马齿苋离体培养再生体系的建立

以马齿苋幼嫩叶片和茎段为试验材料,对外植体灭菌、愈伤组织诱导、不定芽分化和试管苗生根的最佳条件进行研究,以期建立马齿苋再生技术体系,并为马齿苋的规模化繁殖和遗传改良等研究奠定基础。结果表明,最佳外植体灭菌方法为：用0.1%的升汞溶液浸泡8 min;最佳愈伤组织诱导培养基为MS+2,4-D 0.5 mg/L+6-BA 0.5 mg/L;最佳不定芽分化培养基为MS+6-BA 5.0 mg/L+NAA 0.4 mg/L;最佳生根培养基为1/2MS+IBA 2.0 mg/L。     

打破菜豆种子硬实条件优化的研究

为优化解除菜豆种子硬实的条件,本试验以盛冠硬实种子为材料,通过比较不同温度的温水浸种、热水浸种和低温贮藏处理不同时间对解除种子硬实的影响,筛选出最佳的硬实破除条件。结果表明,盛冠菜豆种子含水量为14.28%时,种子硬实率为38%;未处理的硬实种子发芽率、发芽势和活力指数分别为26.5%,17%和23.17;经温水浸种、热水浸种和低温贮藏处理后的硬实种子均能一定程度解除种子硬实进而促进种子萌发,其中,各自处理的最佳条件分别是：60℃恒温浸种30 min,80℃恒温浸种 2 min以及-20℃贮藏7天。最后,比较3个处理间最佳的硬实破除条件,同时,考虑到菜豆种植的实际情况和硬实破除的最佳效果,对硬实率较高的盛冠菜豆种子用60℃恒温浸种30 min较适宜。     

杜梨子叶离体再生体系的建立

为梨树品种改良、遗传转化及功能验证奠定基础,以杜梨(Pyrus betulaefolia)子叶外植体为试验材料,研究了基本培养基、植物生长调节剂、暗培养时间、碳源、外植体等因素对其再生能力的影响,筛选出适合杜梨不定芽分化的培养及生根培养条件,建立杜梨子叶的再生体系。结果表明,子叶诱导不定芽生长最佳培养基为NN69+6-BA5mg/L+IBA0.05mg/L+蔗糖35g/L,再生频率为100%;出芽后最佳继代培养基为MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L,平均再生芽数4.84;诱导不定芽生根最佳培养基为1/2MS+IBA1.0mg/L+蔗糖30g/L,生根率为80%。通过上述条件的优化,建立了杜梨子叶高效的再生体系。     

羊踯躅离体叶片再生体系的建立

为了建立羊踯躅规模化无性繁殖和高效遗传转化体系,以羊踯躅试管苗叶片为外植体,探讨了基本培养基类型、叶片切割方式、叶位、暗培养时间及不同激素组合等因素对叶片再生不定芽的影响。结果表明：WPM培养基为最适基本培养基。垂直于主脉切割一刀并去除叶柄和叶稍的叶片再生不定芽的频率最高。羊踯躅试管苗中、上部叶片的再生能力较强,其中第5和第6位叶的不定芽诱导效果最佳。初始暗培养有利于叶片再生,暗培养10~15天的效果最佳。诱导羊踯躅试管苗叶片再生不定芽的适宜培养基为WPM+TDZ 1.0 mg/L+IAA 1.0 mg/L,其不定芽分化率和平均分化芽数分别达到82.3%和7.2个。     

油柿叶片离体再生体系的建立

以油柿叶片为材料开展了离体培养研究,旨在建立其再生体系,为转基因操作奠定基础。结果表明,油柿叶盘在MS（1/2N）+IBA0.1mg/L+ ZT3.0mg/L培养基上,经前期暗处理3周后移至正常光照下培养的再生效果最好,其不定芽再生率和外植体平均不定芽数最高,分别为80.5%和（4.1±0.8）个。再生苗接种于添加IAA和IBA各0.5mg/L的MS(1/2N)培养基上,4周时生根率可达92%,成功地建立了油柿叶片的离体再生体系。     

加工番茄离体再生体系的建立

以加工番茄‘亚心98-1’和‘里格尔87-5’2个品种的子叶作为外植体,研究不同激素组合对其出愈和诱芽的影响。结果表明,激素的种类和浓度对加工番茄外植体出愈率的影响没有差异,但是诱导形成的愈伤组织形态和不定芽存在差异,ZT与IAA组合对不定芽的诱导效果高于6-BA与IAA组合,不定芽诱导率最高的培养基为MS+ZT 0.5 mg/L+IAA 0.2 mg/L。品种之间存在差异,‘亚心98-1’比‘里格尔87-5’更易产生较高比率的正常芽。再生芽在1/2MS + 0.1 mg/L IAA生根培养基上能正常生根,并发育成完整的小植株。     

