应用生物化学方法对侧耳属栽培菌株分类鉴定的研究

应用生物化学鉴定分类方法对侧耳属内的28个栽培菌株菌丝24℃恒温培养15天后,提取样品并对电泳后的酯酶同工酶谱带进行聚类分析。结果表明:供试的28个来源不同的侧耳属栽培菌株在相似系数为2.72时分为6大类,为侧耳属的亲缘关系鉴定提供参考。     

REP-PCR技术在平菇栽培菌株鉴定中的应用

研究了REP-PCR技术在平菇栽培菌株分类鉴定中的应用。结果表明,REP-PCR技术对供试平菇菌株扩增出的条带清晰,重复性好,多态性高。聚类分析表明,在聚类重新标定距离为11时,23个供试菌株聚类为六大类群;在聚类重新标定距离为17时,23个菌株聚类为四大类群:杏鲍菇、白灵菇和秀珍菇为独立的类群,20个糙皮侧耳栽培菌株聚类在一起。因此,REP-PCR技术可以应用于侧耳属种及菌株水平的鉴定。     

白灵侧耳栽培菌株遗传多样性研究

应用分子生物学技术对白灵侧耳栽培菌株进行遗传多样性研究,在DNA水平上分析白灵侧耳栽培菌株的种质遗传学差异,为白灵侧耳菌株鉴定提供快速有效稳定的技术和方法。     

1株野生红侧耳菌株分离鉴定及人工驯化栽培

【目的】对1株野生侧耳菌株PD2021进行分离鉴定及人工驯化栽培,为该菌株的大规模栽培及开发利用提供理论依据。【方法】以从云南省西双版纳州景洪市采集到的1株野生侧耳菌株PD2021为试材,采用组织分离法获得其母种,结合子实体形态学观察、侧耳属DNA条形码和分子系统发育分析界定其分类地位,并通过培养特性试验探究其生物学特性及出菇条件,采用正交试验筛选人工室内栽培该菌的栽培配方。【结果】通过形态学观察发现,PD2021菌株实体为呈淡米黄色,孢子印为白色,菌盖成熟时边缘呈波浪形花瓣状,菌盖边缘与中部交界处有一圈环状、参差不齐的条纹、整个子实体似一朵花子。结合侧耳属DNA条形码分析结果,将PD2021菌株鉴定为红侧耳花形变种（Pleurotusdjamor var. floreus）。PD2021菌株的ITS序列和延伸因子基因（EF-1α）序列均与P. djamor相似性最高,处于系统发育进化树中的同一分支,但二者分支长短不一,表明二者序列出现变异,进一步证明PD2021菌株为红侧耳的变种。该菌株最适生长的碳源为可溶性淀粉,最适生长的氮源为酵母粉,最适温度为26℃;菌丝耐高温能力强,44℃下处...     

基于rDNA PCR-RFLP分析的侧耳属分子系统学研究

对侧耳属18个种52个菌株以及双孢蘑菇、香菇和亚侧耳各1个菌株的28SrDNA5’端、ITS和IGS1进行PCR扩增,扩增4个属的28SrDNA5’端均得到一长度为1．46kb的片段,侧耳属ITS扩增片段长680bp,亚侧耳700bp,双孢蘑菇和香菇720bp,侧耳属IGSl扩增片段长度发生变异,红平菇和桃红侧耳为1．1kb,其他侧耳为1．0kb,亚侧耳700bp,双孢蘑菇和香菇1．3kb。对扩增片段分别用7种限制性内切酶酶切后进行聚类分析,结果表明双孢蘑菇、香菇和亚侧耳可与侧耳分开,18种侧耳分为五大类：具核侧耳,红平菇和桃红侧耳,鲍鱼菇和囊盖侧耳,金顶侧耳,其他侧耳聚为一类,鲍鱼菇和囊盖侧耳,红平菇和桃红侧耳都只代表1个种。     

