发根农杆菌介导西瓜转基因过表达体系的建立

【目的】建立发根农杆菌介导的西瓜转基因不定根过表达体系。【方法】探索利用野生型发根农杆菌K599侵染西瓜材料'Sugar Baby',诱导西瓜产生不定根的实验方法。借助该方法,将含有GUS基因和EGFP基因的过表达载体pCAMBIA3301和pCAMBIA1300-ProSuper导入发根农杆菌K599,侵染西瓜材料'Sugar Baby',通过常规PCR、qRTPCR、GUS染色和激光共聚焦显微镜检测,评价该过表达体系的效果。【结果】利用野生型和导入外源质粒的发根农杆菌均能成功诱导西瓜'Sugar Baby'产生不定根。PCR检测结果显示,携带pCAMBIA3301和pCAMBIA1300-ProSuper载体的发根农杆菌K599诱导产生的不定根阳性率达到100%。qRT-PCR、GUS染色和激光共聚焦显微镜检测均能成功检测到GUS基因和EGFP基因的过量表达。【结论】利用发根农杆菌K599诱导西瓜产生不定根介导基因过表达的方法,具有周期短,操作方便,转化率高的特点,可实现基因功能的快速验证,为西瓜根系相关基因的功能研究提供技术支持。     

发根农杆菌介导番茄遗传转化研究

本实验设置基因型、菌液浓度、外植体部位和感染方法四个因素，利用发根农杆菌的Ri质粒介导的TMV外壳蛋白和CMV外壳蛋白基因按L16（4^4*2^3）正交表转化番茄。用共培养的方法，诱导愈伤组织，经卡那霉素的抗性筛选，进一步培养得到转化再生的植株。经PCR检测证明目的已被导入。卡那霉素抗性愈伤组织频率的结果表明：不同品种不同菌液浓度的转化频率存在着显性差异，而外植体部位感染方法之间差异不显。     

发根农杆菌介导山定子遗传转化及发根再生植株

为了提高山定子的生根能力,用发根农杆菌转化山定子,诱导产生发根,并由发根诱导出再生植株。通过对不同发根农杆菌株系、培养基、共培养时间以及添加乙酰丁香酮（AS）的研究,优化了发根农杆菌转化体系。当用添加AS（100μmol﹒L-1）的菌液侵染植株切段30 min,共培养3 d,在无植物生长调节剂的固体1/4MS培养基上诱导产生发根时,发根诱导率最高,达到88.89%。将发根根段在MS+BA 2.0 mg﹒L-1 +IBA 0.1 mg﹒L-1+GA3 0.1 mg﹒L-1的再生培养基上,通过愈伤组织的诱导得到再生植株,再生率3%。     

非组培依赖的发根农杆菌介导的薄壳山核桃转化体系构建

[目的]建立一种简单高效的农杆菌介导薄壳山核桃Caryaill inoinensis的转化体系.[方法]以薄壳山核桃钟山的幼苗为材料,采用四因素(菌种、菌液浓度、处理部位、苗龄)三水平正交试验进行农杆菌侵染薄壳山核桃茎部诱导发根,并通过DNA检测及GFP荧光验证.[结果]影响发根农杆菌侵染薄壳山核桃生根诱导率的因素大小...     

利用发根农杆菌诱导毛状根的研究进展

对发根农杆菌进行了简单的介绍,重点综述了利用发根农杆菌产生发根的影响因素以及检测方法及应用情况.     

GUS基因在农杆菌和甜瓜中的表达差异研究

以农杆茵和转化的甜瓜组织为试验材料,通过组织化学染色法,来研究GUS基因在农杆菌和甜瓜组织中的表达.结果表明,含有GUS基因的农杆茵和甜瓜愈伤组织都能被染成蓝色,而不含有GUS基因的农杆菌和甜瓜愈伤组织没有被染色,因此在检测转基因植株时,可以减少或避免假阳性的出现,为植物的转化奠定了坚实的基础.     

超声波辅助发根农杆菌对黄瓜遗传转化的影响

 由于超声波处理可增加农杆菌与外植体之间的接触面积, 提高农杆菌对外植体的转化频率。本试验用野生型发根农杆菌A4 菌株感染黄瓜无菌苗的子叶和下胚轴, 建立了黄瓜的发根遗传体系。并对超声波处理时间、外植体放置方向、预培养时间、外植体类型、乙酰丁香酮等影响因素进行了优化。     