大丽花叶片离体再生体系的建立

为了建立大丽花高效遗传转化体系及解决今后通过植物基因工程选育新种质的问题,以大丽花为试材,研究光照条件、叶片生理状态、激素浓度等因素对叶片再生的影响,建立以大丽花离体叶片为外植体的高频再生体系。研究结果表明：以顶部充分展开的25天叶龄的无菌苗叶片为外植体,在含KT 7 mg/L+NAA 0.05 mg/L的MS分化培养基上,暗培养15天后转到光下培养,20天后开始有不定芽直接从叶片上分化产生,出现的高峰期在接种后30~35天,芽分化率最高可达86%,平均叶片再生芽位点数为5.0。待不定芽长至2 cm以上时,将其剪下转到生根培养基1/2MS+ NAA 0.1 mg/L上培养后得到生根的完整植株。     

石刁柏花药离体培养及单倍体植株再生的研究

1988至1990年进行了石刁柏花药离体培养,将采集不同时期花蕾接种,低温处理,激素配比,花药培养过程中形态学及花粉粒发育途径,愈伤组织诱导及其类型,花药愈伤组织再分化和染色体倍性,单倍体植株的再生及染色体加倍后入土移栽等方面,均做了较深入的研究,并获得了超雄株即纯合二倍体。     

薄荷叶片离体再生体系的建立

本试验以薄荷试管苗叶片为外植体,研究了激素、光照、褐变抑制剂对不定芽诱导的影响,进而筛选出合适的生根培养基。研究结果表明:薄荷叶片最佳不定芽诱导的培养基为MS+1.4 mg/L TDZ+0.2 mg/L NAA+30 g/L蔗糖+5.5 g/L琼脂,诱导率达27.78%;暗培养20 d后再转接一次,叶片不定芽诱导率提高至64.29%,褐化率低至11.90%;最佳生根培养基为MS+0.1 mg/L NAA+20 g/L蔗糖+5.5 g/L琼脂,生根率达97.50%;再生苗经生根、炼苗后移栽,植株成活率达100%。本试验建立了薄荷叶片离体再生体系,为薄荷无菌苗生产和遗传转化研究提供了技术支撑。     

宁夏优质水稻品种D10高效再生体系的建立

为了利用基因沉默技术定向改良宁夏香稻品种,短期内建立可获得成苗的高效成熟胚再生体系,以宁夏优质水稻品种D10成熟胚作为外植体,通过植物组织培养的方法,研究了培养基、外源激素、光照和温度对外植体培养及再生的影响。结果表明：不同培养基对愈伤组织诱导率有着不同的影响,MS培养基最低,N6D培养基最高;32℃持续光照培养的愈伤组织明显优于30℃ 12 h/d光照培养;在分化培养基中添加TDZ,发现浓度为1 mg/L的TDZ与低浓度的IAA结合使绿苗分化率提高到100%;另外添加2 mg/L ABA的N6D培养基中愈伤组织诱导率为100%。最终该品种的最优再生体系为：32℃持续光照培养并添加ABA 2 mg/L的N6D培养基;分化培养基为B5+TDZ 1mg/L+IAA 0.2mg/L;生根培养基为1/2MS+KT 2 mg/L+NAA 0.2 mg/L+CH 2 g/L+Sorb 30 g/L。本研究建立了宁夏优质水稻品种D10成熟胚再生体系。     

4个优良石榴品种叶片高频再生体系的建立

为提高石榴叶片再生率,增加再生芽数量及缩短再生周期,以‘泰山红’‘、泰山三白甜’‘、皮亚曼’‘、牡丹’4个石榴品种盆栽苗和无菌苗叶片为试材,研究培养基类型、生长调节剂配比、叶片来源和培养步骤对不定芽再生的影响。结果表明：MS是叶片再生最适培养基类型;无菌苗叶片比盆栽苗叶片更易再生不定芽;BA3.0mg/L+KT1.0mg/L+IBA0.3mg/L是叶片愈伤组织诱导、分化和不定芽形成过程中生长调节剂最佳配比;先在液体培养基上培养3~5天,再转至固体培养基比仅在固体培养基上效果更好,叶片再生率最高达98.47%,出芽数达7.51个。叶片不定芽的最佳单芽培养基和增殖培养基分别为B5+BA0.6mg/L+IBA0.5mg/L+椰汁100mL/L+PVP2.0g/L+GA31.0mg/L和B5+BA0.8mg/L+IBA0.5mg/L+椰汁100mL/L+PVP2.0g/L,增殖系数为5.56。适宜的生根培养基为B5+IBA1.0mg/L+椰汁100mL/L,生根率为89.63%。由此建立了石榴叶片高频再生体系。     