江西大型真菌系统分类学研究:侧耳属及栽培驯化

率先对江西的野生侧耳属真菌进行了系统的分子和形态学研究。采集到江西野生侧耳标本4份,经鉴定,代表了3个物种,分别为糙皮侧耳(Pleurotus ostreatus)、巨大革耳(P. giganteus)和美味侧耳(P. sapidus),其中巨大革耳为江西新记录种。从野生子实体中分离得到4个菌株并进行了驯化栽培试验,确定了出菇的基本条件。其中,美味侧耳(JAUCC 0916)属于低温种,头茬菇生物学效率为112.8%;糙皮侧耳(JAUCC 0733和JAUCC0917)为广温种,生物学效率为126.62%;巨大革耳(JAUCC 0730)为广温种且覆土栽培产量较高。对江西省报道的共6种侧耳属真菌做了系统的分类学综述,并编制分种检索表。     

28SrDNA PCR-RFLP分析在侧耳属系统发育研究中的应用

对侧耳属18个种52个菌株及3个其它属的菌株的28S rDNA 5‘端进行PCR扩增，得到长度约为1．46kb的片段。对该片段分别用7种限制性内切酶AluⅠ、BamHⅠ、HaeⅢ、HhaⅠ、HinfⅠ、MspⅠ、TaqⅠ酶切，结果表明，MspⅠ酶切片段多态性最高，AluⅠ对侧耳属无酶切多态性。聚类分析结果表明，菌株间的相似系数为0．569－1．000，在92％相似水平可将侧耳分为5大类：Ⅰ、红平菇和桃红侧耳；Ⅱ、鲍鱼菇和囊盖侧耳；Ⅲ、具核侧耳；Ⅳ、金顶侧耳；Ⅴ、其它所有供试侧耳。     

两株野生侧耳属菌株鉴定及生物学特性研究

本文对采自吉林省不同寄主植物的两株野生侧耳属菌株1和菌株2进行鉴定和生物学特性研究,基于形态学和分子生物学鉴定结果表明,这2个野生菌株均为肺形侧耳(Pleurotus pulmonarius)。通过选取不同碳源、氮源以及p H对2株菌株进行培养,最终结果表明菌株1菌丝最适生长条件为蔗糖、硝酸钾、p H 6;菌株2菌丝的最适生长条件为蔗糖、硫酸铵、p H 7。     

一株野生侧耳属菌株的分离鉴定与生物学特性

采用组织分离的方法从野生侧耳属菌株(Pleurotu ssp.)子实体上分离得到菌株XZG-ts,以其基因组为模板扩增获得该菌株的ITS序列,序列分析结果表明,菌株XZG-ts与Gen Bank中来自于澳大利亚、印度和中国云南的3个肺形侧耳菌株聚为一簇,组内核苷酸一致率为100%,而与侧耳属其他4个种的10个菌株核苷酸一致率为98.10%~99.06%,依此结果将XZG-ts菌株鉴定为P.pulmonarius。进一步研究了不同碳源、氮源、碳氮组合、温度及p H值对菌株XZG-ts菌丝生长的影响,结果表明,最适碳源为果糖,氮源为酵母膏,最佳碳氮源组合为果糖1%、麦芽糖1.0%、酵母膏0.2%、蛋白胨0.3%,最适生长温度为25℃,最适p H值为6。     

11个优良侧耳菌株的同工酶及可溶性蛋白综合分析

本试验采用电泳技术对白灵侧耳、阿魏侧耳、刺芹侧耳、鲍鱼侧耳、糙皮侧耳等侧耳属的5个种11个优选菌株的液体菌种，进行了酯酶同工酶、过氧化物酶同工酶、漆酶同工酶及可溶性蛋白图谱分析。结果表明单独利用一种同工酶或可溶性蛋白图谱难以区分供试菌株，如将各图谱进行综合聚类分析则可准确区分。综合聚类分析表明，所选菌株均为不重复菌株，在2．8286≤D≤3．000（最短距离法）和3．0006D≤3．317（最长距离法）水平上均可聚为5大类，即侧耳属5个不同种，这与它们各自的形态学特征相一致。     

左家地区侧耳类菌品比试验研究

通过对目前左室地区栽培的7个侧耳类菌株进行制种和栽培试验，筛选出了适合左家地区栽培的优良菌株。     

一株野生平菇的鉴定及营养生长条件研究

利用ITS方法和进化树构建对1株自分离的野生侧耳属真菌进行了分析鉴定,通过单因素试验研究了影响该真菌菌丝生长的环境和营养条件.结果表明:经鉴定,该侧耳属真菌为平菇,宁强平菇菌株与其他平菇菌株亲缘关系远,自分离和选育的镇巴平菇和宁强平菇亲缘关系较远.该平菇菌丝生长的最佳碳源为蔗糖,最佳氮源为蛋白胨,生长的最佳pH在6.0～6.5,最适温度25℃,最佳碳氮比10:1.     

