCs细胞将发生定向分化.长期以来神经系统损伤和神经退行性病变是临床上难以解决的问题,由于原始生殖细胞具有发育全能性,可以在体外通过对其进行定向诱导,得到特定类型的细胞,这将使原始生殖细胞成为今后细胞替代疗法和组织器官移植的来源.本试验采用不同的诱导剂对PGCs进行诱导,以探讨PGCs细胞向神经细胞分化的适宜条件.     

浅谈糖尿病足的现代治疗

干细胞移植技术近年已应用到医学领域,所用干细胞有胚胎干细胞和成体干细胞两类。成体干细胞是指存在于体内多种分化成熟组织内,具有一定自我更新及分化潜能的幼稚细胞。造血干细胞,神经干细胞,肝脏肝细胞等,已应用于我国临床领域,对于糖尿病足的治疗,成体干细胞主要起血管再生作用,即在缺血肢体局部参与代偿性血管重建。对改善糖尿病足的预后具有重要意义。     

水牛胚胎生殖干细胞饲养层体系的建立

本试验对水牛胚胎生殖干细胞饲养层体系建立进行了研究。首先比较了组织块法和酶消化法培养水牛胎儿成纤维细胞的差异;其次探讨丝裂霉素处理水牛胎儿成纤维细胞的有效时间;最后以建立的饲养层体系培养水牛胚胎生殖干细胞。结果表明：（1）组织块法培养的细胞状态优于酶消化法,组织块培养法更适于水牛胎儿成纤维细胞的分离培养;（2）第三代的水牛胎儿成纤维细胞核型正常,状态良好,可用于饲养层的制备;（3）通过MTT和Brdu法检测,确定10mg／L的丝裂霉素C处理水牛胎儿成纤维细胞3．5h能有效抑制成纤维细胞增殖且细胞形态良好;（4）在本试验条件下制备的饲养层能有效维持水牛胚胎生殖千细胞至8代。