黄瓜‘中国龙’毛状根诱导体系的建立

黄瓜是全球范围内重要的经济作物。建立黄瓜基因组测序品种‘中国龙’的毛状根诱导体系,可为今后分析黄瓜基因功能、挖掘黄瓜优良基因提供技术支撑。本文以‘中国龙’为材料,从种子表面灭菌方法、发根农杆菌的侵染浓度和共培养时间3方面,研究发根农杆菌菌株K599对‘中国龙’毛状根诱导的情况。结果表明,75%(φ)的乙醇先处理种子30 s,再用5%的次氯酸钠灭菌5~10 min的种子消毒方法,农杆菌菌液OD_(600)值在1.2左右时进行侵染,共培养2天,是获得‘中国龙’毛状根的适宜组合方法。PCR扩增结果证实,经这样诱导出的黄瓜毛状根中,发根农杆菌Ri质粒的rol C基因已在黄瓜毛状根基因组中整合并得到表达。试验探索出了一套适合‘中国龙’毛状根诱导的方法。     

发根农杆菌介导的荔枝LcMYB1转化烟草叶片的研究

利用荔枝果皮花青苷生物合成的关键调节基因LcMYB1为标记,构建植物表达载体pBA002-LcMYB1,电转法转入发根农杆菌A4菌株,通过叶盘法转化烟草K326。结果表明,烟草叶片侵染一周后长出白色的毛状根,约3周后部分毛状根逐渐变成红色,毛状根诱导率为100%,红色毛状根诱导率为19.9%。当筛选培养基中添加5 mg ? L-1 Basta,毛状根诱导率降低为33.3%,但红色毛状根诱导率提高到75%。高效液相色谱分析表明,红色毛状根中积累矢车菊素–3–葡萄糖苷和矢车菊素–3–芸香糖苷,PCR检测证实红色毛状根是由LcMYB1的转入引起的。实时荧光定量PCR表明转LcMYB1可以诱导烟草毛状根中花青苷生物合成相关的结构基因和调节基因表达。     

农杆菌介导小白菜的gus基因瞬间表达

用组织化学定位法检测小白菜ｇｕｓ基因瞬间表达情况,分析三种农杆菌对小白菜的侵染能力,结果表明：ＡＧＬ－１对小白菜的侵染能力最强,ＥＨＡ１０５次之,ＬＢＡ４４０４最弱;通过培养后定时测定ｇｕｓ基因瞬间表达情况,确定农杆菌与小白菜子叶的最佳共培养时间２－３ｄ。     

根癌农杆菌介导寒富苹果转化体系的建立

以寒富苹果组培苗叶片为外植体,利用植物表达载体上含潮霉素抗性基因的根癌农杆菌EHA105(pCAMBI-A1301)和含卡那霉素抗性基因的根癌农杆菌EHA105(pCAMBIA2301)对影响寒富遗传转化效率的因素进行系统研究。结果表明,寒富叶片对潮霉素反应敏感,在附加潮霉素的培养基上寒富叶片褐化较为严重。潮霉素和卡那霉素适宜的筛选质量浓度分别为4 mg.L-1和25 mg.L-1。农杆菌介导寒富苹果转化体系的建立以MS+TDZ 2.0 mg.L-1+NAA 0.5 mg.L-1培养基为叶片离体再生芽培养基。适宜的转化条件为:菌液浓度D 600nm=0.5、叶片外植体在菌液浸泡8 min、共培养时间为3～4 d、推迟4 d进行筛选培养。抗性基因对转化效率具有明显的影响,EHA105(pCAMBIA2301)的平均抗性芽再生率(0.96%)比EHA105(pCAMBIA1301)的平均抗性芽再生率(0.58%)高出几乎50%,EHA105(pCAMBIA2301)的抗性芽再生率最高达1.87%。GUS组织化学染色和PCR鉴定结果表明本研究获得了寒富苹果转基因植株。     

甜瓜品种GT-1植株再生体系的建立(英文)

为了建立高效稳定的甜瓜作物的植株再生体系,研究了甜瓜品种CT-1在16种培养基上的植株再生情况。结果显示:将从5 d龄甜瓜无菌苗上切取的子叶外植体接种在MS+6-BA1 mg／L的不定芽诱导培养基上,黑暗条件培养3 d,再转至光下继续培养,诱导出高效不定芽丛。再经过在MS+6-BA0．05mg/L伸长培养基上培养后,将无根不定苗转到不含激素的MS培养基上进行生根诱导,获得完整植株。通过这种培养程序,获得了高达100％的不定芽诱导率,平均每个外植体上诱导出14株健壮植株。这项研究为甜瓜的遗传转化打下良好的基础。     

Agrobacterium rhizogenes-mediated genetic transformation in Cichorium spp.: hairy root production,inulin and total phenolic compounds analysis

Chicory (Cichorium spp.) is a valuable vegetable crop worldwide for its edible leaves and for the production of coffee substitutes from roots. Agrobacterium rhizogenes-mediated genetic transformation of two species of chicory (C. intybus and C. endivia) was investigated using Agrobacterium strain K599 harbouring p35SGFPGUS+ plasmid and two types of explants: leave and leaf stalks. This Agrobacterium strain proved to be competent in the transformation with transformation rate about (23.1%) in leaf explants of C. intybus. However, the transformation rate with C. endivia was much lower (3.6%). Moreover, the hairy roots appeared from different infection sites of the leaf explants. Several hairy roots of the two species were acquired, out of them 11 clones (C. intybus) and two clones (C. endivia) were selected due to their fast-growing character. Growth of hairy roots was determined on the basis of total root biomass accumulation. It was found that the liquid MS-basal medium seems to be the most suitable for biomass production. PCR analysis revealed foreign DNA integration in the selected transgenic hairy root clones. Notable, the transgenic hairy roots exhibited substantially higher growth rates and accumulated higher amount of inulin than non transgenic roots (WT). Also, the total phenolic compounds were determined.     