ERIC-PCR技术在平菇菌株鉴定中的应用

研究了ER IC-PCR技术在平菇栽培菌株鉴定中的应用.结果表明,在22个供试平菇菌株和对照香菇菌株中,ER IC-PCR扩增出的条带清晰,重复性好,多态性高.聚类分析表明,在聚类重新标定距离为15的水平上,23个菌株聚类成8大类群:糙皮侧耳栽培菌株分别归属第1和第2大类群;秀珍菇5号、4011、白灵菇2号、杏鲍菇、鲍鱼菇和香菇分别独立地聚类为不同的大类群.在聚类重新标定距离为20时,鲍鱼菇和香菇聚类在一起,其他平菇菌株聚类在一起.这表明ER IC-PCR技术可以应用于平菇栽培菌株的鉴定,但也说明该技术在食用菌分类鉴定应用上的局限性,同时也说明食用菌需要多相分类鉴定.     

金顶侧耳优良栽培菌株在山西的筛选

对来自不同地区的8个金顶侧耳菌株进行季节栽培试验,从栽培周期、子实体性状、产量和生物学效率等几个方面,筛选适宜山西地区季节性栽培的优良菌株,结果表明5号菌株最优。     

基于 COX III 基因的侧耳属真菌遗传多样性分析

侧耳属真菌是具有重要经济价值的食药用真菌, 对该属真菌的准确鉴定对菌种的分离纯化和提高 菌株生产潜力有重要意义。 其种类繁多, 种群复杂, 形态差异大, 且常会受到环境的影响, 分类鉴定不易, 常 会引起争议。 首次将 COXIII 基因用于真菌的遗传多样性分析, 侧耳属菌种经 PCR 扩增和测序后得到 13 种侧 耳属真菌的 COXIII 部分序列, 并使用粒子群算法得到 DNA 序列的二维聚类图, 用 PHYLIP 软件构建其系统演 化树, 探讨侧耳属真菌的系统亲缘关系。 结果表明： 金顶侧耳、 桃红侧耳和鲍鱼菇彼此之间以及与其他侧耳属 菌种的亲缘关系较远; 阿魏蘑和白阿魏蘑之间的关系十分密切; 糙皮侧耳、 阿魏蘑、 杏鲍菇关系较近。 结合其 他学者的研究和形态学证据, 说明 COXIII 基因可以很好地对侧耳属进行遗传多样性分析。     

基于COX Ⅲ基因的侧耳属真菌遗传多样性分析

侧耳属真菌是具有重要经济价值的食药用真菌,对该属真菌的准确鉴定对菌种的分离纯化和提高菌株生产潜力有重要意义。其种类繁多,种群复杂,形态差异大,且常会受到环境的影响,分类鉴定不易,常会引起争议。首次将COXⅢ基因用于真菌的遗传多样性分析,侧耳属菌种经PCR扩增和测序后得到13种侧耳属真菌的COXⅢ部分序列,并使用粒子群算法得到DNA序列的二维聚类图,用PHYLIP软件构建其系统演化树,探讨侧耳属真菌的系统亲缘关系。结果表明:金顶侧耳、桃红侧耳和鲍鱼菇彼此之间以及与其他侧耳属菌种的亲缘关系较远;阿魏蘑和白阿魏蘑之间的关系十分密切;糙皮侧耳、阿魏蘑、杏鲍菇关系较近。结合其他学者的研究和形态学证据,说明COXⅢ基因可以很好地对侧耳属进行遗传多样性分析。     