梅花品种"美人"叶片离体再生体系建立

以“美人’梅离体培养的叶片为材料进行愈伤组织诱导再生研究，诱导过程分两步，第一步是愈伤组织的诱导，诱导过程中生长素2,4-D起了决定性的作用，并且以液体培养基为佳，而且暗培养的愈伤组织再分化率明显高于光培养。具体培养基为1／2WPM＋5mg／L 2,4-D；第二步是在愈伤组织诱导出之后，进一步诱导愈伤组织再生出植物，在经过7d液体培养基的诱导之后将离体叶片转入1／2WPM＋1．0mg／L 6-BA＋0．1mg／L NAA＋8mg／L AgNO3＋100mg／L水解乳蛋白培养，再分化率可以达到24．25％。愈伤组织分化出苗之后，进一步诱导生根，“美人”梅最佳生根培养基是1／2WPM＋0．5mg／L NAA。     

不同预处理对枣花药愈伤组织诱导的影响

以赞皇大枣、冬枣、月光枣、阜平大枣和辣椒枣为试材,研究了不同预处理在花药愈伤组织发生中的作用。结果表明,甘露醇预处理的浓度和时间均对花药出愈率有显著影响,阜平大枣和赞皇大枣2个品种的花药出愈率均以0.1 mol/L处理3 d的最高,分别达到了98.89%和82.22%,随处理时间的进一步延长花药出愈率会显著降低,褐化率与出愈率之间并没用明显的相关性;4℃低温预处理没有显著促进枣花药愈伤组织的诱导,其中月光枣和冬枣2个品种的出愈率甚至有显著降低;35℃高温预处理的效果因品种而异,有的品种出愈率会显著提高,有的会显著降低,有的则无显著变化。     

美洲黑杨与大青杨杂种无性系离体培养和叶片再生体系的建立

以美洲黑杨与大青杨杂种(Populus deltoids Bartr.×Populus ussuriensis Kom.)无性系的茎段作为外植体,研究了杂种无性系的离体培养及叶片再生体系,探讨了不同激素组合对杂种无性系不定芽的诱导、分化、增殖以及生根的影响。结果表明：杂种无性系茎段的最佳消毒时间为5 min;最佳分化培养基为MS + 6-BA 2.0 mg/L + NAA 0.1 mg/L + ZT 0.5 mg/L;MS + 6-BA 0.5 mg/L + NAA 0.05 mg/L培养基可对不定芽实现增殖与复壮;最佳生根培养基为MS + NAA 0.3 mg/L。5个杂种无性系中,无性系177的分化能力最强;叶片近轴面向上放置培养,其不定芽再生能力显著高于叶片近轴面向下放置培养;叶片、茎段及根段的分化能力大小依次为叶片>茎段>根段。本研究优化了美洲黑杨与大青杨杂种的组织培养体系,为杂种无性系快速繁殖和遗传转化研究奠定了基础。     

葱兰的离体培养及再生体系研究

为了快速获得健康的葱兰幼苗,通过优化离体培养条件,建立葱兰高效的离体再生体系。利用葱兰叶片、鳞叶和顶芽作为外植体进行了愈伤组织和植株再生体系研究。结果表明,顶芽为最适外植体;丛生芽诱导和增殖的最适培养基为MS+TDZ 0.5 mg/L +NAA 0.1 mg/L,其次是MS+6-BA 0.5 mg/L+ NAA 0.1 mg/L;生根培养基为1/2MS+ IBA 0.5 mg/L,生根率为100%,为葱兰的工厂化生产提供技术参考。     

杨树叶片高效离体再生系统的构建

利用速生杨树（Populus.tomentosa Car）叶片为外植体建立离体培养体系,结果表明,叶脉处和叶柄处,极易发生不定芽;芽大多是从叶片上直接产生;培养基中BA浓度是影响不定芽形成的关键;BA浓度在05~2.0mg/L范围内均有不定芽发生,BA 1.0mg/L与NAA 0.05mg/L搭配有利于不定芽的形成,培养基中添加GA3 0.1~0.2mg/L可以提高不定芽的发生频率,增殖培养基采用MS+BA 0.5mg/L+NAA 0.05mg/L+GA3 0.05mg/L,不仅能够快速增殖,而且芽苗粗壮,玻化率降低。生根过程采用过渡培养效果较好,ABT3生根粉的加入,使试管苗质量大为提高,在此基础上建立起杨树叶片离体再生系统,利用该体系能够获得高的芽苗再生频率,但是不同品种间略有差异。     

沙田柚遗传转化再生体系的建立

以沙田柚的实生苗不同外植体为对象,进行了沙田柚遗传转化再生体系建立研究。研究结果表明：以实生苗上胚轴作为外植体,以MS无机盐＋100 mg/L肌醇＋0.2 mg/L维生素B1+1 mg/L维生素B6+1 mg/L烟酸+3％蔗糖＋0.8％琼脂（pH5.8）＋5 mg/L 6-BA为不定芽诱导培养基,暗培养7 d后,转移至光/暗周期16/8 h的条件下培养,不定芽的分化率高达91.1%;不定芽在1/2MS基本培养基＋3％蔗糖＋0.7％琼脂＋1.5 mg/L IBA＋0.2%活性炭的生根培养基,生根率高达80％;以卡那霉素作选择剂时,选择浓度为50mg/L。