甜瓜杂交种SSR指纹图谱的构建

以2个甜瓜杂交品种(系)的种子东方蜜1号和01-31为试材,从63对SSR引物中筛选出10对扩增产物具有稳定多态性的引物,这些引物分布在甜瓜整个基因组,每对引物可以检测到2～4个数目不等的多态性片段(allele),共27个多态性片段,平均为2.7个,片段大小介于85￣270bp之间,并从入选的10对SSR引物中选出7对构建了这2个甜瓜杂交种的指纹图谱。在比较分析各试材图谱的基础上,探讨了品种指纹图谱的统计学方法,并对构建的2个甜瓜杂交种的指纹图谱进行了可信度分析,建立了适于种子检验中使用的标准SSR标记指纹图谱。实验表明,利用SSR技术进行甜瓜杂交种的纯度鉴定是可行的、有效的。     

甜瓜再生体系研究进展

20世纪70年代以来,以细胞工程和基因工程为主题的现代生物技术应用于作物品种改良,把育种技术从宏观水平提高到微观水平,为品种改良提供了一条全新途径。在甜瓜品种改良过程中,建立高效的甜瓜再生体系是甜瓜细胞工程和基因工程中的关键性基础工作。对甜瓜进行遗传转化研究首先要建立一套甜瓜的离体再生体系。文章综述了甜瓜再生体系建立的过程中,外植体基因型、部位、生理年龄、培养基组成、激素种类和浓度等主要因素对植株再生的影响,分析了目前甜瓜再生体系在建立中存在的问题,并展望了再生体系技术的应用前景,旨在为甜瓜再生体系的研究提供理论依据。     

苦瓜下胚轴的离体再生体系

为了建立高频的苦瓜离体再生体系,为苦瓜遗传转化提供技术基础,筛选了最适消毒方法和外植体类型。以MS培养基为基础培养基,添加不同浓度激素组合,筛选最适于苦瓜不定芽诱导、伸长和生根的培养基。最佳的消毒方法为:用水浸泡去壳的种子15 min,在超净工作台中用75%酒精浸泡30 s后再用4%NaClO浸泡6 min,用无菌水冲洗4～5遍,污染率为0,发芽率为98%;最佳的愈伤组织诱导培养基为MS+2.5 mg·L~(-1)6-BA+0.01 mg·L~(-1)IBA,愈伤组织密度为0.79 g·cm~(-3),不定芽的分化率为39%,最佳外植体为下胚轴(12 d),诱导率为41%;最佳的增殖培养基为MS+1.0 mg·L~(-1)6-BA+0.005 mg·L~(-1)IBA;最佳的生根培养基为MS+0.1 mg·L~(-1)IBA,移栽存活率为74%。初步建立了苦瓜离体再生体系。     

不同甜瓜品种再生体系的比较研究

以不同基因型的甜瓜品种为材料,研究了不同激素组合,Ag NO3质量浓度以及基因型对甜瓜再生的影响。结果表明,不定芽诱导中最适宜的激素组合为MS+1.0 mg·L-16-BA+0.5 mg·L-1ABA(脱落酸),在此培养基上薄皮甜瓜‘IVF501’和‘IVF509’的不定芽诱导率分别为88.00%、79.60%,厚皮甜瓜‘IVF525’和‘IVF604’的不定芽诱导率分别为76.50%、74.75%。不同质量浓度的Ag NO3对甜瓜不定芽分化的影响有差异,1.0 mg·L-1Ag NO3有抑制愈伤组织分化的作用,能有效减少玻璃化的发生,当质量浓度为2.0 mg·L-1时,虽然明显地抑制了愈伤组织分化,但同时降低了不定芽分化率。薄皮甜瓜‘IVF501’与厚皮甜瓜‘IVF525’具有较高的不定芽诱导率,将诱导的不定芽转入伸长培养基中(MS+6-BA 0.05 mg·L-1),分化的不定芽能够伸长长大,在生根培养基中(MS+IAA 0.4 mg·L-1)容易生根。薄皮甜瓜获得完整再生植株需50~60 d,厚皮甜瓜获得完整再生植株需60~75 d。