一株侧耳属野生菌的分离鉴定及初步驯化栽培

从天津宝坻区采集了一株野生真菌,对其进行分离鉴定。通过提取供试野生菌株的基因组,对其18S r DNA序列进行了扩增、测序,将所测的基因序列提交到GeneBank中进行BLAST比对,选取相似性较高的菌株,构建出系统发育树。利用18S rDNA序列分析法与传统分类法相结合的方法,鉴定出该野生真菌属担子菌纲(Basidiomycetes),伞菌目(Agaricales),侧耳科(Pleurotaceae),侧耳属(Pleurotus),为平菇菌株。进一步采用瓶栽技术驯化栽培子实体获得成功,平均有效生物学转化率可达50.4%。     

中国栽培平菇的RAPD分析

采用RAPD技术对我国大规模栽培的54个平菇商业菌株进行RAPD分析。结果表明,3l条随机引物中有10条引物对所有菌株扩增效果较好,共扩增出122条不同分子量的DNA条带。聚类分析表明,在阈值为20（约60％的相似水平）,可将供试菌株分成六大类：第一大类包括以肺形侧耳为代表的6个菌株;第二大类包括8个未定名菌株;第三大类包括糙皮侧耳为代表的20个菌株;第四大类包括以杂交种为代表的8个菌株;第五大类包括以佛罗里达侧耳为代表的5个菌株;第六大类包括以白黄侧耳为代表的7个菌株。     

食用菌家族新成员--桃红侧耳

1982年6月,笔者收到江西省宜丰县农科委送来的一株有荷叶大、美丽的野生菇（造纸厂的废料堆上采到）.经组织培养获得了纯菌株,编号为P82-1,将其驯化栽培而获得的子实体经福建三明真菌研究所黄年来先生鉴定为侧耳属萨门红侧耳.学名Pleurotus salmoneo-straminlus vassilieva.因子实体呈鲜桃红色而定名为桃红平菇.经多年来的驯化栽培,认为该菌适应性较广、出菇快、生物效率高,具有一定的食用、药用及观赏价值（见图1）.     

肺形侧耳种质资源拮抗反应及RAPD分子标记遗传多样性分析

[目的]分析肺形侧耳种质资源拮抗反应和遗传多样性,为肺形侧耳种质资源鉴定、合理利用和优良菌株遗传选育等提供参考依据.[方法]分别通过拮抗反应和RAPD分子标记对41个肺形侧耳菌株进行鉴定及遗传多样性分析,并对这2种方法的聚类分析结果进行比对及相关性分析.[结果]拮抗反应试验结果显示,仅有少数菌株与其他菌株间出现明显拮抗反应,多数菌株间无拮抗反应或拮抗较弱,可能存在同种异名的现象.基于拮抗反应进行聚类分析,结果显示在遗传相似性系数0.65处,可将41个肺形侧耳菌株分为五大类群,第I和III类群分别包括1个菌株,第II类群包括31个菌株,第Ⅳ类群包括4个菌株,第Ⅴ类群包括4个菌株,拮抗反应明显的肺形侧耳菌株聚在不同的类群,无拮抗反应或拮抗反应弱的菌株则聚在同一类群里.RAPD分析结果显示,15条RAPD引物共扩增出117个位点,多态性位点有96个,多态性比例为82.1%;41个肺形侧耳菌株遗传相似系数为0.51~1.00,在遗传相似系数0.84处可将41个肺形侧耳菌株分为五大类群,其中,第Ⅰ类群包括3个菌株,第II类群包括4个菌株,第III类群包括6个菌株,第Ⅳ类群仅包括1个菌株,剩余的菌株属于第Ⅴ类群,结合拮抗反应试验结果发现有明显拮抗反应的菌株聚在不同类群.拮抗反应和RAPD分析的聚类结果具有显著相关性(r=0.674,t=5.95),表明拮抗反应和RAPD分子和标记在反映肺形侧耳种质资源遗传多样性上具有较强的一致性,均能很好体现肺形侧耳种质的遗传关系.[结论]肺形侧耳菌株存在同种异名和同名异种现象.在实际生产中可选择亲缘关系较远的材料作为亲本菌株,以增加后代的遗传变异,从而选育出综合性状优良的肺形侧耳菌株.